Name: C. elegansの走化性アッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: 学ぶCaenorhabditis elegansの走化性アッセイ法。シンプルで低コストな手法により、化合物に対する線虫の応答を定量的に評価し、走化性指数を算出して行動学的解析を支援します。

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私たちはこの仕事に資金を提供するためのクイーンズ大学で生命科学と芸術と科学の学部に感謝。同様に、我々は必要な試薬、機器や技術サポートを提供するためにチン·サンウ研究室に感謝します。また、議論への貢献のために特にトニーQGEM 2011、彼に感謝します。

1。ワームの準備/洗濯<ol><li>若い成人11にワームを同期させます。 </li><li>ただOP50 E.の芝生をクリアした段階的なワーム5センチメートル走プレート上にSの基底のピペット2ミリリットル大腸菌 。ワームがバッファにプレート表面から洗浄されていることを確認するために、必要に応じてプレートを傾けて。 </li><li>マイクロ遠心チューブにワーム-S基底解のピペット1ミリリットル。 </li><li> 10秒は6,600 rpmでPicoFugeを使用するために遠心分離します。 </li><li>邪魔されずにワームのペレットを残して、Sの基礎を吸引。 </li><li>ワームを洗浄するために数回反転、マイクロ遠心チューブに1ミリリットルS基礎溶液を加える。 </li><li>手順1.4から1.6、さらに3回繰り返します。 </li><li> CAの最終体積に上清を吸引10秒5回目、今回のために遠心。 100μlの。 </li><li>各2μlのサンプルでは50〜250ワームが存在することを確認するためのNGMプレート上にワームのピペット2μlの。調整するSの基礎の小さいまたは大きい音量でワームを再懸濁することにより、必要に応じてSの基底におけるワームの濃度。 </li><li> 1までの時間ワームを洗浄した後すぐにアッセイでワームを使用してください。 </li></ol> 2。テストプレートを準備<ol><li> 4等しい象限に皿を分ける5センチメートルプレートの下側​​をマーキング。走化性寒天又はNGMを使用することができる。 3試験の最小値は、テストされている遺伝的系統ごとに必要とされています。 </li><li>原点を中心半径0.5センチメートル（ 図1）の円をマークします。 </li><li>サイトが起源と互いに等距離にあることを確認し、 &quot;コントロール&quot;のどちらか &quot;テスト&quot;のための &quot;T&quot;または &quot;C&quot;と各象限内のポイントをマークします。点が原点から少なくとも2cm離れてなければなりません。テスト象限と右上やコントロールなどの左下の象限（ 図1）のように左上と右下の象限をマーク。 </li></ol> 3。アッセイを実行する</P&gt; <ol><li>試験化合物および0.5 Mアジド（麻酔が象限に到達するとワームを逮捕するために使用される）の同等のボリュームを組み合わせることにより、試験液を混ぜる。 0.5 Mアジ化試験化合物を希釈するために使用される溶媒を組み合わせることにより、対照溶液を混ぜる。 </li><li>起源へのペレットからワーム溶液（1.8で調製した）（2線が交差）のピペット2μlの。 </li><li> 2 &quot;T&quot;のサイト上に試験溶液の直後に、ピペット2μlの。同様に、二つの &quot;C&quot;のサイト上に対照溶液と同じ量をピペット。 </li><li>ワームと匂い滴が寒天に吸収された後、蓋を交換して、プレートを反転。 </li><li> 60分後、4℃のインキュベーターにワームを配置。それはカウントすることができた場合にのみインキュベーターからプレートを取り外します。室温でワームのままにしておくと、彼らは再び結集することを可能にする。 </li><li>完全に内部のCIRCを越え各象限におけるワームの数を記録ル。 </li><li>試験および制御象限の両方で制御ソリューションを使って手順3.2から3.6を繰り返します。これは、制御板として機能します。そのような3つのプレートは適切なコントロールとして機能するように作られており、実行する必要があります。 </li></ol> 4。スコアの解釈/走指数の決定<ol><li>式（1）を使用して走化性指数を計算します。これは、-1.0と+1.0の間で走指数が得られます。 </li></ol> （1） 走化性指数=（テスト象限の両方で＃ワーム - 両方のコントロール象限＃ワーム）/（得点ワームの＃合計） +1.0スコアが目標に向かって最大限の魅力を示しており、化学的な目標を含む象限に到着ワームの100％を表します。 -1.0のインデックスは、最大反発力の証拠である。同様のアッセイ法は、既に3（ 表1）を用いてきた。 <ol start="2"><li>平均Chemotaxiを報告のインデックス（CI）及び平均値の標準誤差（SEM）。試験および対照プレートからのデータを比較するスチューデントのt検定を実行します。 </li></ol>

