Name: 無菌実験技術：めっき法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-11T12:00:00.000+00:00
Duration: 18 min
Description: 学ぶ無菌実験技術によるめっき法で、細菌やファージの単離・培養・計数を行います。ストリーク、プアー、スプレッドめっきなどの手法を習得し、微生物学研究の基礎技術を身につけましょう。

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サンプルの培養を設定し、数字を支援するためのイラストを準備し、クリスReddiとカリフォルニア大学ロサンゼルス校（UCLA）Bhairav​​シャーするためにはIROCデザインでコリ·サンダース氏に感謝します。このプロジェクトの資金は、HHMI（ハワードグラント番号52006944）によって提供されていました。

<ol><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarker%2C+K+%22At+the+Bench%3A+A+Laboratory+Navigator%22">At the Bench: A Laboratory Navigator</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. (1998).</li>
<li>US Department of Health and Human Services (DHHS). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+And+Biomedical+Laboratories+%28BMBL%29%22">Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</a>. , 5th, U.S. Government Printing Office. Washington DC. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm</a> (2009).</li>
<li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Symp.+Quant.+Biol%22%5BJournal%5D)">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 18, 273-279 (1953).</li>
<li>Fields, B. N., Knipe, D. M., Chanock, R. M., Hirsch, M. S., Melnick, J. L., Monath, T. P., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFields%2C+BN+%22Fields+Virology%22">Fields Virology</a>. 1, 2nd, Raven Press. New York, NY. (1991).</li>
<li>Gilbert, R. A., Ouwerkerk, D., Zhang, L. H., Klieve, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+Research+Center+for+Beef+Genetic+Technologies.+In+vitro+detection+and+primary+cultivation+of+bacteria+producing+materials+inhibitory+to+ruminal+methanogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Cooperative Research Center for Beef Genetic Technologies. In vitro detection and primary cultivation of bacteria producing materials inhibitory to ruminal methanogens.</a> Journal of Microbiological Methods. 80, 217-218 (2010).</li>
<li>Jett, B. D., Hatter, K. L., Huycke, M. M., Gilmore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+agar+plate+method+for+quantifying+viable+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Simplified agar plate method for quantifying viable bacteria.</a> BioTechniques. 23, 648-650 (1997).</li>
<li>Karam, J. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaram%2C+JD+%22Molecular+Biology+of+Bacteriophage+T4%22">Molecular Biology of Bacteriophage T4</a>. , ASM Press. Washington, DC. (1994).</li>
<li>Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A., Roizman, B., Straus, S. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnipe%2C+DM+%22Fundamental+Virology%22">Fundamental Virology</a>. , 4th, Lippincott, Williams, and Wilkins. Philadelphia, PA. (2001).</li>
<li>Lederberg, J., Lederberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replica+plating+and+indirect+selection+of+bacterial+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Replica plating and indirect selection of bacterial mutants.</a> J. Bacteriol. 63, 399-406 (1952).</li>
<li>Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+JH+%22A+Short+Course+in+Bacterial+Genetics%3A+A+Laboratory+Manual+and+Handbook+for+Escherichia+coli+and+related+bacteria%22">A Short Course in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and related bacteria</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview, NY. (1992).</li>
<li>Mills, K. V., Gareau, J. R., Garcia, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+modification+to+the+Copacabana+method+for+spreading+transformation+mixtures%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Low-cost modification to the Copacabana method for spreading transformation mixtures.</a> BioTechniques. 39, 188(2005).</li>
<li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJordan%2C+T+%22RESEARCH%3A+National+Genomics+Research+Initiative+Phage+Resource+Laboratory+Manual%22">RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</a>. , Howard Hughes Medical Institute. (2008).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning+-+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning - A Laboratory Manual</a>. , 3rd, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. (2001).</li>
<li>Sanders, E. R., Miller, J. H. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSanders%2C+ER+%22Microbiologist%3A+A+Discovery-based+Course+in+Microbial+Ecology+and+Molecular+Evolution%22">Microbiologist: A Discovery-based Course in Microbial Ecology and Molecular Evolution</a>. , ASM Press. Washington, DC. (2010).</li>
<li>Slonczewski, J. L., Foster, J. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSlonczewski%2C+JL+%22Microbiology+-+An+Evolving+Science%22">Microbiology - An Evolving Science</a>. , 2nd, W.W. Norton & Co., Inc. New York, NY. (2011).</li>
<li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Congo+Red-Polysaccharide+Interactions+in+Enumeration+and+Characterization+of+Cellulolytic+Bacteria+from+the+Bovine+Rumen%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Use of Congo Red-Polysaccharide Interactions in Enumeration and Characterization of Cellulolytic Bacteria from the Bovine Rumen.</a> Applied and Environmental Microbiology. 43, 777-780 (1982).</li>
<li>Wise, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWise%2C+K+%22Preparing+Spread+Plates+Protocols%22">Preparing Spread Plates Protocols</a>. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.microbelibrary.org/index.php/component/resource/laboratory-test/3085-preparing-spread-plates-protocols">http://www.microbelibrary.org/index.php/component/resource/laboratory-test/3085-preparing-spread-plates-protocols</a> (2006).</li>
<li>Worthington, M., Luo, R. Q., Pelo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copacabana+method+for+spreading+E.+coli+and+yeast+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Copacabana method for spreading E. coli and yeast colonies.</a> BioTechniques. 30, 738-742 (2001).</li>
<li>American Type Culture Collection (ATCC). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a> (2012).</li>
<li>EPA Microbiology Home Page. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.epa.gov/nerlcwww/index.html">http://www.epa.gov/nerlcwww/index.html</a> (2012).</li>
<li>The GENE Project: Laboratory Methods and Materials. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phys.ksu.edu/gene/g1.html">http://www.phys.ksu.edu/gene/g1.html</a> (2012).</li>
<li>Joint Genome Institute (JGI) Genome Sequencing Protocols: Library Plating Protocol. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.jgi.doe.gov/sequencing/protocols/prots_production.html">http://www.jgi.doe.gov/sequencing/protocols/prots_production.html</a> (2012).</li>
<li>Microbial Genetics (maintained by Stanley Maloy at UCSD). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.sci.sdsu.edu/~smaloy/MicrobialGenetics">http://www.sci.sdsu.edu/~smaloy/MicrobialGenetics</a> (2012).</li>
<li>Organization of American States (OAS) Department of Sustainable Development (DSD). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.oas.org/DSD/publications/Unit/oea59e/ch26.htm">http://www.oas.org/DSD/publications/Unit/oea59e/ch26.htm</a> (2012).</li>
<li>Public Health Agency of Canada: Material Safety Data Sheets (MSDS) for Infectious Substances. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phac-aspc.gc.ca/msds-ftss">http://www.phac-aspc.gc.ca/msds-ftss</a> (2012).</li>
<li>United States Environmental Protection Agency (EPA) Office of Water. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://water.epa.gov">http://water.epa.gov</a> (2012).</li>
<li>American Society for Microbiology (ASM)'s Curriculum Recommendations Microbiology Majors Program. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-microbiology-majors-program.html">http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-microbiology-majors-program.html</a> (2012).</li>
<li>Introductory Course in Microbiology. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-introductory-course-in-microbiology.html">http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-introductory-course-in-microbiology.html</a> (2012).</li>
</ol>

