微小電極アレイを用いたマウス脊髄切片における神経回路の評価

aCSFを含む微小電極アレイ(MEA)をよく取ります。マウス脊髄スライスをウェルに配置し、加重ネットで固定します。

MEAウェルを記録システムに入れます。顕微鏡下で、MEA電極と介在ニューロンが豊富な領域である表在性後角またはSDHとの間の最大限の接触を確認します。

組織を平衡化するために、連続的な aCSF フローを維持します。

ニューロンは活動電位を介して通信します。ナトリウムイオンの流入は膜を脱分極させ、続いてカリウムイオンの流出が再分極を引き起こします。膜は一時的に過分極し、安静電位が回復するまで新しい活動電位を妨げます。

MEA電極からの自発的なニューロン活動を記録します。複数の電極にまたがるシグナルは、シナプスにリンクされたニューロンのネットワークを示しています。

カリウムチャネル阻害剤を導入して脱分極を延長し、ネットワーク全体の活動電位周波数と同期リズミカルな活動の増加につながります。

一致する信号を示す電極が多いほど、阻害剤を介した同期活性を示します。

背角活動の記録を開始するには、人工CSFで満たされた先端の大きいパスツールピペットを使用してスライスをインキュベーターからMEAウェルに移し、人工CSFを追加します。

細い短毛の絵筆を使用して、スライスを 60 電極の記録アレイの上に配置します。次に、組織の上に重みのあるネットを置き、組織を所定の位置に保持し、MEA電極との良好な接触を促進します。

MEAをレコーディングヘッドステージに配置します。倒立顕微鏡を使用して電極上の組織の位置をチェックし、できるだけ多くの電極が表面DHの下にあることを確認します。少なくとも2〜6個の電極がスライスに接触しないようにしてください。

カメラをデバイスに接続した後、分析中に使用するために、MEAを基準にしたスライスの基準画像を撮影します。次に、記録ソフトウェアでStart DAQを押して、すべての電極がクリアな信号を受信することを確認します。

次に、灌流入口と出口ラインを人工CSFで満たされたMEAウェルに接続し、灌流システムをオンにします。流量を確認し、過融合液のオーバーフローを防ぐのに十分な流出量であることを確認します。組織を5分間平衡化した後、生のベースラインデータを5分間記録します。

灌流入口ラインを人工CSFから4-アミノピリジン溶液に移動し、4-アミノピリジン誘発性リズミカルな活性が定常状態に達するまで12分間待ちます。次に、4-アミノピリジン誘発活性を5分間記録し、その後の記録で薬物をテストしたり、4-アミノピリジンの安定性をチェックしたりする準備をします。