Name: Tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata Mouse per aiutare liniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Impara la tomografia ottica di coerenza ad alta risoluzione per la terapia genica retinica nel topo. Questo metodo permette il monitoraggio in tempo reale delle iniezioni sottoretiniche e la valutazione della vitalità dei fotorecettori.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo materiale si basa su lavori sostenuta, in parte, dal Department of Veterans Affairs (VA), Veterans Health Administration, ufficio di ricerca e sviluppo (laboratorio ricerca e sviluppo biomedico) (Grant Merit VA 1I01BX000669). JMS è impiegato, in parte, come il personale medico-scienziato, oftalmologia, da WNY VA; MCB è impiegato, in parte, da VA WNY. Lo studio è stato condotto presso e in parte supportato da, il sistema del Healthcare di New York di Veterans Administration Western (Buffalo, NY). Contenuti non rappresentano le opinioni di Department of Veterans Affairs o di governo degli Stati Uniti. Supportati anche, in gran parte, di NIH/nia R01 concedere EY013433 (PI: JMS), NIH/nia R24 concedere EY016662 (UB Vision infrastruttura Center, PI: M macellazione, direttore - biofotonica modulo: JMS), una sovvenzione illimitata per il dipartimento di Oftalmologia/Università presso Buffalo da ricerca per prevenire la cecità (New York, NY) e una sovvenzione dalla Fondazione Oishei (Buffalo, NY). Riconosciamo il dono di hC1 transgenici RHOP347S linea e il mouse dell'esone 1 RHO knockout da Dr. Janis Lem (Tufts New England Medical Center, Boston, MA) e il dono del modello transgene NHR-E nella condizione eterozigotica sul esone 2 RHO knockout priorità bassa del mouse dalla d. ssa G. Jane Farrar e Peter Humphries (Trinity College, Dublino, IRE).

<ol><li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li>
<li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li>
<li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li>
<li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li>
<li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li>
<li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21993172">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li>
<li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li>
<li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808(2016).</li>
<li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Science%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li>
<li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23489150">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li>
<li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li>
<li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17389515">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye%3A+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494(2014).</li>
<li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images%5BTitle%5D)+AND+%22TVST%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9(2015).</li>
<li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li>
<li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286(2012).</li>
<li>Berger, A., al,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye%3A+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoSOne%22%5BJournal%5D)">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494(2014).</li>
<li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , Clifton, NJ. (2013).</li>
<li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0042698901002309">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li>
<li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523(2015).</li>
<li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030(2015).</li>
<li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247(2015).</li>
<li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel%2C+real-time%2C+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li>
<li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li>
<li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203(2014).</li>
<li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S%3A+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li>
<li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2248236/">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li>
<li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+%28Pro23His%29%3A+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li>
<li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li>
<li>Hruby, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/13155497">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li>
<li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li>
<li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523(2015).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li>
<li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+brief%3A+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li>
<li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li>
</ol>

Rapporti commerciali: MCB: nessuno; JMS: nessuno. L'imaging system (RIS)23 utilizzato in questo studio di retinico è un nuovo dispositivo di notevole utilità per qualsiasi gruppo che cerca di condurre studi di consegna di terapia genica in topi, roditori o piccoli animali. Mentre gli autori non hanno nessun conflitto di dichiarare nei confronti di questo dispositivo in questo momento, l'Università di Buffalo - SUNY e il Veterans Administration dispone dei diritti di proprietà intellettuale e può cercare di commercializzare questo strumento in futuro.

HR-SD-OCT fornisce un metodo semplice per la caratterizzazione dei potenziali modelli animali della malattia umana per determinare la loro utilità nella prova terapeutica potenziale. La capacità di rapido e affidabile caratterizzano un potenziale modello animale della malattia umana è fondamentale per il processo di scoperta della droga terapeutica (ad es., sostituzione terapia genica, la terapia genica atterramento ribozima o shRNA, terapia genica combinato). HR-SD-OCT fornisce un metodo semplice, rapido e non ...