私は、開示することは何もありません。

培養微生物は無菌操作は、細胞とメディアの操作を通して維持されている必要がありますすべてはめっき法、数が含まれます。 5つの異なる手順は、このプロトコルで説明されました。これらのめっき技術が日常的に細菌やファージを操作するために使用されていますが、彼 ​​らはまた、（一般的に、酵母（例えば、 サッカロミセス·セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、カンジダ·アルビカンス（Candida albicans）、シゾサッカロミセス·ポンベ ）、藻類などの分子遺伝学で使用され、原生動物、哺乳類培養細胞および真核微生物に適用することができますすなわち、 ボルボックス、クラミドモナス、アメーバ、ゾウリムシ ）、および線虫（すなわち、 線虫Caenorhabditis elegans）。また、研究対象の実験的な目標や生物に応じて、各めっき法の（そして、さらに洗練された）多数のバリエーションがあります。したがって、それは唯一の方法論のようなtを与えられた実験やターゲット微生物のための最も適切な方法を選択しても調整しないようにすることが重要である帽子の実験結果は、適切に調査、質問や問題に対処します。 このプロトコルで説明しためっき技術の最新のアプリケーションのいくつかは、スクリーニングや創薬実験のための高スループットの結果をもたらす技術の進歩を含んでいます。たとえば、ゲノムシークエンシングセンターはE.ある拡散メッキのクローンライブラリの&quot;コパカバーナ方法&quot;を、使用大腸菌細胞は、微生物のゲノム由来のDNA断片を含むプラスミドで形質転換した。大規模なプレート（バイオアッセイトレイと呼ばれる）の数十を一度に用意されているため、自動プレートシェーカーは、トレイのバッチ全体のためにガラスビーズを振るために使用されます。また、インキュベーション後に、これらのプレートからコロニーを選択する際に、ロボットコロニーピッカーは、384ウェルマイクロプレートのLBブロスのための接種物として適切なコロニーから細胞を収集するために使用されています。このハイスループットスクリーニングアッセイ、拡散pの手続きの原則のために後半技術が適用されますが、技術は様々なステップを自動化すると同時に、短い時間枠内で分析される多数のサンプルを許可するようにスケーリングすることができます。 バイオテクノロジーと製薬会社は、微生物学、分子遺伝学における最も基本的な技術のためのハイスループット技術の開発にかなりのリソースを投資しています。例えば、一度に最大8または12サンプルのボリューム転送を実行するためにマルチチャンネルmicropipettorsがあります。さらに96チャンネルピペットヘッドを操縦するロボットワークステーションがあります！これらの取り組みは、実験に関連付けられている機械的な操作を実行するために必要なインスツルメンテーションを開発することができ、エンジニアやコンピュータプログラマと方法論の専門知識を持っている生物学者のペアリングは、科学者の学際的なチームを含んでいます。かかわらず、研究アプリケーションの、これらの技術を開発する企業で共有される目標は同じです - laboratoを自動化するRYプロセス、ツール、システム、機器、それらを集中的かつ効率的に少ない労働力となっています。