<ol><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74, 515-527 (1993).</li>
<li>Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemosensory+neurons+with+overlapping+functions+direct+chemotaxis+to+multiple+chemicals+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans.</a> Neuron. 7, 729-742 (1991).</li>
<li>Lee, J., Jee, C., McIntire, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+preference+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Ethanol preference in C. elegans.</a> Genes Brain Behav. 8, 578-585 (2009).</li>
<li>Swierczek, N. A., Giles, A. C., Rankin, C. H., Kerr, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+behavioral+analysis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput behavioral analysis in C. elegans.</a> Nat. Methods. 8, 592-598 (2011).</li>
<li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 70, 817-821 (1973).</li>
<li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant-specific+adaptation+pathways+generate+olfactory+plasticity+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans.</a> Neuron. 14, 803-812 (1995).</li>
<li>Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+Positive+Butanone+Learning%2C+Short-term%2C+and+Long-term+Associative+Memory+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays.</a> J. Vis. Exp. (49), e2490(2011).</li>
<li>Troemel, E. R., Kimmel, B. E., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+chemotaxis+responses%3A+sensory+neurons+define+olfactory+preferences+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Reprogramming chemotaxis responses: sensory neurons define olfactory preferences in C. elegans.</a> Cell. 91, 161-169 (1997).</li>
<li>Pierce-Shimomura, J. T., Morse, T. M., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fundamental+role+of+pirouettes+in+Caenorhabditis+elegans+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The fundamental role of pirouettes in Caenorhabditis elegans chemotaxis.</a> J Neurosci. 19, 9557-9569 (1999).</li>
<li>Frokjaer-Jensen, C., Ailion, M., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ammonium-acetate+is+sensed+by+gustatory+and+olfactory+neurons+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ammonium-acetate is sensed by gustatory and olfactory neurons in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 3, e2467(2008).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+Methods%3A+Synchronization+and+Observation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019(2012).</li>
<li>Sengupta, P., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+fate+specification+and+differentiation+in+the+nervous+system+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Cell fate specification and differentiation in the nervous system of Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Genet. 18, 73-80 (1996).</li>
<li>Hart, A. C. Behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHart%2C+AC+%22WormBook%22">WormBook</a>. , (1895).</li>
</ol>

我々は、開示することは何もありません。

走化性は、神経細胞及び細胞機構の複雑なセットによって制御されているが、容易にかつ客観的に走化性アッセイを用いて定量することができる。アッセイから最良の結果を得るためには、特定の重要なステップを払わなければなりません。まず、ワームをステージングすると、一貫性のある実験結果をもたらすに不可欠である。異なるライフステージでのワームは13異なる振る舞い;ので混合ステージワームスキュー実験結果をすることがあります。第二に、すべてのE.を確保コリワーム洗い流す残留細菌がアッセイを妨害する可能性があるので、非常に重要です。麻酔薬、0.5-1 M-アジ化ナトリウムは、それが置かれた場所から1cmの半径内のワームを逮捕することに注意することも重要である。このことを考えれば、アジは少なくとも2cm原点から配置することが最も重要です。アジ、原点より1.5 cm以下を発見された場合、ワームは、内側の円内に麻痺され、いずれも得点されません。さらにアジドに、さらに配置され象限は、ワームが移動することができます。プレートはまた、試験間の一貫性を確保するために、結果が重力バイアスによって混乱されないようにレベル...

