Name: 滴タイトルセルのカプセル化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:09:54.000+00:00
Duration: 13 min 10 s
Description: 学ぶ3Dバイオプリンティングにおける細胞カプセル化技術。ソレノイドバルブを用いた精密な細胞射出と培地・ゲルによる細胞生存性の維持方法を解説。組織工学への応用可能性を探る。

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NIH3T3細胞の準備： イジェクト用A.セル<ol><li>細胞をトリプシン処理し、細胞培地で1:1に希釈し、T75フラスコから15mlのファルコンチューブに移す</li><li>遠心分離によってペレットに細胞をスピンダウン、上清を吸引し、DPBSで細胞を洗浄</li><li>再びペレットに細胞をスピンダウンし、上清を吸引除去する</li><li>メディアに懸濁し</li><li>血球計（〜200 T75フラスコあたりのX 10 4細胞/ mL）で細胞密度を決定する</li><li> 、細胞溶液を遠心上清を吸引除去し、細胞濃度を変化させるためのメディアの適切な量で再懸濁します。 </li></ol> B.セルの取り出し<ol><li>取り出しのために使用する前に渦細胞</li><li>シリンジに細胞溶液200μLを転送する</li><li>パルス発生器で適切なモードを設定します。 <ol><li>イジェクト単一の液滴と、複数の液滴のために（バースト）、&quot;E. BUR&quot;モードにパルスジェネレータを設定する</li><li>連続的な液滴の吐出の場合は、&quot;NORM&quot;モードにパルスジェネレータを設定する</li></ol></li><li>信号の設定を変更する<ol><li>ハイレベルとローレベルの出力電圧を設定する：5 VまでとLOL 0 VにHILと&quot;LIM&quot;LEDが点灯していることを確認してください</li><li>方形パルスとして信号を設定します。 </li><li> （&quot;DUTY&quot;）電磁弁は、&quot;WID&quot;の値を変更するか、デューティサイクルを変更することにより、液滴吐出用に開いている時間の量を変更</li><li> &quot;PER&quot;の値を変更することにより、放出の周波数を変更する</li><li> &quot;BUR&quot;の値を変更することにより、バーストで放出された液滴の数を変更する</li></ol></li><li>顕微鏡でイメージングするため、プリペアド基板上に細胞液を取り出します</li></ol> C.染色<ol><li> DPBSのmL当たり0.5μLカルセイン- AM、2μLのエチジウムホモ二量体と色素溶液を作る</li><li>色素溶液に浸します調製した基質</li><li>サンプルは37℃で10分間インキュベートすることができます·イメージングの前にC </li></ol>実験の検証<ol><li>ニコンのEclipse TE - 2000 U蛍光顕微鏡で<ol><li>スポット高度なソフトウェア（診断、（株）） </li><li> LIVE / DEADアッセイ</li></ol></li></ol>

著者に開示すべき事項はありません。

<table><tbody><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE-2000 U</td><td></td></tr><tr><td>ソレノイドバルブ式細胞イジェクタ</td><td></td><td></td><td></td><td>動作周波数: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V バルブドライバー: ドライブ電流 2.5 Amp</td></tr><tr><td>5ガロン携帯用エアタンク</td><td></td><td>Coleman</td><td>Powermate CT5</td><td>加圧空気: 30 PSI</td></tr><tr><td>圧力レギュレーター</td><td></td><td>Marsh Bellofram</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パルスジェネレーター</td><td></td><td></td><td>HP8112A</td><td>駆動周波数生成: 50 MHz</td></tr><tr><td>XYZステージ</td><td></td><td>Newmark Systems</td><td></td><td>ステッピングモーター付き: 6インチ移動xyステージ(NLS4-6-25), 2.5インチ移動zステージ(NLS4-2.5-25), 3軸コントローラー(NSC-G3), 分解能 0.1um</td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>細胞株</td><td></td><td></td><td>線維芽細胞</td></tr><tr><td>トリプシン</td><td></td><td></td><td></td><td>0.05% 溶液</td></tr><tr><td>NIH 3T3細胞培地</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>緩衝液</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75</td><td></td><td></td><td></td><td>組織培養フラスコ</td></tr><tr><td>プラスチック製コニカルチューブ</td><td></td><td></td><td></td><td>15 ml, 組織培養用</td></tr></tbody></table>

滴タイトルセルのカプセル化

Title Cell Encapsulation by Droplets

私の名前はHang Moonです。私はコンドームの研究をしている教授とともに研究を行っています。私たちはXYJステージを用いて、細胞の3D構造を作成しています。こんにちは、PEとLynnです。細胞のカプセル化、培地、およびゲルを用いた細胞プリンティングプロジェクトに取り組んでいます。これは、細胞培地上に細胞および細胞混合物を噴射するためのソレノイドバルブです。このソレノイドバルブは2本の信号線によって作動します。信号線は、こちらのドライボードから来ています。信号はここから送られてきます。このラインを通って、関数信号発生器へと繋がっています。まず、プログラムされた方法で生成されます。パルスを変更したい場合は、スイッチの行でプログラムを変更するか、コンピューターでプロセスジェネレーターを制御してください。電磁弁は電気信号によって開閉されますが、セルはそのラインを通じて供給されます。細胞および培地またはアグロゲルは、シリンジを介して供給されます。水の中にあるシリンジの内部は、空気によって軽く加圧されています。加圧空気は、こちらのラインのようなタンクから供給されます。このように、細いラインを通ったイオン化空気はエアフィルターを通過します。エアフィルターは、埃やその他の汚れを分離します。圧力発生器と呼ばれる装置は、ソーラーエアバルブを開閉するために使用される信号を生成します。コンピューターはP-I-B-U-S-Vコネクタを通じて接続されています。USBポートを使用して、コンピューター（ノートパソコン）に直接接続できます。こちら側で接続し、こちらの制御用ノートパソコンで操作を行います。ステージの移動とベルの開閉の動作を同期させたい場合、ラップトップなどの同一のコントローラーで制御することが可能です。これにより、開閉のタイミングや、移動および停止のタイミングを制御できるため、動作とベルの開閉を同期させることができます。このステージは電動ステージです。デッド信号線とモーターによって自動的に移動します。モーターの分解能は0.1 micrometersです。これにより、理想的には最大100 mmの線を描くことができます。ジェット軸がこのように上下に移動することで、基板とソーラーベルトの間のギャップを制御します。これにより、射出の高さを制御することが可能です。基板は、こちらのXステージおよびあちらのYステージに接続されており、XY平面上を移動します。したがって、いくつかの機能デモの右側のステージは、X、Y、およびZの3軸で構成されています。ジェットコンジェット軸またはXY軸は、ここにある信号によって制御されています。信号線はこのモーションコントローラーに接続されています。このモーションコントローラーは、手動で制御することができないため、マニュアルスイッチは一切備わっていません。ノ

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

我々は、合成ハイドロゲル内の細胞の3次元（3D）カプセル化するためのプロトコルを提示する。カプセル化手順は、次の2つの一般的に使用される架橋の方法（マイケル型の加算と光 -...

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オルガノイドの培養および3Dイメージングのためのハイスループットプラットフォーム

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滴タイトルセルのカプセル化

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