<table><tbody><tr><td colspan="4">1 です。酵母トリプトン寒天培地 (YTA)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>酵母エキス</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>トリプトン</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<TD>最大1000.0ml</TD>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
121&degのオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。4°C.</pで保管>
注ぎプレート手順用のチューブを準備する場合は、寒天を~55°Cまで冷却します。次に、2.0 mlの50 mg / mlシクロヘキシミドを加えます。18 mm チューブあたり 18.0 ml の溶融寒天培地を無菌的に分注し、4 °C で保存します。寒天は固まるため、使用前に蒸し器または電子レンジで溶かす必要があります><。
2 です。最小塩寒天培地 (MSA) + 0.1% (w/v) 炭素源
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH2HPO4&bull;2H2O</td>
			<td>2.14 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.09 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&bull;7H2O</td>
			<td>0.2 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>炭素源*</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>微量塩溶液**</td>
			<td>10.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<TD>最大1000.0ml</TD>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
121&degのオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。4°C.</pで保管>
* 図13に示す実験に使用される炭素源には、アセトアミド、ラクトース、グリシンが含まれます
** 微量塩溶液は、0.1 N HClで次のように調製されます。滅菌前にベースに添加されます(121度のオートクレーブ;Cを20分間).
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>FeSO4&bull;7H2O</td>
			<td>300.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2&bull;4H2O</td>
			<td>180.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO3)2&bull;6H2O</td>
			<td>130.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4.7H2O</td>
			<td>40.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2MoO4</td>
			<td>20.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4&bull;5H2O</td>
			<td>1.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>1000.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (0.1 N)</td>
			<TD>最大1000.0ml</TD>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
3 です。EHA軟寒天(0.65%w/v)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>6.5 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>トリプトン</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Naクエン酸塩&bull;2H2O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>グルコース</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>蒸留水</td>
			<TD>最大1000.0ml</TD>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
121&degのオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。4°C.</pで保管>
4 です。EHA硬寒天(1.2%w/v)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>12.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>トリプトン</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td> 8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naクエン酸塩&bull;2H2O</td>
			<td> 2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>グルコース</td>
			<td> 3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<TD>最大1000.0ml</TD>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
121&degのオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。4°C.</pで保管>
5 です。1X ミドルブルック トップ寒天 (MBTA 軟寒天、0.5% w/v)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>100 mM CaCl2ストック*</td>
			<td> 1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9液体培地:ニート**</td>
			<td>50ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2XTA ***</td>
			<td>50ml</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
50 mlの2XTAを溶かし、~55°Cまで冷却します。無菌技術を使用して、溶かした寒天にCaCl2および7H9ブロスを加えます。13 mm チューブあたり 4.5 ml の混合物を無菌的に分注し、55 度に保管します。Cインキュベーター&#8804;7日間。MBTAを室温または4°Cに冷却します。Cは、CaCl2を溶液から沈殿させます.
* 100 mM CaCl2。CaCl2が溶液から沈殿するのを防ぐために、ストックは室温で保管する必要があります
** 7H9 液体媒体: きちんとした
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>7H9 ブロスベース</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40%グリセロールストック</td>
			<TD>5 ml</TD>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<td>最大900.0 ml</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
ベースを水と混ぜ、攪拌しながらグリセロールを加えます。121°Cでオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。4°C.</pで保管>
*** 2X ミドルブルック トップ寒天培地 (2XTA、1.0% w/v)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>7H9 ブロスベース</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<TD>最大1000.0ml</TDまで>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
121&degのオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。50 mlのアリコートを100 mlのボトルに分注し、4°Cで保存します
6 です。Middlebrook 7H10寒天プレート(MHA硬寒天、1.9%w / v)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>7H10寒天ベース</td>
			<td>19.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40%グリセロールストック</td>
			<td>12.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<td>887.5 ml</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
寒天ベースを水と混合し、攪拌しながらグリセロールを加えます。溶液を沸騰するまで加熱し、1分間かき混ぜてベースパウダーを完全に溶解します。121°Cでオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。寒天を~55°Cまで冷まします。次に、Cは次の試薬を無菌的に追加します:
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>AD サプリメント (37 度に予熱;C)*</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mg/ml カルベニシリン **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mg/ml シクロヘキシミド **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
* AD 補足
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>NaCl ></td>
			<td>17 グラム ></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>アルブミン(フラクションV)></td>
			<TD>100 g></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>デキストロース(D-グルコース)></td>
			<td>40 g></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水></td>
			<TD>2000.0mlまで></td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
この溶液をフィルター滅菌します。オートクレーブしないでください。4°C.</pで保管>
** これらの溶液をフィルター滅菌し、4°Cで保管します。C は &le の場合;60日
7 です。LB寒天(1.5%w / v)+ X-Gal(60&mu;g/ml)