ウォードは、最初の1973年5で走化性アッセイを開発し、それ以来、それははるかに到達するアプリケーションを持っています。神経生物学は、走化性アッセイのさまざまな方法を使って恩恵を受けた一つのフィールドである。嗅覚適応、学習および記憶の単純な形式は、C.において実証されている走化性アッセイ6を使用してエレガンス 。それらはまた、C.を示すために使用されているエレガンスは、エタノールワームの行動の可塑性を示していないだけ寛容結果を開発することができますが、それはまた、ワームは人間3でアルコール依存症の研究に非常に有用であることを示しています。アッセイは偶数℃の能力を実証するために開発されているelegansのアソシエーションが化学誘引物質と食品（OP50）7間ワームによって作られていることを示すことによって、短期および長期記憶を保存する。さらに、C.に関する広範な情報は、現在入手可能な与えられたelegansのゲノム、chemotaxiC.のS振る舞いエレガンスは、変異1,8を誘導することによって何度も変更されています。これは、Cの開発など多くのエキサイティングなエンジニアリングの可能性を、可能にバイオレメディエーションツールとしてエレガンス 。したがって、1973年に走化性アッセイの初期の開発以来、それが頻繁に変更され、さまざまな分野の中で謎を解明するために使用されています。 特定のアッセイは、標的に向かってワームが撮影した特定のルートを発見することを目的とした。この種の典型的アッセイはウォード5によって開発されました。三ワームを15分間溶かした寒天上に置いた。彼らの動きは、それらが、プレートの中央に誘引へ勾配アッププレートの周囲から旅し、彼らが残した痕跡によってトレースされた。プレート上のすべてのワームは、各試験の終了時にクロロホルムを使用して逮捕された。この方法の一つの子孫誘引し、コントロールとプレートの中央に単一のワームを置い起源2からT等しく反対の距離。 ピアース·下村ら 。走9に関わる動きの正確な性質を観察するアッセイ法を開発しました。個々のワームが誘引のソースで最高潮に達する、誘引または放射状の形の勾配の均一濃度を含むいずれかの9センチメートルペトリ皿に入れた。ワームを認識し、コンピュータ·ソフトウェア·プログラムが観察された挙動を記録した。アッセイは、ワームを確実にするために実行したとして自動的にシャーレを調整する段階と一緒に働いていた顕微鏡に取り付けられたビデオカメラの視野内に残った。このことから、より詳細な情報は、Cで表示されたピルエットの原因について、発見されましたエレガンス 。 ここで説明したものに類似の他のアッセイは、試験化合物へのワームの大規模な人口の応答をテストした。 2象限走化性アッセイはあったC.様々な神経細胞、受容体、およびシグナル伝達分子がでるという役割を探索するために使用される線虫は、種々の化合物1に曝した。 20-50の間に洗浄したワームが麻酔、アジ化ナトリウム（NaN 3を）と一緒に極両端誘引とコントロールとのプレートの中央付近に配置した。 60分後、-1.0から+1.0までの値を有する走化性インデックスが誘引またはコントロールに貼付されたどのくらいのワームの差に基づいて生成した。以前のアッセイは厳密に非運動ワームを評価するために失敗したものの、同じような走化インデックスは、この記事で報告されたアッセイで使用されていました。このアッセイは、さらに走化性に神経切除の効果を試験に適用した。 100-200ワームは、4つの象限3を含むプレートの中央に配置した場合に前述のアッセイの別の変形を行った。隣接象限のいずれかのテストが含まれていたり、物質を制御します。前のアッセイと同様に、ワームがスコアリングされる前に、アジ化ナトリウムの作用により固定化した。同様の方法は、C.の応答を評価する方法として、ここで説明されている種々の化合物に虫 。しかし、以下の方法は、唯一不動ワームから携帯分離閾値距離に合格したワームを評価するという利点を持っています。 他のアッセイは、不動のワームを無視するための同様のガイドラインを取り入れています。 Frøkjær·ジェンセンら 。揮発性および水溶性化合物10の両方をテストするために使用できる汎用性の高いアッセイを開発した。ペトリ皿を、4つの象限に分割した。上部と下部の象限は、溶媒を含まなかった。水を含んでいた左象限、右は誘引が含まれていました。水溶性化合物がAGAに直接配置されたのに対し、揮発性の匂い物質をテストする場合、分析物は、適切な象限にわたって、シャーレの蓋の上に置いたR。 Cの走化性応答を評価するための現在の存在のメソッド線虫は常に使用効率と精度の容易さを最適化するために洗練されている。アッセイは、ここで説明しながら、だから、ワームの最大数（最大スループット：Lee らによって実証スループットよりわずかに大きいプレート当たり250ワーム/時間、3）を評価する機能があり、この方法の本当の強さはある以前アッセイ（ 表1）の属性の多くの簡潔集大成。

