Un dispositivo di riscaldamento / contenimento contemporaneo per iniezioni efficienti della vena della coda in un modello di sepsi fungina murina

Il dispositivo di riscaldamento e contenimento offre una tecnica semplificata per condurre con successo iniezioni endovenose della vena caudale, fornisce riscaldamento in un ambiente controllato e una manipolazione efficace per condurre l'iniezione endovenosa della vena caudale. Prima di provare la tecnica, è importante familiarizzare con il protocollo e fare pratica con le iniezioni di soluzione salina. La dimostrazione visiva offre l'opportunità di mostrare suggerimenti e avvertenze per aiutare con la procedura.

Junko Yano, postdoc nel mio laboratorio, installerà l'attrezzatura e io dimostrerò la procedura. Per inizializzare il dispositivo di riscaldamento, controllare l'unità di riscaldamento su un piano di lavoro piatto pulito e accenderla, assicurandosi che l'indicatore di alimentazione del termostato lamp è acceso in verde. Quindi posizionare il materiale di lettiera all'interno della camera di riscaldamento per mantenere l'area asciutta e trattenere il calore.

Per l'installazione del dispositivo di ritenuta, posizionare l'unità di ritenuta accanto all'unità di riscaldamento e determinare le dimensioni del cono appropriate per l'animale. Regolare manualmente le larghezze della base del cono flessibile in alluminio per fornire un'adeguata ritenuta per l'animale. In alternativa, è possibile sostituire il cono con modelli personalizzati per ospitare animali di varie dimensioni.

Impostare il termostato sulla temperatura desiderata utilizzando la manopola di controllo, assicurandosi che l'indicatore del riscaldatore sia acceso in rosso e che la lampadina sia accesa. Monitorare attentamente il display della temperatura interna mentre la lampadina è accesa. Si attiverà automaticamente una volta raggiunta la temperatura target.

Posizionare l'altezza del cono della piattaforma di ritenuta al livello ottimale per l'utente con la manopola di regolazione dell'altezza. Una volta raggiunta la temperatura target, trasferire delicatamente gli animali dalla gabbia di stabulazione alla camera di riscaldamento. La camera di riscaldamento può contenere in sicurezza da quattro a sei topi o un ratto per un massimo di 20-30 minuti.

Il trattamento termico da 5 a 10 minuti è sufficiente per indurre la vasodilatazione e migliorare la visibilità delle vene della coda. Monitora l'animale per eventuali segni di stress da calore acuto come respirazione rapida, letargia o comportamento di fuga dal salto. Rimuovere l'animale dalla camera sollevandolo per la base della coda e posizionarlo sull'apertura del cono dell'unità di immobilizzazione.

Mentre l'animale si aggrappa al bordo più lontano del cono con le zampe anteriori, tira delicatamente la coda all'indietro e passa la coda attraverso la fessura aperta. Fissare una delle zampe posteriori che sporgono dal cono in modo che la vena laterale sia visibile a ore 12. Afferrare la coda a metà fino a 2/3 della lunghezza con la mano non dominante tra il pollice e l'indice, esercitando una leggera tensione sulla vena laterale per mantenere il posizionamento e la vasodilatazione della coda.

Pulire la pelle del sito di iniezione con una spugna di garza o un tampone inumidito con alcool al 70%. Tenere la siringa con la mano dominante e posizionare l'ago parallelamente alla coda. Inserire l'ago verso la direzione del flusso sanguigno con un angolo compreso tra 10 e 25 gradi e avanzare ulteriormente nel lume della vena penetrando da due a quattro millimetri.

Iniettare lentamente la soluzione. In caso di resistenza o vesciche bianche sopra il sito di iniezione, rimuovere l'ago e tentare una seconda iniezione in un sito al di sopra del posizionamento originale dell'ago. Se l'iniezione di una vena laterale non ha successo, riposizionare l'animale sul lato opposto e fare più tentativi sulla vena controlaterale.

Rimuovere l'ago e premere con decisione il sito di iniezione con il pollice per evitare il riflusso della soluzione iniettata o del sangue. Continuare ad applicare una leggera compressione con una garza pulita o un panno di fazzoletto fino a quando l'emorragia non si ferma. Rimetti l'animale nella sua gabbia e monitoralo per cinque minuti, assicurandoti che l'animale riprenda la normale attività senza ulteriori sanguinamenti.

Una volta attivato il riscaldatore della camera di riscaldamento, l'emissione di calore da parte della lampadina aumenta rapidamente la temperatura interna durante i primi 5-15 minuti, a seconda della temperatura target. Il riscaldatore disattiva la lampadina se la temperatura interna rilevata supera la temperatura impostata. Successivamente, il dispositivo ripete automaticamente il ciclo di calore per mantenere la temperatura interna.

In un modello murino di candidosi del flusso sanguigno con conseguente sepsi, una provocazione endovenosa con Candida albicans nei topi svizzeri Webster ha causato una rapida insorgenza di sepsi e disseminazione degli organismi, portando a un'elevata mortalità entro tre o quattro giorni. Al contrario, gli animali potrebbero essere protetti dalla sepsi mediante pre-immunizzazione o vaccinazione con un ceppo avirulento di Candida dubliniensis, raggiungendo una sopravvivenza superiore al 95% dopo la sfida letale per via endovenosa con C. albicans virulento. Gli animali non vaccinati con infezione letale hanno avuto un aumento significativo della morbilità indotta dalla sepsi, mentre il gruppo vaccinato ha mostrato sintomi minimi dopo la sfida letale.

I risultati in termini di mortalità progressiva rispetto alla protezione mediata dal vaccino sono stati ottenuti in modo riproducibile in quattro esperimenti indipendenti. Fare attenzione quando si posiziona l'animale nel cono che si angola correttamente l'ago per accedere alla vena, regolare l'ago nella vena e iniettare la vena. Questa tecnica semplificata offre un mezzo efficiente ed efficace per condurre iniezioni della vena caudale che miglioreranno i risultati scientifici dei ricercatori.