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>トリプトン</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>酵母エキス</td>
			<td>5.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蒸留水</td>
			<TD>最大1000.0ml</TD>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>pH 7.5 at 25&deg;C</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
121&degのオートクレーブ;Cで20分間滅菌します。寒天を~55°Cまで冷まします。次に、Cに3.0mlの20 mg / mlのX-Gal溶液を無菌的に加えます。400 mgのX-Galを20 mlのジメチルホルムアミド(DMF)に溶解して、X-galストックを新たに調製します。
特定試薬表:
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>試薬名</td>
			<td>会社</td>
			<td>カタログ番号</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>酵母エキス</td>
			<td>ベクトン・ディケンソン</td>
			<td>212750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>トリプトン</td>
			<td>ベクトン・ディケンソン</td>
			<td>211705</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>寒天</td>
			<td>ベクトン・ディケンソン</td>
			<td>214030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>アクロスオーガニック</td>
			<td>123340010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH2HPO4&bull;2H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>30435</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>フィッシャーサイエンティフィック</td>
			<td>BP 303-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&bull;7H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>230391 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>アセトアミド</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ </td>
			<td>A-0500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>乳糖</td>
			<td>フィッシャーサイエンティフィック</td>
			<td>L6-500 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>グリシン</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>G-7126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO4&bull;7H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>F8048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2&bull;4H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>M-3634</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO3)2&bull;6H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>230375</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4.7H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>Z4750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2MoO4</td>
			<td>アクロスオーガニック</td>
			<td>213621000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4&bull;5H2O</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>209198 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>シグマ・アルドリッチ</td>
			<td>C1016 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>フィッシャーサイエンティフィック</td>
			<td>A144-212</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>シクロヘキシミド</td>
			<td>シグマ</td>
			<td>038K1561</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>カルベニシリン</td>
			<td>セルグロ</td>
			<TD>46-100-RG</TD>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>S271-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naクエン酸塩&bull;2H2O</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>S279-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>グルコース(デキストロース)</td>
			<td>BD</td>
			<td>215530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 ブロスベース</td>
			<td>BD</td>
			<td>271310</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H10寒天ベース</td>
			<td>BD</td>
			<td>262710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>グリセロール</td>
			<td>シェルトン</td>
			<td>IB15760</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>アルブミン(フラクションV)</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>S71907</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Gal(5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-&#946;-D-ガラクトピラノシド)</td>
			<td>テクノバ</td>
			<td>X1205</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ジメチルホルムアミド(DMF)</td>
			<td>シグマ</td>
			<td>D4551</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>エタノール</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>CDA19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>塩素系漂白剤</td>
			<td>クロロックス</td>
			<td>02490/06644884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CiDecon(消毒剤)</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc.</td>
			<td>8504</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル>
特定機器表:
<テーブルのborder="1">
	<本体>
		<tr>
			<td>設備名</td>
			<td>会社</td>
			<td>カタログ番号</td>
			<td>実験</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>メタルループ</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S17352</td>
			<td>ストリークメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>使い捨てプラスチックループ</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>ストリークメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>木の棒</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>23-400-104</td>
			<td>ストリークメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>フラットつまようじ</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S67859</td>
			<td>ストリークメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ターンテーブル</td>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>08-758Q</td>
			<td>スプレッドメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ガラス棒</td>
			<td>ベルコガラス</td>
			<td>NC9004380</td>
			<td>スプレッドメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<TD>4mmガラスビーズ</TD>
			<td>フィッシャー</td>
			<td>11-312B</td>
			<td>スプレッドメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>別珍布</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<TD>09-718-2</TD>
			<td>レプリカメッキ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>円筒形ブロック</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-1</td>
			<td>レプリカメッキ</td>
		</tr>
	</tボディ>
</テーブル></td></tr></tbody></table>

