Name: Un modello di ratto di pouchite dopo proctocolectomia e anastomosi anale con destrano solfato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 5 s
Description: Scopri come stabilire un modello di ratto di pouchite mediante chirurgia IPAA e trattamento con DSS al 4%. Questo metodo fornisce una piattaforma solida per studiare la patogenesi e valutare nuovi trattamenti.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modello sperimentale di acacite di ratto per lo studio della patogenesi e del trattamento della colite ulcerosa

<ol><li>Yang, M. L., Brar, M. S., Kennedy, E. D., De Buck Van Overstraeten, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+versus+transanal+IPAA+for+ulcerative+colitis%3A+A+patient-centered+treatment+trade-off+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Colon+Rectum%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic versus transanal IPAA for ulcerative colitis: A patient-centered treatment trade-off study.</a> Dis Colon Rectum. 67 (1), 107-113 (2024).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Etanolo anidro</td><td>Tianjin Fengchuan Chemical Reagent Technology Co., Ltd</td><td>Cina</td><td>Ematossina-eosina Colorazione</td></tr><tr><td>destrano solfato di sodio</td><td>&nbsp; Yeasen&nbsp;</td><td>60316ES76</td><td>Utilizzato per indurre l'infiammazione della sacca</td></tr><tr><td>Soluzione di formaldeide</td><td>Tianjin Zhiyuan Reagent Company</td><td>Cina</td> Garza per <td>colorazione dell'ematossina-eosina</td></tr><tr><td></td><td>Jiangxi Zhonggan Medical Equipment Company</td><td>Cina</td><td>Utilizzato per la microchirurgia animale</td></tr><tr><td>Ematossilina</td><td>Pechino Zhongshan Jinqiao Company</td><td>Cina</td><td>Colorazione dell'ematossina-eosina</td></tr><tr><td>Interferone e gamma; &nbsp; Kit di reagenti per la rilevazione</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA049Ra</td><td>Rilevamento di fattori infiammatori</td></tr><tr><td>Kit per la rilevazione di interleuchina-10</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA056Ra</td><td>Rilevamento di fattori infiammatori</td></tr><tr><td>Kit di rilevamento di interleuchina-17</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA063Ra</td><td>Rilevamento di fattori infiammatori</td></tr><tr><td>Kit di rilevamento di interleuchina-6</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA079Ra</td><td>Rilevamento di fattori infiammatori</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Tangpai Medical Equipment Co., Ltd</td><td>Cina</td><td>Utilizzato per la microchirurgia animale</td></tr><tr><td>Strumenti di manipolazione microscopica</td><td>Aesculap</td><td>Germania</td><td>Utilizzato per la microchirurgia animale</td></tr><tr><td>Occludina</td><td>abcam ab216327</td><td></td><td>Test immunoistochimici</td></tr><tr><td>Ago da cucito</td><td>Yangzhou Fuda Medical Equipment Co., Ltd</td><td>Cina</td><td>Utilizzato per la microchirurgia animale</td></tr><tr><td>fattore di necrosi tumorale & alfa; Kit di reagenti di rilevamento</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA133Ra</td><td>Rilevamento di fattori infiammatori</td></tr><tr><td>Microscopio chirurgico binoculare per due persone</td><td>OPTON</td><td>Germania</td><td>Utilizzato per la microchirurgia animale</td></tr><tr><td>Xilene</td><td>Tianjin Yingda Fabbrica di reagenti rari e preziosi</td><td>Cina</td><td>Colorazione con ematossina-eosina</td></tr></tbody></table>

un modello di ratto di pouchite dopo proctocolectomia e anastomosi anale con destrano solfato

A Rat Model of Pouchitis Following Proctocolectomy and Ileal Pouch-Anal Anastomosis Using Dextran Sulfate Sodium

