Name: Isolamento e captazione delle cellule dendritiche di piccole vescicole extracellulari da Echinococcus granulosus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Scopri l'isolamento e la captazione delle vescicole extracellulari di Echinococcus granulosus da parte delle cellule dendritiche. Questo metodo consente di studiare l'immunomodulazione e le interazioni parassita-ospite.

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<table><tbody><tr><td>Provette da 1,5 mL</td><td>Henso</td><td>N14059</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzetti&nbsp;</td><td>JetBiofil</td><td>CAP011024</td><td>Polistirene, fondo piatto, piastra sterile</td></tr><tr><td>a 6 pozzetti&nbsp; &nbsp;</td>Fornitore verificato - <td>Henso Medical Co., Ltd.</td><td>N14221</td><td>Fondo piatto, materiale PS,</td></tr><tr><td>filtro cellulare sterile in polipropilene da 70 mm</td><td>Biologix Group Limited</td><td>15-1070</td><td>Colorante sterile</td></tr><tr><td>blu Alcian 8 GX&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-214517B</td><td></td></tr><tr><td>Incubatrice automatica CO2</td><td>Nuarire</td><td>UN-5100E/G DH Siero</td><td></td></tr><tr><td>bovino Albumina</td><td>Wiener lab</td><td>1443151</td><td></td></tr><tr><td>CD11c Anticorpo monoclonale-PECy5&nbsp; &nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>15-0114-82</td><td>clone (N418)</td></tr><tr><td>CD40 Anticorpo monoclonale-FITC 100 &; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0402-82</td><td>clone (HM40-3)</td></tr><tr><td>CD80 Anticorpo monoclonale-APC 100 &; g</td><td>eBioscience</td><td>17-0801-82</td><td>clone (16-10A-1)</td></tr><tr><td>CD86 Anticorpo monoclonale-FITC&nbsp; 100 &; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0862-82</td><td>clone (GL-1)</td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>IEC CL31R</td> Microscopio confocale multivelocità <td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td>Nikon Microscopio confocale C1</td><td></td></tr><tr><td>Tubi conici 15 mL Ø 17 x 120 mm</td><td>Citotest</td><td>4610-1865</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>107K4034</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Merk</td><td>1.78343</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido&nbsp;</td><td>Anedra</td><td>6646</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino 500 ml</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td>sistema di</td></tr><tr><td>citometria a flusso</td> 12352207 <td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCanto&trade; II</td><td></td></tr><tr><td>Cellula Zeta Capillare Piegata</td><td>Malvern Panalytical</td><td>DTS1070</td><td></td></tr><tr><td>Sale solfato di gentamicina</td><td>Sigma</td><td>G1264</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di glutaraldeide</td><td>Fluka</td><td>49630</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco</td><td>11344041</td><td></td></tr><tr><td>Ago ipodermico 21 G x 1"25/8</td><td>Weigao</td><td></td><td>Ago</td></tr><tr><td>ipodermico sterile 25 G x 5/8"</td><td>Weigao</td><td></td><td>sterile</td></tr><tr><td>Microscopio invertito&nbsp;</td><td>Leica</td><td>DMIL LED Fluo</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Holliday</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipopolisaccaride&nbsp; 5 mg</td><td>Invitrogen</td><td>tlrl-rslps</td><td>LPS dai batteri Gram-negativi E. coli K12 . TLR2/4 Agonisti</td></tr><tr><td>Loperamide cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.08162</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11150059</td><td></td></tr><tr><td>Blu di metilene</td><td>Anedra</td><td>6337</td><td></td></tr><tr><td>MHC classe I (H2kb) Anticorpo monoclonale-PE 100 &; g</td><td>eBioscience</td><td>12-5958-82</td><td>clone (AF6-88.5.5.3)</td></tr><tr><td>MHC classe II (IA/IE) Anticorpo monoclonale-FITC&nbsp; 100 &; g</td><td>eBioscience</td><td>11-5321-82</td><td>clone (M5/114.15.2)</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus</td><td>CX31</td><td></td></tr><tr><td>Topo ricombinante murino Flt3L.</td><td>PrepoTech</td><td>250-31L-10UG</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-One</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Agar Scientific</td><td>R1018</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina G sale sodico</td><td>Sigma</td><td>P3032-10MU</td><td></td></tr><tr><td>PKH26</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>Potassio Fosfato Monobasico</td><td>Timper</td><td></td><td>Per Fosfato Tamponato Soluzione salina (PBS)</td></tr><tr><td>tampone per lisi RBC 100 mL</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI medium&nbsp; 1640 1x 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich (Gibco)</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Cacodilato di sodio&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0250</td><td></td></tr><tr><td>cloruro di sodio</td><td>Anedra</td><td>7647-14-5</td><td>per soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td></tr><tr><td>Fosfato di sodio bibasico (anidro) p. a.</td><td>Biopack</td><td>1639.07</td><td>Per soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td></tr><tr><td>Sale di streptomicina solfato</td><td>Sigma</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>Siringa 10 mL</td><td>Brema</td><td></td><td>sterile</td></tr><tr><td>Provette in policarbonato a parete spessa</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>13 x 55 mm, capacità nominale 4 mL</td></tr><tr><td>Microscopio elettronico a trasmissione</td><td>Jeol</td><td>JEOL JSM 100CX II</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuga</td><td>Beckman</td><td>Optima LE-80k&nbsp;</td><td>Rotore 90 Ti</td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Richmond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano&nbsp;</td><td>Malvern</td><td>Nano ZSizer-ZEN3600</td><td>Per eseguire misure di diffusione dinamica della luce e del potenziale zeta</td></tr></tbody></table>

isolamento e captazione delle cellule dendritiche di piccole vescicole extracellulari da echinococcus granulosus

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus

Nella Figura 1 è mostrato un diagramma di flusso che riassume le fasi principali per il mantenimento di colture pure dello stadio larvale di E. granulosus, l'isolamento e la caratterizzazione delle sEV e il loro assorbimento da parte delle cellule dendritiche murine. Per ottenere un'elevata produzione di sEV da protoscoleces e metacestodi di E. granulosus, è stato impiegato un metodo di coltura in vitro precedentemente sviluppato in laboratorio per massimizzare la ...