I ricercatori stanno sviluppando terapie geniche per una varietà di malattie degenerative della retina e della retina con la speranza di tradurre approcci terapeutici in trattamenti per la malattia umana1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. tempo dominio o tomografia a coerenza ottica dominio spettrale (SD-OCT) è stata utilizzata per indagare gli aspetti di degenerazione retinica esterna in modelli murini specifici di malattia12,13,14 . HR-SD-OCT non, tuttavia, è stato ampiamente utilizzato nel contesto della valutazione di modelli murini di ottimizzazione per determinare il tasso e l'omogeneità spaziale di degenerazione retinica, o nel contesto della valutazione preclinica di gene base terapeutica, ad esempio, a valutare l'estensione spaziale di vettore consegna8,15,16, tossicità o salvataggio. Una volta che un modello del topo è completamente caratterizzato, i dati di HR-SD-OCT possono servire come una risorsa informativa e affidabile per misurare l'impatto di terapeutica di esercitare tossicità in modelli murini di degenerazione retinica17o salvataggio. Molti gruppi sono tramite iniezione subretinal come metodo di consegna del vettore grazie alla sua efficienza alle transducing fotorecettori e cellule del pigmento retinico epitelio (RPE). Tuttavia, questo rimane un metodo difficile da padroneggiare, dato che essa viene in genere eseguita dalla chirurgia mano libera dalla superficie cornea e spesso è irto di cataratta, emorragia e le separazioni retiniche non intenzionali che accadono semplicemente tramite manipolazione del posteriore vitreo. Molti gruppi ancora tentano subretinal iniezioni ciecamente e consegnare il virus utilizzando iniezioni manuali con diametro relativamente grande in acciaio inox aghi (34G)8,17,18,19 ,20,21,22e alcuni usi tomografia a coerenza ottica (OCT) imaging per confermare la corretta consegna del vettore al retina8,17, 20 , 22. alcuni miglioramenti nel metodo recentemente sono state descritte usando gli aghi su microscala, guidati da un micromanipolatore22.
Vi presentiamo un approccio integrato che agevola il posizionamento dell'ago e le iniezioni sono facilitate da un oftalmoscopio stereo diretto personalizzato progettato in laboratorio specificamente per la visualizzazione all'interno dell'occhio piccolo del mouse17, 23. l'uso di micro aghi di vetro tirato in combinazione con il micromanipolatore stereotassiche forniscono un miglior controllo del posizionamento dell'ago con alcun taglio chirurgico giù richiesto (vale a dire, attraverso la congiuntiva e del tessuto connettivo) prima di iniezione. L'uso della pressione regolata iniettore micro aiuta a consegnare volumi di iniezione coerente, e l'iniezione può essere fatto con maggiore stabilità, precisione e molto più lenta di iniezioni manuali eseguite da una siringa portatile, diminuendo in tal modo la avvenimento di iniezione bolla nell'occhio. L'ago più piccolo aiuta a prevenire perdite dopo ritiro di ago perché il percorso è autosigillante. Per valutare la portata dell'iniezione/consegna, molti gruppi investigativi si basano sulla ricerca e la valutazione dell'estensione area di fluorescenza verde avanzata espressione della proteina (EGFP) nella retina (costrutto di espressione consegnato dal vettore) all'estremità sperimentale punto (eutanasia) per confermare il successo iniezioni11,19,20,24. Questo approccio (che non utilizzano OCT) per verificare il successo chirurgico rifiuti una quantità enorme di risorse in tempo chirurgico procedurale e gli animali, dato che tutti gli animali con guasti chirurgici (sconosciuti) devono essere mantenuti, seguita con misure ripetitive fino al eutanasia e occhio vendemmia (quando EGFP è misurata). Conferma della posizione di iniezione nella retina può essere migliorata utilizzando HR-SD-OCT per dimostrare che l'iniezione è situato tra gli strati corretti della retina (cioè lo spazio subretinal). HR-SD-OCT è utilizzabile anche per delineare immediatamente tentativi infruttuosi (guasti chirurgici) per identificare le variabili rilevanti in tempo reale chirurgico per migliorare l'approccio. Abbiamo trovato che HR-SD-OCT fornisce numerosi vantaggi nel gene preclinici terapia studi consentendo la rapida valutazione quantitativa della degenerazione retinica esterna, consentendo l'identificazione/abbattimento di animali di studio che non soddisfano i criteri sperimentali ( ad esempio, iniezione subretinal non corretto) e a dirigere la formazione immagine di follow-up nella regione dell'occhio dove il vettore è stato consegnato (dove è più probabile effetto preclinico) così come le aree dove non è stato recapitato vettoriale controlli. Dal suo sviluppo, l'uso di SD-OCT ha continuato ad essere accettati e utilizzati da ricercatori di oftalmologia ed è ora considerato lo standard di imaging retinico in studi scientifici retinici in mouse o roditore modelli13,25. HR-SD-OCT e le sue capacità di software sono stati utilizzati in modi unici integrati per portare avanti l'obiettivo di successo quantitativa di terapia genica in modelli murini in ogni fase del processo, tra cui selezione modello animale, caratterizzazione di degenerazione nella vostra modelli di malattia, consegna terapeutico, mappatura di consegna del vettore e la valutazione di efficacia/tossicità. L'uso di HR-SD-OCT permette per la scoperta di nuovi farmaci più efficiente ad ogni livello del processo. Qui descriviamo questi approcci che vengono utilizzati nel nostro programma di RNA Drug Discovery.