Valutazione delle condizioni generali dei ratti modello di sacca ileale dopo l'insediamento Dopo che l'operatore ha superato la curva di apprendimento chirurgico IPAA, i ratti hanno tollerato bene l'intervento chirurgico, con una durata chirurgica di 192,94 minuti ± 27,15 minuti, e si sono verificate meno complicanze postoperatorie. Durante il primo periodo postoperatorio, i ratti hanno sperimentato una diminuzione dell'assunzione con la dieta, ma il loro appetito preoperatorio è stato ripristinato entro 10-14 giorni dopo l'intervento chirurgico. L'attività postoperatoria precoce è leggermente diminuita e non c'erano secrezioni evidenti dagli occhi e dal naso. La perdita di peso prima e dopo l'intervento chirurgico è stata di 21,17 g ± 1,59 g. Il peso iniziale postoperatorio ha mostrato un trend decrescente, con una riduzione massima di 69,58 g ± 33,19 g. La crescita stabile è iniziata l'8,25 ± 2,53 giorni dopo l'intervento e il 31° giorno dopo l'intervento il peso ha superato il 9,35% ± il 4,7% del peso il giorno dopo l'intervento. I ratti sono stati in grado di defecare entro 24 ore dall'intervento chirurgico, con feci molli ma senza feci sanguinolente. La formazione di feci molli si è verificata dal 9° al 12° giorno dopo l'intervento.
Aumento compensatorio della sacca ileale Il 35° giorno dopo l'intervento, la cavità addominale del ratto è stata aperta in anestesia, rivelando una grave adesione tra la sacca ileale e la cavità pelvica. Dopo aver accuratamente separato l'adesione tra la sacca e i tessuti circostanti, sono stati osservati un ingrossamento compensatorio della sacca ileale, un ispessimento della parete intestinale e una lieve dilatazione dell'intestino tenue distale (Figura 1). La lunghezza della sacca ileale era di 2,89 cm ± 0,28 cm al momento dell'intervento, mentre il 35° giorno dopo l'intervento misurava 3,86 cm ± 0,87 cm, mostrando una differenza statistica significativa di P = 0,000). Anche l'area della mucosa (cm2) della sacca ileale è risultata significativamente aumentata rispetto alla misurazione chirurgica (6,46 ± 0,85 vs. 17,02 ± 4,61, P = 0,000). Non c'era alcuna differenza significativa tra il gruppo IPAA e il gruppo della pouchite ileale (P &gt; 0,05).
Valutazione delle condizioni generali e punteggio fecale di ratti con pouchite ileale Il 31° giorno dopo l'intervento chirurgico, il DSS è stato somministrato al gruppo della pouchite ileale. All'inizio della somministrazione, sia il gruppo IPAA che il gruppo della pouchite ileale avevano lo stesso peso corporeo (352,00 g ± 30,03 g vs. 352,00 g ± 25,92 g, P = 1) ed erano generalmente in buone condizioni. Tuttavia, la quantità di cibo e acqua consumata nel gruppo della pouchite ileale è diminuita, con conseguente affaticamento mentale, capelli opachi, secrezione negli occhi e nel naso, diminuzione della mobilità e non sono stati osservati cambiamenti significativi nel gruppo IPAA. Al 35° giorno dopo l'intervento, il peso del gruppo pouchite ileale era significativamente inferiore a quello del gruppo IPAA (322,83 g ± 29,24 g vs. 364,83 g ± 30,13 g, P = 0,028) (Figura 2).
Il gruppo con pouchite ileale ha manifestato diarrea significativa il primo giorno dopo la somministrazione del DSS e il secondo giorno dopo la somministrazione del DSS aveva muco, pus e feci sanguinolente (Figura 3). Al 35° giorno dopo l'intervento, i punteggi delle feci11 del gruppo IPAA e del gruppo pouchite ileale erano rispettivamente (4,33 ± 0,82 vs. 2,17 ± 0,75, P = 0,001). I ratti del gruppo IPAA avevano un ano pulito e privo di inquinamento, mentre i ratti con pouchite ileale avevano gonfiore dell'ano accompagnato da muco, pus e feci sanguinolente.
Alterazioni istopatologiche della sacca ileale
Osservazione macroscopica di campioni di sacca ileale Nel gruppo IPAA, la parete intestinale della sacca ileale si è ispessita e non è stata osservata alcuna erosione, ulcera o punto di sanguinamento. Nel gruppo della pouchite ileale, i vasi sanguigni nel mesentere della sacca di conservazione diventano più spessi e la mucosa della sacca ileale è ampiamente o localmente infiammata, con erosione visibile, ulcere e punti di sanguinamento, alcuni dei quali sono accompagnati da una significativa dilatazione distale dell'intestino tenue (Figura 4).
Osservazione microscopica del tessuto della sacca ileale Nel gruppo di ratti IPAA, la punta di alcuni villi intestinali nel tessuto della sacca è diventata smussata, accompagnata da una piccola quantità di infiltrazione di neutrofili e, occasionalmente, è stata osservata una piccola quantità di essudazione sulla superficie della mucosa.
