Name: Generazione di sferoidi/organoidi tridimensionali da colture cellulari bidimensionali utilizzando un nuovo dispositivo di timbro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Scopri come generare sferoidi e organoidi 3D da colture cellulari 2D utilizzando un innovativo sistema a timbro con micropozzetti in agarosio. Questo metodo economico migliora le interazioni cellulari e riduce la variabilità sperimentale per la ricerca biomedica.

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<ol><li>Lian, J., Yue, Y., Yu, W., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence%3A+a+key+player+in+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence: a key player in cancer development.</a> J Hematol Oncol. 13 (1), 151(2020).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+interactions+between+beta1-integrin+and+epidermal+growth+factor+receptor+in+three-dimensional+basement+membrane+breast+cultures%3A+a+different+perspective+in+epithelial+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Reciprocal interactions between beta1-integrin and epidermal growth factor receptor in three-dimensional basement membrane breast cultures: a different perspective in epithelial biology.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 95 (25), 14821-14826 (1998).</li>
<li>Dzobo, K., Dandara, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix%3A+its+composition%2C+function%2C+remodeling%2C+and+role+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomimetics%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix: its composition, function, remodeling, and role in tumorigenesis.</a> Biomimetics. 8 (2), 146(2023).</li>
<li>Sutherland, R. M., McCredie, J. A., Inch, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+multicell+spheroids+in+tissue+culture+as+a+model+of+nodular+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Growth of multicell spheroids in tissue culture as a model of nodular carcinomas.</a> J Natl Cancer Inst. 46 (1), 113-120 (1971).</li>
<li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organogenesis+in+a+dish%3A+modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organogenesis in a dish: modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125(2014).</li>
<li>Bialkowska, K., Komorowski, P., Bryszewska, M., Milowska, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroids+as+a+type+of+three-dimensional+cell+cultures-examples+of+methods+of+preparation+and+the+most+important+application%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Spheroids as a type of three-dimensional cell cultures-examples of methods of preparation and the most important application.</a> Int J Mol Sci. 21 (17), 6225(2020).</li>
<li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+large+numbers+of+size-controlled+tumor+spheroids+using+microwell+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of large numbers of size-controlled tumor spheroids using microwell plates.</a> J Vis Exp. (81), e50665(2013).</li>
<li>Andersen, T., Auk-Emblem, P., Dornish, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+Cell+culture+in+alginate+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Microarrays+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">3D Cell culture in alginate hydrogels.</a> Microarrays (Basel). 4 (2), 133-161 (2015).</li>
<li>Hou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+development+of+primary+pancreatic+organoid+tumor+models+for+high-throughput+phenotypic+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Discov%22%5BJournal%5D)">Advanced development of primary pancreatic organoid tumor models for high-throughput phenotypic drug screening.</a> SLAS Discov. 23 (6), 574-584 (2018).</li>
<li>Napolitano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+three-dimensional+cell+culture+utilizing+micromolded+nonadhesive+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free three-dimensional cell culture utilizing micromolded nonadhesive hydrogels.</a> Biotechniques. 43 (4), 494-500 (2007).</li>
<li>Maria-Engler, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-localization+of+nestin+and+insulin+and+expression+of+islet+cell+markers+in+long-term+human+pancreatic+nestin-positive+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Co-localization of nestin and insulin and expression of islet cell markers in long-term human pancreatic nestin-positive cell cultures.</a> J Endocrinol. 183 (3), 455-467 (2004).</li>
<li>Mantovani, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+primary+cultures+of+insulin-releasing+human+pancreatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Immobilization of primary cultures of insulin-releasing human pancreatic cells.</a> Islets. 1 (3), 224-231 (2009).</li>
