Generazione di sferoidi da linee cellulari: un metodo di coltura cellulare tridimensionale (3D)

Coltiva la linea cellulare desiderata come un monostrato 2D aderente. Rimuovere il terreno di coltura e lavare con soluzione fisiologica tamponata con fosfato o PBS. Quindi, aggiungere la tripsina e incubare mentre le cellule si staccano dalla superficie del pallone e diventano di forma rotonda. Aggiungere terreni freschi per neutralizzare la tripsina e sospendere le cellule. Trasferire la miscela in una provetta conica e utilizzare una centrifuga per pellettare le cellule.

Sostituire il surnatante con un terreno fresco e risospendere il pellet della cella. Utilizzare un emocitometro per contare il numero di cellule e calcolare una concentrazione di lavoro. Quindi, trasferire la giusta quantità di miscela cellulare in una piastra a pozzetti a bassissima adesione a fondo tondo e incubare. Le cellule si depositano sul fondo e si aggregano. Alla fine si attaccheranno l'uno all'altro e formeranno un assemblaggio compatto di celle 3D, lo sferoide.

Nel protocollo di esempio, vedremo come generare sferoidi 3D da una linea cellulare di cancro del colon e come viene applicato l'imaging dal vivo per tracciare la loro formazione. Inizia lavando la linea cellulare di cancro del colon-retto di in