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DOI: 10.3791/68370-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates the use of portable long-read sequencing for determining drug-resistant tuberculosis (TB) susceptibility in resource-limited settings. The protocol aims to provide accurate results comparable to gold standard methods, enhancing accessible TB diagnostics.
Questo protocollo è stato ottimizzato per il sequenziamento profondo mirato di 18 regioni di resistenza ai farmaci in Mycobacterium tuberculosis utilizzando una piattaforma di sequenziamento a lettura lunga, seguita dall'analisi con una pipeline bioinformatica specifica per la tubercolosi progettata per dati a lettura lunga.
Indago se il sequenziamento portatile a lettura lunga possa fornire risultati di suscettibilità alla TB resistenti ai farmaci in contesti con risorse limitate con un'accuratezza paragonabile al metodo gold standard, promuovendo diagnostiche della tubercolosi accessibili e di alta qualità. Utilizzare sequenziamento mirato di nuova generazione come strumento diagnostico per la tubercolosi resistente ai farmaci, offrendo un profilo di resistenza completo direttamente da campioni clinici senza competenze in bioinformatica. Il nostro protocollo che utilizza sequenziamento a lettura lunga ha il potenziale di fornire tempi di risposta più rapidi, flussi di lavoro più semplici rispetto al rilevamento della resistenza in tempo reale, facilitando diagnostiche complete della TB e migliorando il tracciamento degli epidemii in ambienti con risorse limitate e infrastrutture minime.
Per cominciare, calcola 100 nanogrammi di ogni campione di amplicon in base alla concentrazione e trasferisci il volume richiesto in un tubo PCR pulito. Per determinare la massa totale degli ampliconi nel campione, si utilizza la formula fornita. Regolare il volume totale di ogni campione a 12,5 microlitri usando acqua priva di nucleasi.
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