<table><tbody><tr><td>C57BL6 (J)</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>N129R-N</td><td>/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2HRho 1T/1T</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Envisu R-2200 Strumento per tomografia a coerenza oculare (OCT)</td><td>Bioptigen</td><td>90-R2200-U1-120.&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di imaging retinico (RIS)</td><td>Microscopio interno</td><td>Stemi</td><td></td></tr><tr><td>2000C</td><td>Zeiss</td><td>000000-1106-133</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Estrattore per micropipette fiammeggiante/marrone</td><td>Strumento Sutter Co</td><td>p-97</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore MMN-33&nbsp;</td><td>Narishige USA</td><td>MMN-33</td><td></td></tr><tr><td>PLI-100&nbsp; micro iniettore</td><td>Harvard Apparatus</td><td>64-1736</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per micropipette (rotante)</td><td>Contenitore per</td> micropipette <td>N/A</td><td></td>interno</tr> World <tr><td></td><td>Precision Instruments Inc.</td><td>E210</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Tubi capillari in vetro borosilicato 1,5-1,8 X 100 mm,&nbsp;</td><td>Apparecchio Harvard</td><td>30-0053</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-tribromoetanolo</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>T48402-25G</td><td></td></tr><tr><td>Alcool terz-amilico</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>240486-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione oftalmica di atropina solfato, USP 1%</td><td>Akorn Inc.</td><td>NDC 17478-215-05</td><td></td></tr><tr><td>Goniovisc</td><td>BioVision Limited</td><td>NDC 17238-610-15</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione oftalmica di ciclopentolato cloridrato, USP&nbsp; 2%</td><td>Akorn Inc.</td><td>NDC 17478-097-10</td><td></td></tr><tr><td>Unguento al solfato di gentamicina USP, 0,1%</td> <td>Perigo</td><td>NDC 45802-046-35</td><td></td></tr><tr><td>Systane Ultra</td><td>Alcon Laboratories, Inc.</td><td>9006619-1013</td><td></td></tr><tr><td>Tetracaina cloridrato</td><td>Bausch e Lomb</td><td>NDC 24208-920-64</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione oftalmica, USP 0,5%</td> <td>Bausch e Lomb</td><td>NDC 24208-920-64</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Preparazioni virali</td><td>ViGene /UNC</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Nanorods d'oro</td><td>NANOPARTz</td><td>D12M-850-1.75</td><td></td></tr><tr><td>Fluoresceina Solfato AK-FLUOR 25%</td><td>Akorn Inc.</td><td>NDC 17478-250-20</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-548-A</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>Milton</td><td>18-825</td><td></td></tr><tr><td>Aghi 30 calibro</td><td>Beckton Dickenson &nbsp;</td><td>W11604</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe</td><td>Beckton Dickenson &nbsp;</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>Pacchetto software Bioptigen</td><td>Bioptigen</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Proparacaina cloridrato Soluzione oftalmica, USP 0,5%</td><td>Akorn Inc.</td><td>NDC 17478-263-12</td><td></td></tr><tr><td>Windows Excel</td><td>Microsoft</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>Adobe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bilancia</td><td>Mettler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici</td><td>World Precision Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Punzone per le orecchie</td><td>Nat' l band</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CL 100 Sorgente luminosa</td><td>Welch Allyn</td><td>CL100</td><td></td></tr><tr><td>Azoto</td><td>gassoso Jackson Fornitura di saldatura</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bagno d'acqua riscaldato</td><td>Neslab</td><td>RTE-140</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>In House</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tappetino riscaldante</td><td>Cincinnatti Sub Zero</td><td>273</td><td></td></tr><tr><td>Clay porta mouse</td><td>Plast.i.clay Argilla d'arte americana Co.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>MedLine&nbsp;</td><td>NDC53329-938-06</td><td></td></tr><tr><td>Applicatori con punta in cotone American</td><td>Health Service</td><td>Ctag</td><td></td></tr><tr><td>EtOH 70%</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-100</td><td></td></tr><tr><td>Guanti in nitrile</td><td>VWR</td><td>89038-272</td><td></td></tr><tr><td>Diagnosys ERG Color Dome strumento</td><td>Diagnosys Inc.</td><td>D125</td><td></td></tr><tr><td>Lenti a contatto</td><td>In-house</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Diagnosys Software</td><td>Diagnosys Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Origin 6.1 software</td><td>OriginLab Corp.</td><td>N/A Elettrodi</td><td></td></tr><tr><td>di riferimento</td><td>Ocuscience</td><td>F-Thread Electrode (DTL) 24"</td><td></td></tr></tbody></table>

tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata mouse per aiutare l'iniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

