Ricostituzione assistita da detergenti della Drosophila ricombinante Atlastin in Liposomi per i saggi che mescolano i lipidi

Il protocollo di ricostituzione e fusione qui dettagliato è un modo efficiente per studiare le proteine legate alla membrana in un modello di bistrato lipidico e miscelazione lipidica da parte delle proteine di fusione. Qui descriviamo una ricostituzione assistita da detergente della drosophila atlastina ricombinante, una proteina di fusione ER, in liposomi fosfatidilcolini preformati. La fusione dei proteoliposomes di atlastina viene quindi misurata da un saggio di miscelazione lipidica a base di FRET.

Uno dei principali vantaggi della ricostituzione assistita da detergenti è che la proteina nel detergente non è esposta all'essiccazione o ai solventi. Mostriamo anche qui che l'orientamento alla ricostituzione dell'atlastina è molto efficiente. Un altro vantaggio del saggio di miscelazione lipidica a base di FRET è che i liposomi non devono essere caricati con alcun colorante e non è necessario alcun passo dialisi extra.