無菌実験技術：めっき法

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

微生物は、実験室での汚染の可能性のユビキタスソースを作成するすべての無生物表面上に存在しています。実験の成功は、作業面や機器を消毒するだけでなく、非滅菌表面と滅菌機器やソリューションの接触を防ぐために科学者の能力に依存しています。ここでは日常的に分離、伝播、あるいは細菌やファージなどの微生物を列挙するために実験室で使用されるいくつかのメッキ方法の手順を提示します。すべての5つのメソッドは、無菌操作、または実験材料の無菌性を維持する手順が組み込まれています。説明する手順は、単一のコロニーを分離する（1）筋メッキ細菌培養、（2）注ぐメッキ（3）拡散メッキ可能な細菌のコロニーを列挙するために、ファージおよび列挙プラークを単離するために（4）ソフト寒天オーバーレイ、および（含まれてい5）レプリカメッキ同一の空間的なパターンで別のプレートから細胞を転送します。これらの手順は、tで実行することができます彼の実験室のベンチは、彼らが微生物の非病原性株（バイオセーフティレベル1、BSL-1）を含む提供した。 BSL-2の生物を扱う場合、これらの操作はバイオセーフティーキャビネットで行われなければなりません。バイオハザード分類と同様に、問題の微生物に必要な安全上の注意と封じ込め施設を決定するために感染性物質用の最新の微生物とバイオメディカル研究所におけるバイオセーフティの版（BMBL）だけでなく、 化学物質等安全データシート （MSDS）を参照してください。菌株とファージ株は、 アメリカンタイプカルチャーコレクション （ATCC）などの特定の組織によって維持され、研究調査官、企業、およびコレクションから取得することができます。それは、様々なめっき法を学習するときに非病原性菌株を使用することをお勧めします。このプロトコルに記載されている手順に従うことによって、学生のことができるようになります。 <ul><li> contaminatiなく、メッキの手順を実行しますngのメディア。 </li><li>ストリークめっき法により、単一の細菌のコロニーを分離します。 </li><li>細菌の濃度を決定するために注ぐメッキと拡散メッキメソッドを使用します。 </li><li>ファージで作業する場合、ソフト寒天オーバーレイを実行します。 </li><li> 1プレートからレプリカメッキプロシージャを使用して別の細菌細胞を転送します。 </li><li>実験的なタスクが割り当てられ、適切なメッキ方法を選択します。 </li></ul>

文化微生物に使用されるメディアや試薬を扱う場合は、無菌操作は、汚染が最小化されていることを確認するために練習する必要があります。メッキの様々な方法が日常的に、分離、伝播または列挙細菌やファージ、実験材料の無菌性を維持する手順を組み込むすべてがために使用されます。

