マウス回腸ループモデル:マウスの腸透過性を研究するための手術モデル

病理学的条件下では、上皮および内皮関門の崩壊により腸の透過性が増加し、腸内容物が周囲の血管系および腹腔に漏れます。腸の透過性は、回腸ループモデルを使用してシミュレートできます。

まず、仰臥位で麻酔をかけたマウスを準備します。腹部に正中線を切開します。適切な緩衝液で湿らせた滅菌綿ガーゼを手術部位に置き、手術中に臓器の水分を保ちます。

腸の遠位部分である回腸を外側に出し、ガーゼの上に広げて腸間膜を露出させます。腸間膜に適切に間隔をあけ、重要な血管がない回腸の 2 つの結紮部位を特定します。次に、腸間膜に穴を開けて、特定された部位に結紮糸を追加します。

次に、回腸を解剖して、無傷の血液供給と腸間膜を備えた孤立した回腸ループを生成します。その後、適切なバッファーをループに注入して、廃棄物の内容を洗い流します。

次に、回腸ループの開いた端を結紮します。シリンジを使用してケモカイン(走化性タンパク質懸濁液)をループに注入し、ループを膨らませます。臓器を腹部に戻します。

切開部を縫合します。マウスが回復するまで待ちます。最終的に、ケモカイン分子は回腸壁を通って隣接する血管に入り、炎症と白血球の流入を引き起こします。

麻酔の外科的平面を達成した後、まず腹部正中線の毛皮をアルコール綿棒または70%エタノールに浸したガーゼスポンジでこすります。低体温症を防ぐために、毛皮の広い範囲をアルコールで濡らさないでください。はさみを使用して、正中開腹術を行います。腹部の中央に水平切開を行い、腹腔内臓器を傷つけないように注意して腹膜を露出させます。

露出した腹腔内に、あらかじめカットした濡れた綿ガーゼを置きます。湿った綿棒を使用して盲腸を動員して外側に出し、濡れた綿ガーゼの上に慎重に置きます。次に、回腸を動員してそっと外側にします。腸間膜血管と血液供給を妨げることなく、濡れた綿ガーゼの上に少なくとも6センチメートルの回腸末端を展開します。

温かいHBSSで露出した組織を常に湿らせてください。盲腸に近い腸間膜の回腸に供給する主要な動脈を特定します。次に、腸間膜に重要な血管がない2つの結紮部位を見つけます。鈍い組織鉗子で回腸末端をしっかりとつかみ、先端の細い鉗子を使用して腸間膜を開窓し、血管を避けます。

ミシン目全体に絹の縫合糸を置き、外科用結び目を結び、最初の結紮を作成します。定規を使用して、最初の合字から4センチメートル離れた距離を測定し、2番目の合字を作成します。各結紮部の横を細いハサミで慎重に切り取り、4センチメートルの回腸ループを分離し、血液供給と腸間膜を無傷に保ちます。

10ミリリットルの注射器に取り付けられた柔軟な黄色の栄養チューブを使用して、回腸ループセグメントの内容物を温かいHBSSで穏やかに洗い流します。手術部位を清潔に保つために、管腔内容物を腹腔から洗い流してください。フラッシュした回腸ループの切断された2つの端をシルク縫合糸で結紮します。

1 ゲージの針が付いた 30 ミリリットルの注射器を使用して、FITC-デキストランやケモカインなどの 250 マイクロリットルの試薬を腸管腔にゆっくりと注入します。回腸ループが膨張し、粘膜が適度に膨張します。

針ホルダー、解剖学的鉗子、および逆切断針を備えた3.0非吸収性シルク縫合糸を使用して腹壁を閉じます。低体温症を防ぐために動物を乾燥させた後、潜伏期間中、温度調節された麻酔室に入れます。