<table><tbody><tr><td>S Basal (- コレステロール) [5.8 g NaCl; 1 M K リン酸緩衝液、pH 6.0; dH2O を1リットルまで。] オートクレーブ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PicoFuge</td><td>Stratagene</td><td>400552</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖用</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000ピペット</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P10ピペット</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5 M ナトリウムアジド</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ケモタキサスアガー [1.6% BBL-アガー（ベントン・ディキンソン）または2% Difco-アガー。オートクレーブ。5 mM カリウムリン酸、pH 6.0; 1 mM CaCl2、1 mM MgSO4を加える]</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>エタノール/蒸留水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>テスト化合物 (例: 0.5% ジアセチル)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アガー</td><td>Bio-Rad</td><td>166-0600</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Amresco</td><td>CA97062-046</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>VWR</td><td>CA12001-120</td><td></td></tr><tr><td>NH4OH</td><td>BDH</td><td>CABDH8641-2</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Tween 20</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td></td></tr></tbody></table>

c. elegansの走化性アッセイ

C. elegans Chemotaxis Assay

多くの生物は、食料源を模索有害物質を避け、仲間を見つけるために走化性を使用しています。 線虫（Caenorhabditis elegans）は、印象的な走化性行動を持っています。 着臭剤のワームの応答を試験後ろ前提領域に置き、臭剤に応答誘発動きを観察することである。でも、多くの利用可能なアッセイで、有意なサンプルサイズを維持しながら、互いにワームの相互作用を最小限に抑えながら、対照および試験領域の両方に対して開始位置ワームを最適化が進行中1-10の作業のままである。ここで説明する方法は、Bargmann らによって開発されたアッセイ1を変更することによってこれらの問題に対処することを目的とする。ペトリ皿を4つの象限に分割され、 &quot;テスト&quot;二マーク二つの対向する象限は &quot;コントロール&quot;を付している。麻酔薬は、すべてのテストおよび制御部位に配置される。ワームがcircl、プレートの中央に配置されているeは非運動ワームは無視されることを保証するために原点を中心となった。彼らは試験および対照試料から等距離にあるように、4つの象限システムを利用ではなく、1 2または2 1にかかわらず、それらが始まった起源の側の、ワームの動きにバイアスを排除します。これは、ワームを遅らせたり、彼らの意図されたパスの不正確な解釈をもたらし、多くの遠回りルートを取るように強制することができ匂い、に対応するために他のワームのクラスタを通過することを余儀なくされているワームの問題を回避します。また、このメソッドは、より大きなサンプルサイズを有する研究者が無人の検定を実行し、割り当てられた時間の有効期限が切れた後のワームを獲得できるようにすることで、実用的な利点を示しています。

野生型（N2）C.を比較するODR-10（KY10）変異にエレガンス 。 私たちは、知られているCをジアセチル使用エレガンスは化学誘引物質、ジアセチル1,12の受容体を欠いた変異のそれに野生型ワームを比較する。 野生型（N2）ワームを走化指数は、エタノール、および0.839から0.100±0.066であった±0.031から0.5パーセントジアセチル。予想通り、ジアセチル、野生型ワーム（P &lt;0.003）より有意な化学誘引性応答を誘発する。これとは対照的にジアセチル受容体を欠いODR-10（KY10）変異体はコントロール（ 図3）から、有意差は認められなかったジアセチルCIを持っていた。 <table border="1"><tbody><tr><td> 筆者 </td><td> ＃ワーム/プレート </td><td> <stro...

