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DOI: 10.3791/56630-v
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This manuscript describes the applications of proton-selective electrodes and patch clamping methods to measure the activity of proton transport systems. These methods provide improved sensitivity and control over the intracellular environment compared to traditional techniques.
Questo manoscritto descrive le applicazioni di elettrodi selettivi protone e patch metodi di bloccaggio per misurare l'attività dei sistemi di trasporto di protoni. Questi metodi di superare alcuni limiti delle tecniche comunemente usate per studiare l'attività di trasporto di protoni, come moderata sensibilità, risoluzione temporale e controllo insufficiente milieu intracellulare.
Il metodo dei cerotti giganti combinati con microelettrodi iono-selettivi è un metodo versatile utilizzato per rilevare e quantificare i flussi ionici. Nello specifico, viene utilizzato per misurare i flussi di protoni generati dall'attività del trasportatore di ioni elettroneutri, lo scambiatore sodio-idrogeno o NHE, che è espresso sulla membrana cellulare. Lo scambiatore sodio-idrogeno genera un gradiente di protoni in prossimità della membrana plasmatica, qui indicato come un anello arancione.
Questo gradiente di protoni attraverso la membrana cellulare viene misurato mediante registrazione del patch clamp dell'intera cellula combinata con una tecnica che utilizza un microelettrodo selettivo per i protoni. Il microelettrodo selettivo per i protoni viene spostato vicino alla superficie della cella, dove registra il flusso di protoni che escono dalle celle, mostrato qui in posizione A.E lontano dalla superficie della cella, dove registra la concentrazione di protoni liberi presenti nella soluzione indicata dalla posizione B.E poi, di nuovo in posizione A, vicino alla membrana cellulare, in un movimento ripetitivo e oscillatorio. La differenza di tensione da A a B viene registrata e dipende dal rappresentante dell'attività NHE.
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