ソリッド検体からの原発性卵巣癌細胞を得る方法

本研究では、固体の臨床検体からの原発性卵巣癌細胞の単離および特徴付けのための詳細な方法を記載している。卵巣癌臨床検体は、下流の用途に非常に適した生存可能な、線維芽細胞を含まない上皮性卵巣癌（EOC）細胞を得るために酵素消化に供される。

この手順の全体的な目標は、固形の臨床検体から原発性卵巣がん細胞を分離し、特徴づけることです。これは、最初に卵巣腫瘍標本を収集し、それをペトリ皿に入れることによって達成されます。2番目のステップは、サンプルを断片に切断し、インキュベーション用の分解試薬を入れた円錐形のチューブに移すことです。

次に、細胞スラリーをフィルターに通し、細胞のみを回収します 遠心分離の場合、最後のステップは、上清を廃棄し、細胞を培地に再懸濁して一晩インキュベーションすることです。最終的に、上皮性卵巣がん細胞は数週間培養中で増殖するため、下流への応用が可能になります。この方法は、個々の患者に最適な治療オプションが何であるかなど、卵巣がん領域の主要な質問に答えるのに役立ちます。

この技術の意味は、遺伝子操作の影響を非常に受けやすく、薬物スクリーニング検査により有用である、より現実的な細胞培養を使用できるため、卵巣がんの治療にまで及びます。まず、500ミリリットルのデルコス、改変ワシ、ミディアム、またはDMEMに10%のウシ胎児血清またはFBSと1%のペニシリン、ストレプトマイシンまたはpsを補給します。培地は摂氏4度で保管してください。

手術室からサンプルを採取し、氷上で輸送されたコンテナ内のラボに輸送します。サンプルを生物学的安全フードに入れます。50ミリリットルの円錐管から、10ミリリットルの新鮮な氷冷PBSが入った60ミリメートル×60ミリメートルのペトリ皿にサンプルを移します。

次に、滅菌済みのカミソリの刃をさらに使用して、サンプルを2ミリメートル以下に切断します。次に、15リットルの円錐形チューブ内のディスクペーストチューブでDMEMを処理します。ミンチ組織をDMEM dispa 2 mixture tubeに移します。

次に、サンプルを5%二酸化炭素と摂氏37度で30分間インキュベートします。細胞スラリーを5分ごとに手動で攪拌し、最適な消化を確保します。インキュベーション後、50ミリリットルの円錐管の上に置かれた70マイクロメートルメッシュのセルストレーナーを通して細胞スラリーを移します。

シリンジプランジャーを使用してメッシュに静かに圧力をかけ、メッシュの上に残っている関連していない組織を廃棄し、得られた細胞懸濁液を50ミリリットルの滅菌円錐管に回収します。次に、遠心分離機。Gの320倍で4°Cで7分間の円錐管。

上清を捨て、10%FBSと1%psを含む10ミリリットルのDMEMに細胞ペレットを再懸濁します。次に、細胞懸濁液をペトリ皿に移し、懸濁液を5%二酸化炭素と摂氏37度でインキュベートします。最初のプレーティングの24時間後に培地を交換して、培養物に存在する細胞の破片と赤血球の大部分を取り除きます。

最後に、次の2週間は3日ごとに培地を交換し、その後、初代EOC細胞の培養物を下流のアプリケーションに使用できるようにします。メッキ直後。上皮性卵巣がん細胞またはEOC細胞は、単一細胞懸濁液として、赤血球や細胞破片が豊富に付着した塊で現れます。

めっきの3日後のEOC細胞培養では、半接着性のEOC細胞クラスターと赤血球汚染の減少が示されました。最初のプレーティングから1週間後、EOC細胞培養は、組織培養プラスチック上に広がる細胞の渦巻き状のクラスターになります。典型的な上皮の丸石の形態は、培養14日後にEOC細胞のコンフルエント単層に見られます。

このビデオを見た後、固形の臨床検体から原発性卵巣がん細胞を分離し、特徴付ける方法について十分に理解できるはずです。