定量の走化性応答の評価方法<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em&gt;記載されている。走化指数（CI）は正確に特定のターゲットへのワームの応答を評価し、興味のある株と化合物との間の比較のプラットフォームとしての役割を果たすための方法として採用されました。

C. elegansの走化性アッセイ

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

以下の実験の全体的な目的は、簡単で安価なアッセイを使用してCエレガンスの化学走性反応を定量化することです。これは、ステージングされたワームを分離し、プレートの中央に配置することで達成されます。すべてのテストおよび制御部位から等距離にある各部位には、関心のある化合物または制御化合物が、ワームが近づくにつれてワームを停止させる麻酔薬と組み合わせて配置されます。60分後、プレート上のワームの最終的な分布を集計し、ワームの位置の比率を使用してアッセイ指数を提供します。最終的に、海の優雅さのある特定の化合物への引力を定量化することで、基礎となる実験操作の行動的結果を評価することができます。この技術の主な利点は、その先行技術の多くの有益な側面を含みながら、より使いやすさを可能にすることです。このアッセイは、海のエレガンスの行動に関する洞察を提供し、特に神経遺伝学的操作やその他の神経生物学的アッセイと組み合わせて有用です。5センチメートルのプレートに化学走性アガーまたはNGMを載せることから始めます。プレートの裏側を4つの等しい四分円に分割します。テストされる遺伝株ごとおよびテストされる条件ごとに少なくとも3枚のプレートを少なくとも3回の試行のために準備します。次に、原点の周りに0.5センチメートルの半径の円をマークします。次に、反対側の四分円にテストの場合はT、制御の場合はCとマークし、部位が原点および互いに等距離であることを確認します。このアッセイでは、部位は原点から少なくとも2センチメートル離れている必要があります。5センチメートルの化学走性プレート上で同期した発育の若い成体ワームを準備しておきます。発育段階が異なるワームは、分析物に対して異なる反応を示す可能性があります。そのため、アッセイで使用されるすべてのワームが発育の同じ段階にあることが非常に重要です。ワームがOP 50 e coliの層を消去したら、プレートにS基礎バッファーを2ミリリットル注入します。プレートを操作して、すべてのワームをバッファーに移動させ、ワームを洗浄します。バッファーにワームを1ミリリットル注入し、マイクロ遠心チューブに入れ、10秒間遠心分離機で遠心分離します。ピコフュージを6,600 RPMで回転させ、アスピレートしてベースを残し、ワームのペレットは動かさずにそのままにします。次に、同じ方法でワームをさらに3回洗浄します。Sベースバッファーをチューブに加えてチューブを反転し、ワームを溶液に戻します。最後の洗浄の後、ワームをさらに10秒間遠心分離し、最終的に100マイクロリットルの容積になるまで上清をアスピレートします。次に、NGMプレート上にペレットから2マイクロリットルの洗浄したワームを移行して、十分なワームの密度を確保します。少なくとも50匹のワームが必要ですが、250匹を大きく超えることはできません。ワームが多すぎる場合は、ESPベース溶液の容積を増やします。ワームが少なすぎる場合は、それらを遠心分離して再懸濁し、より少ない容積で懸濁します。ワームチューブをフュームフードに入れます。準備ができたら、ワームは最大1時間化学走性アッセイに使用できます。まず、溶液を準備します。テスト溶液を、テスト化合物と0.5モルのアジド麻酔薬を等量で組み合わせることで混合します。次に、テスト化合物を希釈するために使用した溶媒の制御溶液を0.5モルのナトリウムアジドと混合します。次に、テストプレートを準備します。まず、テストプレートの原点にペレットから2マイクロリットルのワーム溶液を注入します。次に、臭気物質を加え、テスト溶液を2つのT部位に2マイクロリットル注入し、制御溶液を2つのC部位に2マイクロリットル注入します。ワームと臭気物質の滴がアガーに吸収されたら、蓋を戻し、プレートを反転させ、60分アッセイ時間にします。ナトリウム。アジの拡散時間を試行間で標準化するために。ワームを臭気物質の直前に追加することが重要です。また、各プレートを完全に準備し、次のプレートを準備する前にアッセイを開始する必要があります。60分間の試行の後、ワームを4度セルシウスの冷蔵庫に入れます。後に、プレートを冷蔵庫から取り出し、数えることができる状態になったら取り出します。ワームをすぐに数えず、室温で放置すると、ワームが動き始める可能性があります。再度。データから、内側の円を完全に渡ったワームの位置を記録します。化学走性指数を計算します。この値は-1から+1の範囲で、最大反発から最大吸引を表します。テストおよび制御の四分円の両方で制御溶液を使用してプロセスを繰り返します。これは制御プレートとして機能します。3。このようなプレートは、各実験条件に対して作成および実行する必要があります。ジアセチル。既知のCエレガンス化学吸引物質が、ジアセチル受容体を持たない変異体と野生型ワームを比較するために使用されました。予想通り、ジアセチルは野生型ワームから有意な化学吸引反応を引き起こしました。対照的に、ODR 10変異体は、エタノールという制御化合物と同じようにジアセチルに引き付けられませんでした。この技術を習得すると、適切に行われれば90分以内で完了できます。このビデオを見て、アナログ溶液に対する海のエレガンスの化学走性反応を効率的に評価する方法について十分な理解が得られるはずです。すべてのテストされたワームが同期した発育段階を達成し、十分な数のワームが使用されていることを確認するために特別な注意を払ってください。各試行。