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

[ナレーター] このプロトコルでは、細菌やファージなどの微生物を単離、増殖、または計数するために用いられる塗布方法における無菌操作について説明します。手順には、単一コロニーを単離するための細菌培養物の画線塗布、細菌濃度を決定するための分注平板法、および生存細菌コロニーを計数するための塗布平板法が含まれます。ソフトアガーオーバーレイ法は、ファージの単離とプラークの計数に用いられ、レプリカ平板法は、同一の空間的パターンで細胞をあるプレートから別のプレートへと転移させます。最終的に、これらの微生物培養手法の実用的応用は、環境中の細菌の同定から、分子遺伝学やハイスループットバイオアッセイにおける技術的進歩まで多岐にわたります。一般的に、これらの播種法に慣れていない方は、非滅菌表面への接触を避けながら、慎重かつ協調的な動作で操作を行う必要があるため、習得に苦労することがあります。これらのルーチン操作を習得するには、トレーニングと練習が必要です。以下では、研究室コーディネーターのKris Reddi博士が手順を実演します。- [ナレーター] バイオハザード分類、廃棄物の除染および廃棄を含む、研究室の規則と安全上の注意事項を把握した上で、微生物の取り扱いを開始します。プレート作成手順に使用するすべての器具、溶液、培地が滅菌されていることを確認してください。また、明確な作業スペースを確保し、消毒剤で清浄します。ガスラインに接続されたブンゼンバーナーを設置し、適切にラベルを貼った材料と共に必要な備品を配置します。次に、抗菌石鹸と温水で手を十分に洗います。まず、温かい流水で手を濡らし、石鹸を塗布して十分に広げます。親指、指の背面、手の甲、爪の下を含むすべての表面に摩擦を加えるように、力強く手をこすります。その後、残った石鹸を完全に洗い流し、ホルダーから取り出したペーパータオルで拭き取ります。最後に、新しいペーパータオルを使用して蛇口を閉めます。
画線平板法（ストリークプレート法）は、単純な機械的分離によって、混合集団から細菌の純粋培養物、すなわちコロニーを分離するために設計されています。4 °Cのコールドボックスから寒天プレートを取り出し、室温まで予熱します。プレートの画線に使用する器具を選択します。蓋に結露がなく、プレートが乾燥していることを確認してください。寒天プレートの底面の縁に沿ってラベルを貼ります。習熟している場合は、1枚のプレートで複数のサンプルを使用します。次に、ブンゼンバーナーに点火し、金属ループを火炎滅菌します。ワイヤーの先端をブンゼンバーナーの炎の最も熱い部分である青い円錐の中に向け、ループから3〜4インチ離れた位置から開始します。金属が赤熱したら、火炎がループに近づくようにワイヤーを動かします。ループを冷却するために、寒天培地の端に触れさせ、ジューという音をさせます。そのままループで接種物を採取します。プレートの下半分を持ち上げます。プレートの第1区画において、縁から中心に向かってループを往復させます。プレートを再び蓋の上に伏せて置きます。金属ループを再滅菌します。ペトリ皿を90度回転させます。第1区画の最後の画線の末端付近にループを触れさせ、往復パターンを用いて、第1区画の画線の最後の半分と交差させ、その後、空白の第2区画へと移動します。第2区画が塗りつぶされたら、プレートを置きます。第1区画との接触を避けながら、第3および第4区画に対しても同様の画線手順を繰り返します。滅菌済みの平らな爪楊枝で画線する場合、細い端を親指と薬指で軽く持ち、培地に対して10〜20度の角度に合わせ、太い端を使用して各区画を画線します。区画の間でプレートを再び蓋の上に伏せて置き、爪楊枝を適切に廃棄します。画線を終えたプレートを倒立させて培養します。
分注平板法（プールプレート法）は、単一のプレートの表面および寒天内部にあるコロニー形成単位の総数を数えます。タイマーを10分に設定し、55 °Cのウォーターバスから48 °Cのヒートブロックに18 mLの融解寒天培地を移し、10分間平衡化させます。滅菌済みのペトリ皿の底面にラベルを貼ります。必要に応じて希釈倍率を記入します。次に、サンプルの1 mLをペトリ皿の中央に分注します。蓋を閉めます。融解寒天のチューブからキャップを取り外し、開いたチューブの縁を火炎に通します。寒天を注意深くペトリ皿に注ぎます。蓋を閉め、プレートをゆっくりと回転させてサンプルと寒天を混ぜ合わせます。寒天が凝固するまで30分待ちます。寒天が凝固した後、プレートを倒立させて温室に置きます。
塗抹平板法（スプレッドプレート法）は、少量のサンプルに含まれる微生物を分離し、得られたコロニーを寒天表面に均等に分布させることを目的としています。プレートを室温で平衡化させ、適切にラベルを貼ります。プレートをターンテーブル上に配置します。サンプルの0.1 mLを寒天の中心にピペッティングし、蓋を閉めます。チップを廃棄容器に捨てます。金属製スプレッダーを70%エタノールのビーカーに浸し、スプレッダーの底面全体とステムの最初の1インチまでを覆い、その後、液を切ります。ブンゼンバーナーの火炎に通して、余分なエタノールを燃やします。次に、寒天プレートの蓋を開け、縁に近い端の寒天にスプレッダーを触れさせて冷却します。ターンテーブルをゆっくりと回転させます。スプレッダーを寒天表面に軽く当て、ターンテーブルが回転している間に、往復運動を用いてサンプルをプレート全体に徐々に均一に広げます。蓋を閉め、サンプルが完全に吸収されるまで少なくとも5分間放置します。その後、プレートを倒立させて培養します。
まず、寒天プレートに適切にラベルを貼ります。寒天プレートの蓋を開けます。次に、滅菌済みのガラスビーズの容器を開け、縁を火炎滅菌します。10〜12個の滅菌済みガラスビーズを注意深く寒天プレート上に分注します。プレートの蓋を閉め、ガラスビーズ容器のキャップを戻す前に縁を火炎滅菌します。次に、サンプルの分注を寒天の中央に行います。水平方向の動きで、寒天表面上でビーズを7回、優しく振ります。正しく行われれば、マラカスを振っているような音がします。プレートを60度回転させ、再び水平方向に7回振ります。さらにプレートを60度回転させ、振る動作を繰り返します。サンプルが吸収されたことを確認します。その後、汚染されたビーズを10%塩素系漂白剤の入った標識付き回収ビーカーに注ぎ捨てます。プレートを倒立させて培養します。
