固形標本からの原発性卵巣癌細胞の採取:卵巣腫瘍標本から上皮性卵巣癌細胞を培養する方法

卵巣の外面に存在する上皮細胞は、卵巣腫瘍に増殖する可能性のある癌細胞に悪性形質転換する可能性があります。

これらの上皮性卵巣がん細胞またはEOCを単離するには、まず卵巣腫瘍標本を採取し、それを細かく刻みます。みじん切りにした部分を、目的のプロテアーゼ酵素を添加した消化バッファーを含むチューブに移します。

これらのプロテアーゼは組織内の細胞外マトリックスタンパク質を分解し、EOC細胞、赤血球、およびいくつかの解離した線維芽細胞を懸濁液に放出します。

細胞スラリーをストレーナーでろ過し、浮遊した単一細胞を解離していない組織片から分離します。懸濁液を遠心分離して、EOC細胞、赤血球、および線維芽細胞をペレット化します。酵素含有上清を廃棄します。

細胞ペレットを上皮増殖培地に再懸濁し、培養皿に移します。培養物をインキュベートして、赤血球が培地に浮遊している間にEOC細胞と線維芽細胞が皿の底に付着できるようにします。

培地をリフレッシュして浮遊赤血球を除去します。時間の経過とともに、培地は線維芽細胞上でEOC細胞の選択的増殖を促進し、原発性卵巣癌細胞の単層を形成します。

手術室からサンプルを採取し、氷上でラボに運びます。輸送された容器の中に、サンプルを生物学的安全フードに入れます。サンプルを50ミリリットルの円錐形チューブから、10ミリリットルの新鮮な氷冷PBSを含む60ミリメートル×60ミリメートルのペトリ皿に移します。

次に、滅菌カミソリの刃を使用して、サンプルをさらに 2 ミリメートル以下に切断します。次に、15ミリリットルの円錐形チューブでDMEMをディスパーゼIIで処理します。ミンチした組織をDMEMディスパーゼII混合チューブに移します。次に、サンプルを5%の二酸化炭素と摂氏37度で30分間インキュベートします。最適な消化を確保するために、細胞スラリーを 5 分ごとに手動で撹拌します。

インキュベーション後、50ミリリットルの円錐形チューブの上に置かれた70マイクロメートルのメッシュセルストレーナーを通して細胞スラリーを移します。シリンジプランジャーを使用してメッシュにそっと圧力をかけます。メッシュの上に残っている解離していない組織を廃棄し、得られた細胞懸濁液を50ミリリットルの滅菌コニカルチューブに集めます。

次に、コニカルチューブを摂氏4度で7分間320 x g で遠心分離します。上清を廃棄し、細胞ペレットを10%FBSおよび1%PSを含む10ミリリットルのDMEMに再懸濁します。次に、細胞懸濁液をペトリ皿に移し、懸濁液を5%二酸化炭素と摂氏37度でインキュベートします。最初のプレーティングの24時間後に培地を交換して、細胞破片と培養中に存在する赤血球の大部分を除去します。

最後に、次の2週間は3日ごとに培地を交換し、その後、初代EOC細胞の培養は下流のアプリケーションに備えることができます。

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.