HR-SD-OCT è utilizzata per monitorare la progressione della degenerazione dei fotorecettori in modelli murini dal vivo, valutare la consegna degli agenti terapeutici nello spazio subretinal e per valutare la tossicità e l'efficacia in vivo. HR-SD-OCT utilizza nel vicino infrarosso (800-880 nm) e ha ottica specificamente progettato per l'unica ottica dell'occhio del mouse con risoluzione assiale sub-2 micron. Modelli murini transgenici di degenerazione retinica esterna (fotorecettori) e i controlli erano imaged per valutare la progressione di malattia. Vetro tirato microaghi erano usati per fornire sub retiniche iniezioni di virus adeno-associato (AAV) o nanoparticelle (NP) tramite un approccio trans-sclerale e trans-coroideale. Attento posizionamento dell'ago nello spazio subretinal è stato richiesto prima di un'iniezione di pressione calibrata, che trasporta il fluido nello spazio retinico sub. Tempo reale subretinal chirurgia è stato condotto su nostro retinica imaging system (RIS). HR-SD-OCT ha dimostrato la progressiva degenerazione retinica uniforme dovuto l'espressione di un tossico rodopsina mutante umano mutante (P347S) (RHOP347S) transgene in topi. HR-SD-OCT permette rigorosa quantificazione di tutti gli strati della retina. Strato nucleare esterno (ONL) del fotoricettore e spessore segmento esterno (OSL) misure di lunghezza si correlano con la vitalità dei fotorecettori, degenerazione o salvataggio. Il sistema di consegna RIS consente la visualizzazione in tempo reale delle iniezioni subretinal in neonatale (~ P10-14) o topi adulti e HR-SD-OCT immediatamente determina il successo di consegna e mappe estensione areale. HR-SD-OCT è un potente strumento che può valutare il successo della chirurgia subretinal in topi, inoltre a misurare la vitalità di fotorecettori in vivo. HR-SD-OCT consente anche di identificare coorti uniforme animale per valutare l'entità della degenerazione retinica, la tossicità e soccorso terapeutico in studi di ricerca di terapia genica preclinici.

Valutazione della presenza, tasso e uniformità del modello di degenerazione retinica per esterno Misurazioni della ONL sono stati registrati dall'OPL a Olmo, definire i limiti di ONL utilizzando lo strumento pinza fornito nel software dello strumento. L'obiettivo era di mappare la progressione della degenerazione retinica esterna in un modello murino di adRP parzialmente umanizzato. Immagini comparabili da un C57BL/6(J) di controllo mouse e un mWT hC1/hC1 / / / modello...

Qui dimostriamo un nuovo approccio all'utilizzo di tomografia a coerenza ottica spectral-domain ad alta risoluzione (HR-SD-OCT) per assistere la consegna degli agenti di terapia genica nello spazio subretinal, valutare la sua copertura area e caratterizzano la vitalità del fotoricettore.

Tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata Mouse per aiutare l'iniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

L'obiettivo generale di questa procedura di iniezione subretinica è quello di fornire un vettore alla retina in modo minimamente invasivo e riproducibile che sia osservabile in tempo reale. Ciao, questo metodo può essere utilizzato per rispondere a domande chiave nella ricerca sulla terapia genica sull'efficacia della consegna vettoriale e sulla tossicità degli agenti terapeutici. Alcuni vantaggi di questa tecnica includono danni minimi alla retina e ad altre strutture oculari, una precisa mappatura del sito di iniezione e rigorose misurazioni quantitative in vivo che consentono una solida inferenza statistica.Per l'iniezione intraoculare di transgene, posizionare prima un mouse anestetizzato sullo stadio di visualizzazione di un microscopio del sistema di imaging retinico e posizionare le punte di un'iride smussata sterile alle posizioni delle sette e delle 10 della palpebra mentre si spingono le forcep aperte e verso il basso per indurre delicatamente la proptosi. Usa le pinie per convincere le palpebre sotto il globo oculare e dirigere la punta dell'ago a circa uno o 1,5 millimetri sotto il bordo del limbo corneale. Quindi, applicare una goccia di soluzione PBS sterile sull'occh

ultrahigh-resolution-mouse-optical-coherence-tomography-to-aid

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Questo video dimostra una tecnica di imaging in vivo per rilevare e quantificare l'infiammazione oculare in un modello murino di uveite post-infettiva. La tecnica, nota come tomografia a coerenza ottica (OCT), genera immagini in sezione trasversale ad alta risoluzione dell'occhio per valutare la progressione della malattia.

