マウスのビデオ眼球運動記録法

この手順の全体的な目標は、マウスでビデオo図像を作成することです。これは、最初にマウスに頭蓋骨に台座構造を装備することで達成され、これにより、特別なヘッドボディ拘束装置で頭を固定できます。2番目のステップは、マウスをビデオoculセットアップに置き、ビデオ瞳孔追跡システムをキャリブレーションすることです。

次に、眼球運動は、前庭および視運動刺激の大きなレパートリーを使用して眼球運動系が活性化されている間に記録されます。最後のステップは、これらの眼球運動を分析することです。最終的には、正常なマウス、薬理学的に処理されたマウス、または遺伝子組み換えマウスのビデオO図像を使用して、運動行動の生理学を探求することができます。

この方法は眼の運動系に関する洞察を提供することができますが、ヒトの病状を模倣するマウス変異体を使用して、小脳前庭または眼起源の疾患の研究にも適用できます。この手順を開始するには、アイソフ、フッ素、および酸素の混合物を含むガスチャンバー内でマウスに麻酔をかけます。次に、マスクを通してガスを送達することにより、麻酔を維持します。

次に、加熱パッドとアナルサーモセンサーを使用して、マウスの体温を摂氏37度に保ちます。その後、眼の軟膏を塗布して眼を乾燥から保護し、背側の頭蓋毛を剃り、手術部位を清掃します。その後、頭蓋骨の背側頭蓋面を露出させるために正中線を切開し、表面をきれいにして乾かします。

次に、bgmaからラムダにリン酸を一滴加えます。15秒後、エッチングを取り外し、食塩水で頭蓋表面を洗浄し、再度乾燥させます。エッチングされた頭蓋表面と空気の上部にオプティボンドプライムを一滴塗布します。

30秒間乾燥させます。次に、オプティボンドプライムの上にオプティボンド接着剤を一滴加えます。UVライトで1分間硬化させます。

その後、接着剤層をカリスマ複合材料の薄い層で覆います。マグネットネジ穴のあるコネクタと取り付け部位は、複合材料に埋め込まれています。次に、UVライトで複合材料を硬化させます。

繰り返しになりますが、必要に応じて、複合材の追加層を適用し、光で硬化させます。手術後少なくとも3日間はマウスが回復するのを待ちます。次のステップは、マウスを拘束装置に置き、磁石と1本のネジでマウスの頭と本体の拘束装置をXYプラットフォームに取り付けて、マウスの頭を拘束

XYプラットフォームを使用して、マウスの頭をターンテーブルの中央より上に置き、マウスをピッチYa軸とロール軸上に移動できるようにします。次に、アイスキャンシステムによって生成された目の視覚画像を使用してアイを位置合わせすることにより、ヘッドを正しいピッチyaとロール角度に配置します。これで、ターンテーブルはACサーボ制御モーターに取り付けられました。

ターンテーブルの位置は、ターンテーブルの軸に取り付けられたポテンショメータで監視されます。ターンテーブルは、ランダムなドットパターンの円筒形の周囲スクリーンで覆われており、ACサーボ制御モーターも装備されています。円筒形スクリーンの位置は、その軸に取り付けられたポテンショメータによって監視されます。

画面はハロゲンライトで照らすことができます。ターンテーブルとその周囲の画面の動きは、入力出力インターフェースに接続されたコンピューターによって制御されます。ターンテーブルと周囲の画面位置信号は、入力出力インターフェースによってデジタル化された20ヘルツのカットオフ周波数によってフィルタリングされ、このコンピューターに保存されます。

マウスの目は、3つの赤外線エミッターによって照らされています。2つはターンテーブルに固定され、3つ目はカメラに取り付けられています。この3番目のエミッターは、キャリブレーション手順中および眼球運動の記録中に使用される参照角膜反射を生成します。

ズームレンズを搭載した赤外線CCDカメラがターンテーブルに取り付けられており、マウスヘッドにピントを合わせています。ターンテーブルの中央にあります。カメラのロックを解除して、ターンテーブルの軸を中心に正確に20度移動できます。

キャリブレーション手順中。次に、ビデオ信号はアイトラッキングシステムによって処理され、120ヘルツのサンプルレートで瞳孔と基準角膜の水平方向および垂直方向の反射を追跡できます。次に、基準角膜基準位置、瞳孔位置、および人物サイズ信号は、入力出力インターフェースによってデジタル化され、テーブルおよび周囲の画面位置信号と同じファイルに格納され、眼球運動を較正し、瞳孔のビデオ画像がモニターの中央に位置し、基準角膜基準の表現が瞳孔の真上の目の垂直正中線上にあります。

次に、カメラをピーク20度ずつ数回動かします。ターンテーブルの垂直軸の周りをピークします。追跡された瞳孔の位置と、カメラの極端な位置に記録された参照角膜参照を使用して、瞳孔の回転半径を計算します。

さまざまな照明条件下でこれらの手順を何度も繰り返して、瞳孔のサイズと瞳孔の回転の関係を判断します。次に、瞳孔の回転補正曲線を作成します。次に、参照角膜の参照位置、瞳孔の位置、および瞳孔のサイズを測定することにより、目の角度位置を計算します。

瞳孔の回転補正曲線から瞳孔の回転値を抽出し、次の式を使用して目の角度位置を計算できます。ここでは、VVOR眼球運動の実験を実演しています。次に、目の位置、テーブルの位置、および周囲の画面の位置を角度位置に変換します。

次に、Butterworth Lowpassフィルターを使用して、アイテーブルと周囲の画面の角度位置を区別してフィルタリングします。20 ヘルツのサブのカットオフ周波数を使用して、毎秒 40 度の検出しきい値を使用して、眼球速度信号から secod を削除します。次に、試行の個々のサイクルを使用してテーブルと目の速度信号を平均化し、平均化された信号を適切な関数で適合させます。

一般に、正弦波速度刺激が使用され、平均サイクルには符号または余弦関数が適合します。この動画では、周囲のスクリーンが回転することで視線運動が発生し、0.2〜1ヘルツの周波数範囲で1.6度の振幅で周囲のスクリーンを回転させる視運動反射が引き起こされる様子を捉えています。マウスの光学運動システムは、低周波数範囲では高周波範囲よりも効率的であることが示されています。

こちらも、眼球運動がどのように生成されるかを示す動画です。暗闇でマウスを回転させて前庭眼反射を引き起こすことにより、ターンテーブルを0.2〜1ヘルツの周波数範囲で1.6度の振幅で回転させます。マウスの前庭眼系は、低周波領域よりも高周波領域でより効率的であることが示されています。

ここでは、光の中でマウスを回転させて視覚的に強化された前庭眼球反射を引き起こすことによって眼球運動がどのように生成されるかについての別の動画を示しています 周囲の画面が十分に照らされている間、ターンテーブルを0.2〜1ヘルツの周波数範囲で回転させ、周囲の画面が十分に照らされている間、マウスは全周波数範囲にわたって効率的な補償眼球運動を生成することが示されています。そして、この動画は、前庭眼反射を適応的に増加させることで運動学習がどのように達成されたかを示しています。位相がずれたトレーニング パラダイムを使用すると、ターンテーブルを周囲の画面と位相をずらして回転させると、このマウスの VOR ゲインが増加します。

このビデオを見た後、マウスでビデオoculを実行する方法をよく理解しているはずです。