プラークアッセイは、一般にバクテリオファージの検出と定量に使用されます。指示細菌を対数増殖期まで培養し、氷上に保存します。次に、2本の滅菌マイクロcentrifugeチューブに「phage」と「control」のラベルを貼り、それぞれ50 µLのファージサンプルまたはバッファーを加えます。次に、フラスコ内の細菌培養液を回し、細菌の一部分を滅菌チューブに移して指示細菌を軽くボルテックスし、各吸着チューブに500 µLの細菌を加えます。チューブを軽く弾いて混ぜ合わせます。ファージサンプルをボルテックスしたり、激しくピペッティングしたりしないでください。ファージと細菌の混合物を、指示菌株に適した温度で20分間インキュベートします。その間に、2本のソフトアガールチューブを55 °Cのウォーターバスから48 °Cのヒートブロックに移します。10分間平衡化させます。室温に予熱した、結露のない2枚の栄養ハードアガールプレートにラベルを貼ります。ヒートブロックからソフトアガールチューブを取り出し、内容物が触れないほど熱すぎないか確認します。次に、ファージ吸着チューブからソフトアガールチューブへ、混合物を無菌的に移します。その後、手のひらの間で急速に回転させて内容物を混ぜます。片手でチューブを持ち、もう一方の手でハードアガールプレートの蓋を開けます。すぐにチューブの全量をハードアガールプレートの表面に注ぎます。プレートを素早く、優しく揺らします。蓋を閉め、ソフトアガールが凝固するまで30分間、水平な場所にプレートを置きます。次に、コントロール吸着チューブの混合物をソフトアガールチューブに移し、混ぜ合わせ、ハードアガールプレートに注ぎ、揺らして30分間凝固させるという手順を繰り返します。プレートにプラークが形成されているか確認します。不均一な混合物からプラークを分離するには、滅菌爪楊枝で中心を注意深く突き刺し、接種物を100 µLのファージバッファーを含む滅菌マイクロcentrifugeチューブに移します。必要に応じて段階希釈を行い、プラークアッセイを3〜6回繰り返すことで、この溶出液をさらに精製します。
レプリカプレート法は、一次プレート上の細胞増殖を二次プレートと比較できるようにすることで、選択可能な表現型を利用します。プレートの底面にグリッドを書き、一次プレートにラベルを貼り、結果として生じる各正方形に番号を振ります。ここで、無菌操作を用いてビーカーから滅菌済みの爪楊枝を取り出し、各正方形の中心に細胞サンプルを軽く押し当て、爪楊枝を適切な廃棄容器に捨てます。一次プレートを培養します。一次プレートとすべての二次プレートを重ねます。プレートの下半分側面に方向標識を付けます。次に、包装から滅菌済みのベルベット布を取り出し、円筒形ブロックの上に置きます。次に、ホルダーを設置し、ホルダーの標識をブロックの標識と合わせます。ブロックとホルダーの方向標識を確認してください。次に、一次プレートから蓋を取り外します。プレートとブロックの方向標識を合わせます。寒天表面がベルベット布に接触するようにプレートを下げます。指先で一次プレートの背面を軽く、均一に押し下げ、慎重にブロックから持ち上げます。細胞の転写跡がベルベット上に確認できることを確認します。プレートに蓋を戻します。次に、二次プレートそれぞれに対して、ベルベット布上でのプロトコルを順番に繰り返します。一次プレートから転写されたベルベット上の細胞を用いて、最も不適切から最も適切な基質へと順序立てられた最大8枚の二次プレートに接種します。最後に、ポジティブコントロールとして、シリーズの最後のプレートには、テストしたすべての菌株が増殖するはずの寒天培地を使用します。倒立させたプレートをテープでまとめ、培養します。二次プレートの増殖を確認します。ブンゼンバーナーを消し、すべての備品を片付けます。汚染された実験着、ガラス器具、有害廃棄物を適切な廃棄容器に入れます。作業エリアを消毒剤で清掃します。最後に、抗菌石鹸と温水で手を十分に洗います。
Serratia Marcescensは、プロジギオシンと呼ばれる赤色の色素を産生するグラム陰性桿状プロテオバクテリアです。これは一般的に、浴室やシャワーカーテンなどで増殖しているのが見られます。この例では、ストリークプレート法により、第4区画に単一コロニーが形成されています。
公共の飲料水噴水から採取した水サンプルに含まれる細菌のこの分析では、分注平板法が使用されています。コロニーの外見の違いに注目してください。表面のコロニーは大きく円形であるのに対し、一部の表面コロニーは非常に小さく不規則な形をしています。
塗抹平板法は、濃縮、選択、およびスクリーニング実験における重要な構成要素です。例えば、Copacabana法は、組換えDNA技術における古典的なブルーホワイトスクリーニングの分化ツールとなります。
ファージT4は、宿主であるEscherichia coliに感染して溶菌させ、子孫ファージを放出する毒性の強い二本鎖DNAファージです。EHA寒天上のこのプラークアッセイでは、直径約1 mmの透明な領域にファージが見られます。感染ファージ粒子が存在しない場合、細菌の増殖により、ソフトアガール内で細胞が濁った懸濁液となり、個々のコロニーは見えません。ソフトアガールオーバーレイ法では、プラークの形態が異なります。例えば、ここでは同じマイコバクテリア宿主菌株において、マイコバクテリアファージDestroyersの存在下とマイコバクテリアファージMSSSの存在下で、異なるプラーク形態が形成されています。
レプリカプレート法の強みは、多数の微生物を同時にスクリーニングできる点にあります。このケースでは、4つのシュードモナス菌株について、3種類の異なる炭素源（アセトアミド、ラクトース、グリシン）上での増殖を2回ずつテストしました。ここで、一次プレートは、示された4つの菌株を接種した完全YTA培地です。これらの菌株は、単一の炭素源（アセトアミド、ラクトース、またはグリシン）を添加した最小MSA培地のレプリカプレート上で、多様な増殖パターンを示しています。すべての菌株が最後のポジティブコントロールプレートで増殖しており、このシリーズのすべての二次プレートに細胞が転写されたことが確認できます。これらのレプリカプレートの結果をまとめた表は、異なる野生型菌株の特性的な増殖要求に関する同時スクリーニングの詳細を示しています。- このビデオを視聴することで、培地や培養物を汚染させることなくプレーティング操作を行う方法、および研究室でのあらゆる実験課題に対して適切なプレーティング法を選択して使用する方法について、十分に理解することができます。これらの技術に習熟するには練習が必要です。しかし、適切なトレーニングを積めば、このビデオで解説するプレーティング操作は、実験台での作業において自然に身につくでしょう。