<li>Wassmer, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+primary+pancreatic+islet+cell+spheroids+for+three-dimensional+culture+or+transplantation%3A+a+methodological+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Engineering of primary pancreatic islet cell spheroids for three-dimensional culture or transplantation: a methodological comparative study.</a> Cell Transplant. 29, 963689720937292(2020).</li>
<li>Stuart, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+low-cost+scaffold-free+cartilage+tissue+engineering+using+human+cartilage+progenitor+cell+spheroids+formed+by+micromolded+nonadhesive+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Successful low-cost scaffold-free cartilage tissue engineering using human cartilage progenitor cell spheroids formed by micromolded nonadhesive hydrogel.</a> Stem Cells Int. 2017, 7053465(2017).</li>
<li>Charelli, L. E., Dernowsek, J. A., Balbino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue+spheroids+via+a+3D+printed+stamp-like+device%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue spheroids via a 3D printed stamp-like device.</a> J Vis Exp. (188), e63814(2022).</li>
<li>Micromold for the production of cellular spheroids and use. , Patent BR 10 2019 027360 7 A2 (2019).</li>
<li>Riffle, S., Pandey, R. N., Albert, M., Hegde, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+hypoxia%2C+DNA+damage+and+proliferation+in+multicellular+tumor+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Linking hypoxia, DNA damage and proliferation in multicellular tumor spheroids.</a> BMC Cancer. 17, 338(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>31L Microonde</td><td>Electrolux</td><td>78965840 6699 9</td><td>Apparecchiatura utilizzata per riscaldare la soluzione di agarosio, facilitandone la dissoluzione e garantendo una maggiore omogeneità. Permette alla soluzione di raggiungere lo stato liquido ideale per la formazione dei pozzi.</td></tr><tr><td>3DFila Stampante</td> 3D in resina <td></td><td></td><td>polimerica polimerica UV</td>opaca fotosensibile</tr><tr><td>grigia - Creality Halot Una</td> stampante 3D <td>Creality</td><td>N/A</td><td>utilizzata per la stampa del dispositivo di timbro</td></tr><tr><td>Agarosio</td><td>UNISCIENCE</td><td>UNI-R10111</td><td>Per formare il gel, sciogliere dall'1 al 2% in tampone fosfato salino (PBS) o in un mezzo appropriato.</td></tr><tr><td>Autodesk Fusion 360</td><td></td><td></td><td>Modellazione 3D</td></tr><tr><td>BB15 CO2 Incubatore</td><td>Thermo Fisher</td><td>51023121</td><td>Apparecchiatura utilizzata per incubare cellule coltivate in un ambiente idoneo e controllato.</td></tr><tr><td>Chitubox</td><td>Chitubox</td><td>N/A</td><td>Software utilizzato per l'affettatura della parte per la stampa</td></tr><tr><td>Cabina di sicurezza biologica di Classe II</td><td>Grupo VECO</td><td>N/A</td><td>Garantisce un ambiente sterile per l'esecuzione della coltura cellulare entro parametri e protocolli stabiliti.</td></tr><tr><td>Terreno di coltura</td><td>USBiological/Life Sciences</td><td>C5900-03A</td><td>Contiene additivi per una corretta coltivazione cellulare.</td></tr><tr><td>Piastre di coltura (P6)</td><td>SARSTEDT</td><td>1023221</td><td>Utilizzato per modellare l'agarosio e coltivare le cellule.</td></tr><tr><td>Erlenmeyer Flask (25 mL)</td><td>Laborglas</td><td>91 216 14</td><td>Un contenitore utilizzato per sciogliere 1&ndash; 2% di agarosio in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) o in un altro mezzo adatto, tipicamente riscaldato in un forno a microonde.</td></tr><tr><td>Falcon 15 mL Polistirene Centrifuga Tubo</td><td>Corning</td><td>352099</td><td>Utilizzato per mantenere le cellule in sospensione ed eseguire eventuali diluizioni.</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Vitrocell Embriolife</td><td>005/19</td><td>Additivo per terreno di coltura.</td></tr><tr><td>Soluzione PBS (Saline Phosphate Buffer)</td><td>Lab made</td><td>N/A</td><td>diluita 1x con acqua ultrapura MiliQ. Utilizzato per sciogliere l'agarosio dall'1 al 2% e per lavare pozzetti già prodotti.</td></tr><tr><td>Flacone reagente con tappo blu - Schott</td><td>Laborglas</td><td>21801545</td><td>Utilizzato per la preparazione e la conservazione del terreno di coltura.</td></tr><tr><td>Dispositivo di timbro</td><td>NUCEL Group</td><td>N/A</td><td>Link- Questo collegamento fornisce l'accesso al file .stl del dispositivo di timbro. Basta affettarlo utilizzando un software appropriato e stamparlo con una stampante 3D compatibile. https://drive.google.com/drive/folders/1gTYComnJWzHpN6ZKOyK EChKS3Qns0rOA?usp=condivisione</td></tr><tr><td>Pallone di coltura trattato con filtro 25 cm&sup2;</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Utilizzato per la coltivazione e il mantenimento delle cellule aderenti.</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Merck</td><td>07-07-9002</td><td>Per la dissociazione delle cellule prima della semina.</td></tr><tr><td>Luce ultravioletta (UV)</td><td>N/A</td><td>N/A Utilizzato</td><td>per sterilizzare il timbro e le lastre.</td></tr></tbody></table>

