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DOI: 10.3791/55745-v
Aintzane Apraiz*1, Jone Mitxelena*2,3, Ana Zubiaga2
1Department of Cell Biology and Histology,University of the Basque Country, UPV/EHU, 2Department of Genetics, Physical Anthropology and Animal Physiology,University of the Basque Country, UPV/EHU, 3Department of Molecular Mechanisms of Disease,University of Zurich
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents two cell synchronization protocols designed to analyze gene expression during specific phases of the cell cycle. The protocols are particularly useful for studying transcriptional events related to cancer and the effects of chemotherapy.
Riportiamo due protocolli di sincronizzazione delle celle che forniscono un contesto per studiare eventi legati a fasi specifiche del ciclo cellulare. Mostriamo che questo approccio è utile per analizzare la regolazione di geni specifici in un ciclo cellulare non selettivo o su esposizione ad agenti che interessano il ciclo cellulare.
L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di fornire un contesto per l'analisi dell'espressione genica in un modo specifico per il ciclo cellulare. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del cancro relative agli eventi trascrizionali dipendenti dal ciclo cellulare che sono alla base della trasformazione maligna e del trattamento antitumorale. Il vantaggio principale di questo protocollo è che stabilisce con precisione modelli di espressione genica specifici per la fase del ciclo cellulare sia nelle condizioni numero due che dopo l'esposizione alla chemioterapia.
Per questo esperimento vengono utilizzate cellule U2OS che dovrebbero essere seminate in piastre da 100 millimetri la sera intorno alle sette di sera, in modo che i passaggi successivi possano essere eseguiti durante l'orario di lavoro. Lasciare che le cellule si attacchino incubando le piastre a 37 gradi Celsius in un'atmosfera umidificata con il 5% di CO2 per 24 ore.
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