腹腔内注射:成体ゼブラフィッシュの腹腔内への溶液送達法
Transcript
- 成魚を注射の24時間前に絶食して胃腸管を空にし、腹部に追加のスペースを作ります。施術当日は、魚にトリカインをかけて麻酔をかけ、腹側を上にして濡れたスポンジのスロットに入れます。
次に、必要な量の注射液を実験用フィルムにピペットで移し、インスリン針に引き込みます。針を骨盤ヒレの間に前後の体軸から45度の角度で配置し、正中線でゆっくりと押し込みます。腹壁と内臓の間の空間である腹腔内に針を約1〜2ミリメートル進め、目的の溶液をゆっくりと注入します。こぼれないように、針を引き抜く前に5秒待ってください。次に、針を慎重に取り外します。
注射後、魚を新鮮な水槽の水が入った回収タンクにすばやく移します。魚がすぐに泳ぎ始めない場合は、えらの近くで水を渦巻き、麻酔から回復するのを助けます。このプロトコル例では、感染を研究するために、RAG1変異魚にマイコバクテリウム・マリナム溶液を注入します。
- まず、希釈した細菌溶液の5マイクロリットルの液滴をパラフィンフィルムにパイプで送り出します。次に、液滴を30ゲージのインスリン針に引き込みます。この実験には、生後5〜8か月の魚を使用し、1匹は野生型の魚、もう1匹はRAG変異魚です。
これらの魚の腹側を上にして、湿った発泡プラスチックのスリットに配置します。インスリン針を骨盤のひれの間に45度の角度で注入します。針を上向きに開いたままにして、開口部全体が腹腔内にあることを確認します。その後、細菌溶液をゆっくりと注入します。この後、針を慎重に取り外し、すぐに魚を新鮮なタンクの水で満たされた回収タンクに移します。
7H10プレートで15分ごとに使用中の細菌アリコートからサンプルを採取します。これらのサンプルを摂氏29度で5日間インキュベートし、感染線量を確認します。魚の健康状態を定期的にチェックし、感染症状のある魚を0.02%を超える3-アミノ安息香酸エチルエステルを含む水中でインキュベートすることにより、安楽死させるようにしてください。