Isolamento e captazione delle cellule dendritiche di piccole vescicole extracellulari da Echinococcus granulosus

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Fonte: Watson, DC, et.al. Isolamento e purificazione scalabili di vescicole extracellulari da Escherichia coli e altri batteri. J. Vis. Exp. (2021)Questo video mostra l'isolamento e la concentrazione di vescicole extracellulari (EV) derivate dalla membrana esterna di batteri geneticamente modificati. Il processo prevede la coltura dei batteri per rilasciare le vescicole extracellulari, seguita da fasi sequenziali di centrifugazione e filtrazione per rimuovere cellule e detriti. Infine,...

Isolamento e arricchimento di vescicole extracellulari derivate dalla membrana esterna da batteri

Questo video descrive un metodo basato sulla cromatografia ad esclusione dimensionale (SEC) per isolare vescicole extracellulari o vescicole extracellulari derivate dalle cellule immunitarie cerebrali, la microglia. Le vescicole extracellulari agiscono come carico molecolare per fornire mediatori, che regolano una risposta immunitaria. Pertanto, le vescicole extracellulari isolate possono essere utilizzate come modello in vitro per studiare il crosstalk microglia-neurone durante una risposta...

Isolamento basato su SEC di vescicole extracellulari derivate da microglia: una tecnica per isolare vescicole extracellulari da terreni di coltura condizionati con microglia

Vi è un crescente interesse per la comprensione delle funzioni immunologiche specifiche sottopopolazioni di cellule nelle placche di Peyer (PP), i siti primari induttivi di gut-tessuti linfoidi associati. Qui delineare protocolli paralleli per la preparazione di PP preparazioni di cellule singole per l'analisi di citometria a flusso e criosezioni PP per immunostaining.

Isolare e Immunostaining linfociti e le cellule dendritiche da placche di Peyer murino di

Dettagli Questo protocollo un metodo per isolare le cellule presentanti l'antigene da timo umano attraverso diverse fasi di digestione enzimatica del tessuto seguita dalla densità centrifugazione della sospensione di cellule singole e smistamento finalmente magnetico e / o FACS delle popolazioni cellulari di interesse.

Isolamento di cellule dendritiche mieloidi e cellule epiteliali di timo umano

Descriviamo qui un metodo per isolare e purificare le cellule dendritiche da diversi compartimenti anatomici nel tratto riproduttivo femminile umano per la valutazione delle loro caratteristiche fenotipiche e funzionali. Questo metodo può essere adattato per isolare altre cellule immuni o cellule dendritiche da altri tessuti mucosi.

Isolamento di cellule dendritiche dal tratto riproduttivo femminile umano per studi fenotipici e funzionali

Qui, presentiamo un protocollo per descrivere isolamento di vescicole extracellulari (SVE) nel mezzo di coltura in vitro da adulto Schistosoma japonicum.

Isolamento e caratterizzazione di vescicole extracellulari da adulto Schistosoma japonicum

La presente relazione evidenzia i requisiti cronologici per l'isolamento delle vesciche extracellulari (EV) da microglia o macrofagi di sangue. Gli EV derivati dalla microglia sono stati valutati come regolatori dell'escrescenza di neurite, mentre gli EV derivati dai macrofaci di sangue sono stati studiati nel controllo dell'invasione delle cellule glioma C6 nei saggi in vitro. L'obiettivo è comprendere meglio queste funzioni EV come mediatori immunitari in microambienti specifici.

Caratterizzazione delle vescicoli extracellulari derivati dalle cellule immunitarie e studio dell'impatto funzionale sull'ambiente cellulare

Descriviamo una tecnica di trasduzione rapida transitoria in diversi stadi di sviluppo di Echinococcus granulosus utilizzando vettori lentivirali di terza generazione.

Trasduzione transitoria delle forme strobilate di Echinococcus granulosus

I batteri secernono vescicole extracellulari (EV) di dimensioni nanometriche che trasportano molecole biologiche bioattive. La ricerca EV si concentra sulla comprensione della loro biogenesi, del ruolo nelle interazioni e malattie microbo-microbo e ospite-microbo, nonché sulle loro potenziali applicazioni terapeutiche. Viene presentato un flusso di lavoro per l'isolamento scalabile dei veicoli elettrici da vari batteri per facilitare la standardizzazione della ricerca sui veicoli elettrici.

Isolamento scalabile e purificazione di vescicole extracellulari da Escherichia coli e altri batteri

Il protocollo proposto include linee guida su come evitare la contaminazione con endotossina durante l'isolamento di vescicole extracellulari da supernatanti di coltura cellulare e su come valutarle correttamente.

Isolamento di vescicole extracellulari a basso contenuto di endotossine derivate da linee cellulari tumorali

Scopri l'isolamento e la captazione delle vescicole extracellulari di Echinococcus granulosus da parte delle cellule dendritiche. Questo metodo consente di studiare l'immunomodulazione e le interazioni parassita-ospite.

Isolamento e captazione delle cellule dendritiche di piccole vescicole extracellulari da Echinococcus granulosus

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