A Primary Neuron Culture System for the Study of Herpes Simplex Virus Latency and Reactivation

Mariko Kobayashi; Ju-Youn Kim; Vladimir Camarena; Pamela C. Roehm; Moses V. Chao; Angus C. Wilson; Ian Mohr

doi:10.3791/3823

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

A Primary Neuron Culture System for the Study of Herpes Simplex Virus Latency and Reactivation

単純ヘルペスウイルスの待ち時間と再活性化の研究の主ニューロン培養システム

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12:22 min

April 2, 2012

DOI: 10.3791/3823-v

Mariko Kobayashi¹, Ju-Youn Kim¹, Vladimir Camarena², Pamela C. Roehm³, Moses V. Chao^2,4,5,6,7, Angus C. Wilson¹, Ian Mohr¹

¹Department of Microbiology,New York University School of Medicine, ²Molecular Neurobiology Program, Skirball Institute for Biomolecular Medicine,New York University School of Medicine, ³Department of Otolaryngology,New York University School of Medicine, ⁴Department of Cell Biology,New York University School of Medicine, ⁵Department of Physiology and Neuroscience,New York University School of Medicine, ⁶Department of Psychiatry,New York University School of Medicine, ⁷Center for Neural Science,New York University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

プロトコルは、単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）の待ち時間と再活性化ヘルペスを研究するための効率的かつ再現可能なモデルシステムを説明しています。アッセイは、均質な交感神経ニューロンの培養を採用し、RNA干渉と組換えタンパク質の発現を含むさまざまなツールを使用してウイルスニューロンの相互作用の分子解剖を可能にします。

この実験の目的は、一次ニューロン細胞培養システムを利用して、単純ヘルペスウイルスの潜伏と再活性化を研究する方法を実証することです。これは、最初にRA胚から上頸神経節ニューロンを単離し、非ニューロン細胞の除去後に解離神経節から単離されたニューロンを培養することによって達成されます。潜伏性HSV感染は、EGFPウイルスを使用して、溶解性複製阻害剤の存在下でニューロンに感染することで確立されます。

次のステップは、潜伏感染した培養物の再活性化を誘導することです。最後に、EGFPの発現を経時的にモニタリングすることにより、再活性化の効率を評価します。最終的には、さまざまなニューロンシグナル伝達経路が、化学的阻害剤、RNA干渉、および遺伝子送達を使用して、単純ヘルペスウイルスの潜伏と再活性化をどのように制御するかを示す結果を得ることができます。

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