Name: Manipolazione e analisi dei processi dipendenti dal ciclo cellulare nel lievito in gemmazione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Impara a sincronizzare il ciclo cellulare in Saccharomyces cerevisiae per studiare la segregazione cromosomica durante la mitosi. Questo metodo consente di osservare la dinamica proteica in tempo reale.

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<table><tbody><tr><td>?-fattore</td><td>Struttura di Sintesi Core dell'Università dello Utah</td><td></td><td>Sequenza: WHWLQLKPGQPMY</td></tr><tr><td>Tubi Eppendorf da 1,5 mL</td><td>Assigeno</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>Mix dNTP 10mM</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0193</td><td></td></tr><tr><td>Tubi conici da 50 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>5x buffer di reazione Phusion HF</td><td>New England BioLabs</td><td>B0518S</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico, glaciale</td><td>Fisher Chemical</td><td>BP2401C-212</td><td></td></tr><tr><td>Sale di emisolfato di adenina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9126-100G</td><td></td></tr><tr><td>Agar, granulato</td><td>Apex Chemicals e Reagenti</td><td>20-275</td><td></td></tr><tr><td>agarosio</td><td>Prodotti di Apex Bioresearch</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore a vapore Autoclave Amsco Century</td><td>Steris</td><td>SV-1262</td><td></td></tr><tr><td>Acqua DI autoclaviata</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Auxina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#I3750-5G-A; CAS: 87-51-4</td><td></td></tr><tr><td>Cargille Laser Liquid</td><td>Laboratori Cargille</td><td>20130</td><td></td></tr><tr><td>D-Sorbitolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1876-500G</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (40,6-Diamidino-2-Fenilindolo, Diidrocloruro)</td><td>Sonde molecolari</td><td>Cat#D1306</td><td></td></tr><tr><td>Sale di sodio acido desossiribonucleico dai testicoli del salmone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1626</td><td></td></tr><tr><td>Destrosio</td><td>Fisher Chemical</td><td>D16-10</td><td></td></tr><tr><td>Tetraacetato di etilenediamina disodico</td><td>Fisher Chemical</td><td>S811-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Thermo Scientific</td><td>20688</td><td></td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ2 vs 2.14.0/1.54f</td><td>ImageJ2</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr><tr><td>Miscelatore a vortice a velocità fissa</td><td>VWR</td><td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&gQT=2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente DV Ultra</td><td>Leica</td><td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&utm_content=text_ad&utm_term=fluorescence%20microscopes&gad_source=1&gad_campaignid=170130111&gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td><td>Serial #: NV01063. Non più supportato</td></tr><tr><td>Formaldeide</td><td>Fisher Chemical</td><td>Cat#F79-500</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchiatura gel</td><td>Thermo Scientific</td><td>Owl EasyCast B1</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler DNA Ladder Mix</td><td>Fermentas</td><td>SM0333</td><td></td></tr><tr><td>Perline di vetro</td><td>Fisher Scientific</td><td>11312A</td><td></td></tr><tr><td>Vetri in vetro</td><td>VWR</td><td>48300-026</td><td></td></tr><tr><td>Innova 2300 Platform Shaker</td><td>New Brunswick</td><td>NB-2300</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga di laboratorio per tubi da 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>2525</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga da laboratorio per tubi da 50 mL</td><td>Eppendorf</td><td>5804</td><td></td></tr><tr><td>Diidrato di acetato di litio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4158-250G</td><td></td></tr><tr><td>Master ciclista Nexus X2</td><td>eppendorf</td><td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td><td></td></tr><tr><td>Micro-pipette p2, p20, p200 e p1000 con le corrispondenti punte</td><td>Rainin</td><td>L-2XLS+R, L-20XLS-R, L-200XLS-R, L-1000XLS-R</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura per microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541014</td><td></td></tr><tr><td>Nocodazolo</td><td>Calbiochimica</td><td>Cat#487928; CAS: 31430-18-9; Lot#B35705</td><td></td></tr><tr><td>Arancione G</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O7252</td><td></td></tr><tr><td>PIOLO</td><td>Ricerca Hampton</td><td>HR2-591</td><td></td></tr><tr><td>Peptone granulata&nbsp;</td><td>Bioreagenti Fisher</td><td>BP9725-5</td><td></td></tr><tr><td>Phusion HF DNA polimerasi</td><td>New England BioLabs</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-X</td><td>Rainin</td><td>PX-100R</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio, dibasico</td><td>Thermo Scientific</td><td>424195000</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio, monobasico</td><td>Thermo Scientific</td><td>424200025</td><td></td></tr><tr><td>Fonte di alimentazione</td><td>Bio-Rad</td><td>23786</td><td></td></tr><tr><td>Inizia ad acquisire Ultra 1.2.2</td><td>softWoRx Cytiva</td><td>Ottieni con DV Ultra</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Bioreagenti Fisher</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Rotatore a tubo</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Bagno d'acqua</td><td>VWR</td><td>WBE10A11B</td><td></td></tr><tr><td>Acqua, Ultra Pura</td><td>Prodotti di Apex Bioresearch</td><td>18-194</td><td></td></tr><tr><td>Estratto di lievito granulato</td><td>Bioreagenti Fisher</td><td>BP9727-5</td><td></td></tr></tbody></table>

manipolazione e analisi dei processi dipendenti dal ciclo cellulare nel lievito in gemmazione