Al contrario, la disposizione dei villi intestinali nel tessuto della sacca ileale dei ratti nel gruppo della pouchite ileale era estremamente disordinata. Mancavano alcuni villi intestinali ed erano visibili un'estesa erosione e ulcere multiple a chiazze senza coinvolgere lo strato muscolare. Questo è stato accompagnato da un gran numero di neutrofili e infiltrazione di linfociti, eccessiva essudazione e infiammazione visibile della cripta. Il punteggio patologico del tessuto della sacca ileale nel gruppo della pouchite ileale era significativamente più alto di quello del gruppo IPAA, con una differenza statistica significativa osservata (8,50 ± 1,76 vs. 1,33 ± 0,52, P = 0,000) (Figura 5).
Livello di espressione della proteina funzionale della barriera intestinale occludina L'occludina, un'importante proteina funzionale della barriera intestinale, è espressa sulla membrana cellulare del tessuto della tasca ileale sia nel gruppo IPAA che in quello della pouchite ileale dei ratti11. Tuttavia, il livello di espressione della proteina occludina nel gruppo della pouchite ileale era significativamente inferiore a quello del gruppo IPAA (0,25 ± 0,03 vs. 0,15 ± 0,02, P = 0,000) (Figura 6).
Rilevamento di fattori infiammatori nella sacca ileale I livelli di espressione di IL-6, IL-17, TNF-α e INF-γ nel tessuto della sacca ileale dei ratti nel gruppo pouchite ileale erano significativamente più alti di quelli del gruppo IPAA (come determinato dal test ELISA16). Al contrario, l'IL-10 ha mostrato risultati opposti, con differenze statistiche osservate (P = 0,000) (Tabella 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig01.jpg"> Figura 1: Lo stato della sacca ileale. La freccia indica la sacca ileale (A) al momento dell'intervento chirurgico e (B) l'allargamento compensatorio della sacca ileale il 35° giorno dopo l'intervento (durante la raccolta del campione). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig02.jpg"> Figura 2: Andamento delle variazioni di peso corporeo nei ratti dopo l'intervento chirurgico con IPAA. La barra di errore è correlata alla deviazione standard, n = 6 in ogni gruppo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig03.jpg"> Figura 3: Fotografia di feci di ratto. (A) Gruppo IPAA. (B) Gruppo della bustite ileale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig04.jpg"> Figura 4: Osservazione macroscopica di campioni di sacca ileale. (A) Gruppo IPAA. (B) Gruppo della bustite ileale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig05.jpg"> Figura 5: Alterazioni patologiche del tessuto della sacca ileale di ratto. (A) Gruppo IPAA. (B) Gruppo della bustite ileale. Barre della scala: 60 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig05large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig06.jpg"> Figura 6: Rilevazione immunoistochimica dell'espressione della proteina occludina nel tessuto della sacca ileale di ratto. (A) Gruppo IPAA. (B) Gruppo della bustite ileale. Barre della scala: 60 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig06large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Gruppo</td>
			<td>n</td>
			<td>IL-6</td>
			<td>IL-10</td>
			<td>IL-17</td>
			<td>TNF-α</td>
			<td>INF-γ</td>
		</tr><tr><td>Gruppo IPAA</td>
			<td>6</td>
			<td>2,60 ± 0,36</td>
			<td>5,81 ± 0,66</td>
			<td>17.48 ± 4.81</td>
			<td>86.94 ± 24.06</td>
			<td>4,08 ± 0,56</td>
		</tr><tr><td>Gruppo pouchite</td>
			<td>6</td>
			<td>6,94 ± 1,18</td>
			<td>2,77 ± 0,60</td>
			<td>34,82 ± 2,41</td>
			<td>213.00 ± 26.11</td>
			<td>9.67 ± 1.70</td>
		</tr><tr><td>P</td>
			<td>0</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
		</tr></tbody></table>Tabella 1: Livello di espressione dei fattori infiammatori nel tessuto della sacca ileale di ratto (pg/mL).

Un modello di ratto di pouchite dopo proctocolectomia e anastomosi anale con destrano solfato

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Un modello di roditore indotto da TNBS per studiare il ruolo patogeno dello stress meccanico nella malattia di Crohn

Questo protocollo descrive un modello di trapianto intestinale basato su ratto con ileostomia per la valutazione del decorso temporale dell'intervento farmacologico sul rigetto del trapianto.

Un modello di trapianto intestinale di rigetto dell'innesto di ratto con ileostomia esteriorizzata per la valutazione della prognosi longitudinale

Creazione di distacchi di retina sperimentali con un'altezza riproducibile e sostenuto di distacco, e senza emorragia subretinica, è importante per lo studio della fisiopatologia della perdita di cellule fotorecettori della retina nella malattia e valutare possibili interventi terapeutici. Qui riportiamo tale metodo in dettaglio.

Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

Scopri come stabilire un modello di ratto di pouchite mediante chirurgia IPAA e trattamento con DSS al 4%. Questo metodo fornisce una piattaforma solida per studiare la patogenesi e valutare nuovi trattamenti.

Un modello di ratto di pouchite dopo proctocolectomia e anastomosi anale con destrano solfato

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