aseptic-laboratory-techniques-plating-methods

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

実験室で作業している場合は、汚染の発生源を最小限に抑えることが不可欠です。無菌非無菌の表面との接触を避けながら、文化や試薬の転送を許可する手順を指します。血清ピペットとmicropipettorsは、実験に使用される溶液の無菌性を損なうことなく、正確なボリュームを測定するために使用されます。...

無菌室のテクニック：血清ピペットMicropipettorsのボリュームを転送

出典: Koeth, LM, et al., A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin in vitro 好気性増殖細菌の感受性試験。J. Vis.

グラム陽性菌の抗生物質感受性試験のためのブロス微量希釈法

陽性の血液培養からの急速な細菌ペレット製剤は、MALDI-TOFによる識別、グラム染色、抗生物質感受性試験およびPCRに基づく試験のような用途のための試料とすることができる。結果は、急速に血流感染症に罹患している患者の転帰を改善するために臨床医に伝えることができる。...

迅速な細菌同定および抗生物質感受性試験のための血液培養ペレットの調製

この原稿は、一連の生化学的アッセイに加えて、適切なビブリオコレラ（Vibrio cholerae）の維持技術を説明し、臨床的および環境的V間の迅速かつ確実な区別のために集合的に利用される。 コレラバイオタイプは実験室環境で使用されます。...

バイオタイプの維持と差別化に使用される実験技術<em&gt;コレラ（Vibrio cholerae）</em&gt;臨床分離株

このプロトコルにより、腸管病原体の付着、細胞外高分子物質マトリックス形成を評価することによって細菌のバイオ フィルムの動的な性質をキャプチャする多面的なアプローチを使用しての胆汁酸塩によるバイオ...

腸管病原体の胆汁酸塩によるバイオ フィルム形成: 同定及び定量化の手法

抗菌相乗効果テストの組み合わせで使用される 2 つ以上の抗生物質の効果を評価するために使用し、は通常 2 つの方法のいずれかで実行されます: 市松模様配列または時間を殺すの試金。ここでは、自動、インク ジェット...

インクジェットプリンター支援によってテスト自動チェッカー ボード配列および手動で時間を殺す方法抗菌の相乗効果

自然と実験室での微生物群集 - インタビュー

免疫細胞機能や増殖を監視するための細胞追跡用染料の使用の成功は、いくつかの重要な手順が含まれます。我々は、するための方法を説明します：1）膜染料と明るく、均一で、再現可能なラベルり得るステップと、2）蛍光色素とデータ収集条件を選択すると、3）色素希釈に基づいて、細胞増殖を定量化するためのモデルを選択する。...

細胞トラッキング染料を使用して細胞分裂監視のための最適化された染色と増殖モデリング方法

多くの異なる方法は、フローサイトメトリー（FCM）を使用して、細胞外小胞（電気自動車）の測定のために存在する。使用する最も適切な方法を決定する際にいくつかの側面を考慮すべきである。電気自動車を測定するための2つのプロトコルは、個々の検出またはビーズベースのアプローチのいずれかを使用して、提示されている。...

フローサイトメトリーを用いて細胞外小胞の分析のための技術

私たちは、チューブワーム、Hydroides...

マリンTubewormでライブ光学および電子顕微鏡技術を用いた石灰化イベントのキャラクタリゼーション

学ぶ無菌実験技術によるめっき法で、細菌やファージの単離・培養・計数を行います。ストリーク、プアー、スプレッドめっきなどの手法を習得し、微生物学研究の基礎技術を身につけましょう。

無菌実験技術：めっき法

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