Imaging con tomografia a coerenza ottica per la valutazione dell'uveite in un modello murino

Fonte: Jagodzinska, J., et. al., Tomografia a coerenza ottica: imaging delle cellule gangliari retiniche del topo In Vivo. J. Vis. Exp. (2017) &lt;br /&gt; In questo video, dimostriamo l'uso della tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare gli strati retinici e valutare i cambiamenti strutturali in un modello murino geneticamente modificato con neuropatia ottica.

Imaging in vivo della retina di topo mediante tomografia a coerenza ottica

L'iniezione sottoretinica è una tecnica chirurgica per la consegna efficace di geni all'epitelio pigmentato retinico nell'occhio del topo.  Qui descriviamo un metodo semplice e replicabile per l'iniezione sottoretinica di vettori virali nell'epitelio pigmentato retinico in topi sperimentali.

Limbare Approccio-sottoretinico iniezione di vettori virali per la terapia genica nei topi retina epitelio pigmentato

Questo manoscritto descrive un protocollo per l'imaging in vivo della retina di topo con tomografia a coerenza ottica ad alta risoluzione spettrale dominio (SD-OCT). Si concentra sulle cellule retiniche del ganglio (RGC) nella regione peripapillare, con diverse analisi e quantificazione approcci descritti.

Tomografia a coerenza ottica: Imaging Mouse ganglionari cellule In Vivo

Questo protocollo descrive come ad alta definizione tecniche di imaging come la tomografia ottica di coerenza di dominio spettrale e scansione laser oftalmoscopia può essere utilizzata in piccoli roditori, utilizzando un sistema di piattaforma di imaging oftalmico, per ottenere informazioni su lo spessore retinico e microglial cellula distribuzione, rispettivamente.

In Vivo Imaging dei topi Reporter Cx3cr1gfp/gfp con tomografia a coerenza ottica Spectral-domain e scansione Laser oftalmoscopia

Un protocollo dettagliato per la valutazione delle letture strutturali e visivi in roditori dalla risposta di tomografia e optokinetic ottica di coerenza è presentato. I risultati forniscono informazioni preziose per la ricerca oftalmologica, nonché neurologica.

Tramite tomografia ottica di coerenza e risposta Optokinetic come strutturale e funzionale sistema visivo letture in topi e ratti

Qui, descriviamo l'uso della tomografia a coerenza ottica di dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare strutture retiniche e oculari in vivo in modelli di degenerazione retinica, glaucoma, retinopatia diabetica e miopia.

Valutazioni strutturali in vivo della malattia oculare in modelli di roditori mediante tomografia a coerenza ottica

Qui, descriviamo una tecnica di imaging in vivo che utilizza la tomografia a coerenza ottica per facilitare la diagnosi e la misurazione quantitativa della retinopatia nei topi.

Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

Il presente protocollo delinea i passaggi per l'allineamento in vivo delle immagini in fibra di tomografia a coerenza ottica a luce visibile (vis-OCTF) con le immagini confocali ex vivo della stessa retina murina allo scopo di verificare la morfologia osservata del fascio assonale delle cellule gangliari retiniche nelle immagini in vivo .

Allineamento di fibrogrammi per tomografia a coerenza ottica a luce visibile con immagini confocali della stessa retina murina

Le iniezioni sottoretiniche sono una tecnica indispensabile per lo sviluppo preclinico di terapie per le malattie dei fotorecettori e dell'EPR. Descriviamo una tecnica di iniezione sottoretinica transsclerale ottimizzata nei topi che migliora le percentuali di successo intraoperatorio e riduce al minimo il danno retinico.

Tecnica di iniezione sottoretinica transsclerale minimamente invasiva ottimizzata nel topo

Impara la tomografia ottica di coerenza ad alta risoluzione per la terapia genica retinica nel topo. Questo metodo permette il monitoraggio in tempo reale delle iniezioni sottoretiniche e la valutazione della vitalità dei fotorecettori.

Tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata Mouse per aiutare liniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica (Video) | JoVE Journal

Tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata Mouse per aiutare l'iniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica

Esplora altri video