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ここでは、線虫の連合学習と短期と長期の連想記憶をテストする方法を説明します。これらの人口のアッセイは、揮発性の臭気物質に向かってchemotaxにワームの能力を採用しており、走化性ブタノンで食べ物をペアリング時に正の関連付けを形成する。コンディショニング期間の数を増やすと、長期記憶を誘導する。...

C. elegansの正ブタノンの学習、短期、および長期連想記憶アッセイ

ECIS /タクシーと細胞走化性の測定

このビデオでは、線虫C.エレガンスの走化性を紹介し、硫酸銅に対する走化性回避をテストするサンプルプロトコルを示しています。...

C.エレガンス走化性アッセイ:線虫の化学感覚を試験する方法

研究者は、線虫が感知して応答する電場を適用することにより、C.

Electrotaxis Assay:C. elegansの移動を観察する方法

にオンデマンド歩行を誘導する半自動微小電気流体方式...

のオンデマンド定量分析のためのマイクロ流体ベースの走電性<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em&gt; &#39;ロコモーション

私たちは、ワームでamylopathiesの側面を研究するための方法を説明...

A<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</emAmylopathyの研究のための&gt;モデルシステム

本発明者らは、集団ベースアッセイにおいて可溶性化合物に対するCaenorhabditis elegansの選好を自動的に分析することができる行動記録設定およびプロトコルを提示する。この記事では、ビヘイビアチェンバーの構築、ビヘイビアアッセイプロトコル、およびビデオ分析ソフトウェアの使用について説明します。...

線虫集団ベースの化学感覚嗜好アッセイの自動解析

我々はこれまでに、 カエノラブディティス・エレガンスが 、それぞれ質量トレーニングと間隔トレーニングによって短期および長期の連想記憶を形成するためのプロトコルを開発しました。ここでは、1-プロパノールと塩酸をそれぞれ条件刺激と無条件刺激としてペアリングして嫌悪連想記憶を形成することにより、 C.エレガンスの...

カエノラブディティス・エレガンスにおける2つの化学物質のペアリングによる嫌悪的連想学習と記憶形成

線虫Caenorhabditis elegansの走化性における連想学習の測定

Caenorhabditis elegansにおける揮発性性フェロモン抽出と化学吸引アッセイ

学ぶCaenorhabditis elegansの走化性アッセイ法。シンプルで低コストな手法により、化合物に対する線虫の応答を定量的に評価し、走化性指数を算出して行動学的解析を支援します。

C. elegansの走化性アッセイ

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