generazione di sferoidi/organoidi tridimensionali da colture cellulari bidimensionali utilizzando un nuovo dispositivo di timbro

Generation of Three-Dimensional Spheroids/Organoids from Two-Dimensional Cell Cultures Using a Novel Stamp Device

La coltura cellulare utilizzata in questo studio è stata derivata da isole pancreatiche suine. La preparazione delle isole utilizzate in questo studio aveva una purezza dell'80 ± del 5% basata sulla colorazione con ditizone e dell'&gt;80% sulla vitalità delle cellule insulari basata sulla rilevazione del diacetato di fluoresceina nelle cellule vive o dello ioduro di propidio nelle cellule morte (il metodo fluorescente vivo/morto). Assicurarsi che il preparato delle isole pancreatiche suine sia puro almeno all'80% (ad es....

Generazione di sferoidi/organoidi tridimensionali da colture cellulari bidimensionali utilizzando un nuovo dispositivo di timbro

Three-dimensional (3D) cell cultures provide a more accurate representation of the in vivo microenvironment than conventional two-dimensional (2D) ...

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Descriviamo un metodo semplice, rapido di generare 3D tessuti come sferoidi e la loro potenziale applicazione di quantificare le differenze nelle interazioni cellula-cellula.

Un semplice Hanging goccia Cultura protocollo cellulare per la generazione di sferoidi 3D

Gli sferoidi sono un tipo di modello di coltura cellulare 3D utilizzato per rappresentare in modo più accurato l'ambiente di una cellula rispetto ai modelli monostrato di coltura cellulare 2D. Nel protocollo di esempio, vedremo gli scienziati generare sferoidi da una linea cellulare di cancro del colon-retto e applicare l'imaging di cellule vive per monitorare la crescita degli sferoidi.

Generazione di sferoidi da linee cellulari: un metodo di coltura cellulare tridimensionale (3D)

Questo video dimostra la trasformazione di cellule staminali pluripotenti umane (hPSC) in organoidi cerebrali sferici. Utilizzando inibitori specifici, le hPSC sono guidate a differenziarsi verso una linea neuronale, formando colonie neuroectodermiche. Vengono quindi introdotti speciali fattori di crescita, che incoraggiano l'auto-organizzazione e la proliferazione delle colonie, portando infine alla formazione di organoidi cerebrali sferici.

Generazione di sferoidi da cellule staminali pluripotenti umane

Vi presentiamo un dispositivo microfluidico centricomotore a motore in grado di coltivare sferoidi cellulari. Utilizzando questo dispositivo, sferoidi di tipo cellulare singolo o multiplo potrebbe essere facilmente costati in condizioni di alta gravità.

Piattaforma lab-on-a-CD per la generazione di spheroid tridimensionali multicellulari

Qui, forniamo protocolli dettagliati, robusti e complementari per eseguire la colorazione e l'imaging a risoluzione subcellulare di modelli di coltura cellulare tridimensionale fissi che vanno da 100 μm a diversi millimetri, consentendo così la visualizzazione della loro morfologia, composizione del tipo di cellula e interazioni.

Colorazione e imaging ad alta risoluzione di modelli organoidi e sferoidi tridimensionali

Il protocollo descrive la generazione di sferoidi ad alto rendimento per la bioprinting utilizzando l'analisi multiparametrica della loro ossigenazione e morte cellulare su un microscopio a fluorescenza standard. Questo approccio può essere applicato per controllare la vitalità degli sferoidi ed eseguire la standardizzazione, che è importante nella modellazione del tessuto 3D, del microambiente tumorale e della biofabbricazione (micro)tissutale di successo.

Biofabbricazione assistita da microscopia dell'ossigeno a prezzi accessibili di sferoidi multicellulari

Qui, descriviamo la produzione su larga scala di sferoidi stromali / cellule staminali (ASC) di derivazione adiposa utilizzando un sistema di pipettaggio automatizzato per seminare la sospensione cellulare, garantendo così l'omogeneità delle dimensioni e della forma dello sferoide. Questi sferoidi ASC possono essere utilizzati come elementi costitutivi per approcci di bioprinting 3D.

Produzione automatizzata su larga scala di sferoidi a cellule staminali di derivazione adiposa per la bioprinting 3D

Il presente protocollo descrive una tecnica per produrre sferoidi tissutali su larga scala in modo economico utilizzando un dispositivo simile a un timbro stampato in 3D.

Generazione di sferoidi tissutali tramite un dispositivo simile a un timbro stampato in 3D

Questo documento presenta un protocollo di fabbricazione per un nuovo tipo di substrato di coltura con centinaia di microcontenitori per mm2, in cui gli organoidi possono essere coltivati e osservati utilizzando la microscopia ad alta risoluzione. Anche i protocolli di semina cellulare e immunocolorazione sono dettagliati.

Una piattaforma ad alto rendimento per la coltura e l'imaging 3D di organoidi

Il presente studio descrive le metodologie per la coltivazione, il congelamento, lo scongelamento, la lavorazione, la colorazione, l'etichettatura e l'esame di interi sferoidi e organoidi sotto vari microscopi, mentre rimangono intatti in un idrogel all'interno di un dispositivo multiuso.

Coltivazione, congelamento, lavorazione e imaging di interi organoidi e sferoidi mentre sono ancora in un idrogel

Scopri come generare sferoidi e organoidi 3D da colture cellulari 2D utilizzando un innovativo sistema a timbro con micropozzetti in agarosio. Questo metodo economico migliora le interazioni cellulari e riduce la variabilità sperimentale per la ricerca biomedica.

Generazione di sferoidi/organoidi tridimensionali da colture cellulari bidimensionali utilizzando un nuovo dispositivo di timbro (Video) | JoVE Journal

Generazione di sferoidi/organoidi tridimensionali da colture cellulari bidimensionali utilizzando un nuovo dispositivo di timbro

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