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Manipolazione e analisi dei processi dipendenti dal ciclo cellulare nel lievito in gemmazione

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

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Delezione del gene e l'iperespressione delle proteine ​​sono metodi comuni per lo studio delle funzioni delle proteine. In questo articolo, descriviamo un protocollo per l'analisi del fenotipo di sviluppo in funzione della concentrazione di proteine ​​a popolazione e monocellulari...

Analisi dello sviluppo di un fenotipo morfologico come funzione della concentrazione di proteine ​​in lievito

Determinare la posizione del ciclo cellulare di una popolazione di cellule, o la comprensione di come i segnali influenzano la proliferazione, può essere facilmente misurato mediante citometria di flusso utilizzando questo protocollo. Riportiamo un semplice approccio sperimentale alla colorazione delle cellule e quantificare la loro posizione nel ciclo cellulare.

Analisi della posizione ciclo cellulare nelle cellule di mammifero

Vi presentiamo un semplice protocollo per ottenere filmati di microscopia a fluorescenza di crescita cellule di lievito, e un pacchetto software basato su GUI per estrarre i dati cella singola serie storica. L'analisi include lignaggio automatico e l'assegnazione a divisione di tempo integrato con ispezione visiva e curation manuale dei dati rilevati.

L&#39;acquisizione di fluorescenza filmati time-lapse di lievito in erba e Analisi Dinamica singola cella utilizzando innesti

Il lievito di fissione, SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE è un sistema modello eccellente per studiare citocinesi, la fase finale nella divisione cellulare. Qui si descrive un approccio microscopio per analizzare i diversi eventi cytokinetic in cellule fissione lieviti vivi.

Analisi spazio-temporale di Cytokinetic Eventi in lievito di fissione

Erba lievito è un modello vantaggioso per lo studio della dinamica dei microtubuli in vivo grazie ai suoi potenti genetica e la semplicità della sua citoscheletro microtubuli. Il seguente protocollo descrive come trasformare le cellule e la cultura di lievito, di acquisire immagini di microscopia confocale, e quantitativamente analizzare dinamica dei microtubuli in cellule di lievito viventi.

Ad alta risoluzione Imaging e analisi dei singoli microtubuli astrali Dynamics in germogliamento lievito

Inherent Dynamics Visualizer è un pacchetto di visualizzazione interattivo che si collega a uno strumento di inferenza della rete di regolazione genica per una generazione migliorata e semplificata di modelli di rete funzionali. Il visualizzatore può essere utilizzato per prendere decisioni più informate per la parametrizzazione dello strumento di inferenza, aumentando così la fiducia nei modelli risultanti.

Inherent Dynamics Visualizer, un'applicazione interattiva per la valutazione e la visualizzazione di output da una pipeline di inferenza di rete di regolazione genica

La microscopia time-lapse è uno strumento prezioso per studiare la meiosi nel lievito in erba. Questo protocollo descrive un metodo che combina la sincronizzazione del ciclo cellulare, la microscopia time-lapse e l'esaurimento condizionale di una proteina bersaglio per dimostrare come studiare la funzione di una proteina specifica durante la segregazione cromosomica meiotica.

Uso della microscopia time-lapse e della deplezione nucleare stadio-specifica delle proteine per studiare la meiosi in S. cerevisiae

Una sfida nell'analizzare gli esperimenti sincronizzati di serie temporali è che gli esperimenti spesso differiscono nella durata del recupero dalla sincronia e nel periodo del ciclo cellulare. Pertanto, le misurazioni di diversi esperimenti non possono essere analizzate in forma aggregata o facilmente confrontate. Qui, descriviamo un metodo per allineare gli esperimenti per consentire confronti specifici di fase.

Allineamento di dati di serie temporali sincronizzati utilizzando il modello caratterizzante della perdita di sincronia del ciclo cellulare per confronti cross-experiment

In questo articolo vi presentiamo un protocollo generale per misurare la durata della vita di replicazione delle cellule di lievito madre.

Durata pannello misura replicazione in lievito

Quantitativa vivo cellulare-microscopio a fluorescenza Analisi di lievito Fission

Impara a sincronizzare il ciclo cellulare in Saccharomyces cerevisiae per studiare la segregazione cromosomica durante la mitosi. Questo metodo consente di osservare la dinamica proteica in tempo reale.

Manipolazione e analisi dei processi dipendenti dal ciclo cellulare nel lievito in gemmazione

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