Visualizzazione dei focolai di DNA a singolo filamento nella fase G1 del ciclo cellulare

La risposta al danno del DNA è indispensabile per la vita. Poiché il DNA è costantemente esposto a vari motori dannosi, la mancanza della loro riparazione porta all'instabilità e alle malattie dei genomi. Abbiamo sviluppato un metodo basato sulle proprietà biologiche dell'RPA2, per visualizzare il tratto di DNA a singolo filamento durante la riparazione del DNA in diverse fasi del ciclo cellulare.

Il metodo tradizionale per la rilevazione del DNA a singolo filamento utilizza gli anticorpi BrdU. Questo approccio può essere utilizzato per replicare attivamente le cellule. Inoltre, questo anticorpo tende a reagire in modo incrociato con altri analoghi nucleotidici, limitandone l'uso.

A differenza del BRDU, il nostro approccio ha un rapporto segnale/rumore più elevato, che lo rende utilizzabile in ogni fase del ciclo. Comprendere l'azione delle diverse vie di riparazione del DNA nelle varie fasi del ciclo cellulare e delle cellule potenzialmente non replicanti è fondamentale. Il nostro protocollo fornisce un nuovo approccio e uno strumento per visualizzare i focolai di DNA a singolo filamento, dove gli approcci classici che utilizzano BrdU sono limitati.

Una comprensione completa dei processi di riparazione del DNA potrebbe servire come bersagli terapeutici per trattare il cancro, l'invecchiamento e le malattie neurologiche. La maggior parte delle nostre cellule sono terminalmente differenziate e quindi non si replicano e non si dividono. È fondamentale ottenere una migliore comprensione di come queste cellule riparano varie lesioni del DNA.

Pertanto, il nostro laboratorio si concentrerà principalmente sui processi di riparazione del DNA post-replicativo e sullo sviluppo di nuovi strumenti per studiarli.