Name: 生分解性ポリマーナノ粒子を用いた治療的血管形成のためのプログラミング幹細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-27T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 学ぶ 生分解性ポリマーナノ粒子を用いた幹細胞プログラミングによる治療的血管形成の手法。ヒト脂肪由来幹細胞へのVEGF遺伝子導入とマウス後肢虚血モデルでの評価方法を解説します。

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著者らは、資金調達のためにアメリカ心臓協会国立科学開発グラント（10SDG2600001）、スタンフォード大学のBio-Xの学際的イニシアティブプログラム、スタンフォード医科学者の研究計画を承認したいと思います。

1。ポリマー合成<ol><li>ドラフト内で、ブタンジオールジアクリレート（C）の3,523 mgの秤量し、攪拌棒を含むガラスシンチレーションバイアルに移す。 </li><li>予熱5 - アミノ-1 - ペンタノール（32）が90°Cに塩を可溶化するために、次いでドラフト内で、1,533 mgの32を秤量し、Cを含有するシンチレーションバイアルに追加するこの方法は、モル比をもたらすであろうCの：32 = 1:1.2。 </li><li>すぐに撹拌プレート上に両方のソリューションを含むバイアルを置きます。 600 rpmで撹拌速度を設定します。 </li><li> 90℃に設定したオーブンにシンチレーションバイアルを転送4時間1,000 rpmに攪拌速度を設定します。撹拌棒が動かなくなった場合は、速度を下げる。 4時間後、下300rpmにスピードとは、別の12〜16時間90℃で維持する。 </li><li>攪拌棒を含むガラスシンチレーションバイアル中の無水テトラヒドロフラン（THF）10mlにC32の5グラムを追加します。完全に溶解するまでハイに箔と渦に包みます。 </li><li>別のガラスシンチレーションバイアルのコンタ中攪拌棒ining、Tetraethyleneglycoldiamineの10ミリ（122）を追加します。 THFを40ミリリットルを追加します。 </li><li>一緒になって、その後5分間攪拌プレート上で両方のバイアル（C32および122）を配置します。ホイルで覆い、24時間400 rpmで撹拌し、室温で残す。最終生成物を、C32-122と呼ばれている。 </li><li> C32-122の各5グラムバッチの5×50ミリリットルファルコンチューブを量る。ノートブック内の各管の質量に注意してください。 </li><li>各50mlのFalconチューブに転写無水ジエチルエーテル30mlを。 </li><li>各50ミリリットルファルコンチューブにC32-122の10ミリリットルを転送します。 </li><li>渦ファルコンチューブを激しく次いで、2分間2500rpmで遠心する。注：抽出されたポリマーは、チューブの底部に収集されます。 </li><li>上側の解決策を捨て、ステップ1.9および1.11をさらに2回繰り返します。 </li><li>一晩デシケーターや真空中で抽出されたC32-122を含む、オープンチューブを配置します。すべてのチューブは、光から保護されていることを確認してください。 </li><li>最終的な質量を決定するために、C32-122を含む全てのチューブを量るポリマーを抽出した。 </li><li> 100 mg / mlの濃度で無水DMSO中で抽出された重合体を溶解する。 </li><li>光と水分から保護し、-20℃で溶解したポリマーを保管してください。 </li></ol> 2。細胞播種<ol><li>プレコート0.1％（wt / vol）のゼラチンとT-150組織培養フラスコの底。ゼラチンは30〜45分間フラスコ内で維持する必要があります。ゼラチンコーティングはADSCの接着を支援します。 </li><li>プレコートしたT-150フラスコから吸引ゼラチン。 </li><li> 10％FBSを含有するDMEM 20mlのフラスコに、1％ペニシリン/ストレプトマイシンおよび10 ngの4×10 6のADSC（≤継代3）を追加/ mlのbFGFを。 </li><li> 37℃で、一晩で5％CO 2のインキュベーター内でのT-150フラスコに配置します。 </li><li>翌日、トランスフェクション手順を開始する。 </li></ol> 3。ナノ粒子の調製とトランスフェクション<ol><li>次の手順はあたり16.1μgのプラスミドDNAを含有するナノ粒子の製造のためのものである30:1の重量比は、プラスミド、ポリマーにおける1.0×10 6細胞。 </li><li>希プラスミドDNA（1 mg / mlの、pVEGF165、Aldevron、ND、USA）を15 50mlのFalconチューブ中の酢酸ナトリウム中で120μgの/ mlの最終濃度（25 mM）をする。 </li><li>希C32-122（100 mg / ml）を第15ミリリットルFalconチューブ中の酢酸ナトリウム（25 mM）の中で3.6 mg / mlの最終濃度。 </li><li> 10秒間、直ちに高い所にシングル15ミリリットルファルコンチューブと渦に各ファルコンチューブの中身を兼ね備えています。 </li><li>管が発生するナノ粒子形成のために10分間室温で放置します。 </li><li>インキュベートしながら、トランスフェクト1.0×10 6細胞あたり7.8ミリリットル完全補充したDMEMで、組織培養フラスコ内でメディアを交換してください。 </li><li>組織培養フラスコにナノ粒子溶液を移し、均等に分散するように前後に傾けてください。 </li><li> 4時間37℃、5％CO 2インキュベーター内で組織培養フラスコを置く。 </li><li> 2時間後、nanoparを交換DMEMでメディアを含むticle。 </li><li> 37℃、5％CO 2でさらに2時間インキュベートした後、細胞を、 インビボ注射の準備ができている。 </li></ol> 4。後肢虚血手順<ol><li>すべての実験は、スタンフォード大学の動物実験委員会のガイドラインおよび承認されたAPLACプロトコルに従って行った。後肢虚血のマウスモデルは、前述のように行われて生成する。8詳細な手順については、リファレンスを参照してください。簡単な説明を以下に提供される。 </li><li>吸入および1L /分の酸素流量で1〜3％の投薬イソフルラン麻酔下でマウスを置きます。つま先のピンチ、呼吸数の減少、および嗜眠で麻酔深度を確保する。 </li><li>腹部やシェービングクリームとマウスの両方の後肢領域から毛を削除します。 </li><li>正中線に向かって大腿内側の中心に切開を加えてから、元に脂肪パッドの上に位置を切断大腿動脈を提起する。 </li><li>遠位部位（膝に近い）と近位サイト（鼠径靭帯のすぐ遠位）：2サイトで動脈を結紮。 </li><li>ライゲーションを作成するには、静脈から動脈を分離し、動脈の周り5-0絹縫合糸を通します。ライゲーションを作るために2ノットで動脈を縛る。 </li><li> 2ライゲーション点間の動脈を削除します。 </li><li> PBSで手術領域を洗浄した後、縫合する切開を閉じた。 </li><li>麻酔は削除することができます。再覚醒するまで、マウスを暖かく保つ。術後ケアのために、2〜4 mg / kgのリドカインは、切開部位に皮下再覚醒する前に注入することができる。さらなる疼痛管理は、12および24時間後に0.05〜0.1 mg / kgのブプレノルフィンの皮下送達を含むことができる。呼吸パターン、明白な痛みや苦痛、そして皮膚の色の変化を観察することにより、7日間、一日一回のマウスの健康状態を監視します。 </li><li>レーザードップラー血流イメージングにより後肢虚血​​を確認してください。</li></ol> 5。細胞注射<ol><li>トランスフェクションされた細胞とマウスの準備が整ったら、トリプシン処理し、PBSでトランスフェクトした細胞を洗浄し、遠心分離した後、カウントされます。 </li><li> PBS中ml当たり10×10 6細胞の密度で細胞を再懸濁。 </li><li>細胞懸濁液を110μLの容量で別々のエッペンドルフチュー​​ブに分離してください。これは、各マウスは、細胞の等量を受け取ることを保証する。 </li><li>麻酔下で、各マウスを置き（2.5％イソフルラン、1L /分の酸素流量）。 </li><li>アルコール綿で注射部位を清掃してください。 </li><li> 27のGツベルクリン注射器を利用して、均質な懸濁液が得られることを確認するために注射器には、上下のセルを描画します。シリンジ内に細胞懸濁液容量を100μlを策定。 </li><li>内転筋領域に半細胞懸濁液を注入した後、ふくらはぎの筋肉領域に他の半分を注入する。注入時には、少なくとも15〜30秒のための場所に注射器を残す細胞懸濁液の漏出を防ぐ。 </li><li>動物実験のための適切なコントロールには、次のとおりです。2）細胞単独; 1）非コードプラスミド（生物学的活性を持つ例えば 、プラスミド）でトランスフェクションした細胞を、3）PBS。 </li><li>注射が完了したら、麻酔からマウスを削除し、マウスの再目覚めるまで暖かい保つ。 </li></ol> 6。生物発光画像法<ol><li>生物発光イメージング（BLI）を開始するには、前述したように、マウスを麻酔。 </li><li>アルコール綿で注射部位を清掃してください。 </li><li>利用インスリン注射器、15 mg / mlでのD-ルシフェリン（ホタルルシフェラーゼの基質）の荷重を100μl。光から基板を遠ざけること。 </li><li>腹腔内注射を行うためには、彼らの前方肌がピンと張っ引っ張って自分の背中の皮膚でマウスを押したままにします。腹腔腹部に針を挿入し、基質100μlを注入。 </li><li>麻酔下でIVISルシフェラーゼイメージングチャンバー内にマウスを置きます。 </li><lI&gt; 1.0分の露光時間で画像のマウス。パラメータを設定すると、画像を取得し始める。 </li><li>画像が取得されると、ルシフェラーゼシグナルを測定するように関心領域をマークする。この場合において、細胞注射部位に虚血肢をマーク。 </li><li>信号がピークに達し、減少し始めるまで、ルシフェラーゼシグナルごとに3〜5分を測定し続けています。これは、マウスを横切っていくつかの時間点にわたって比較のために利用される値である。 </li><li>完了すると、室及び麻酔からマウスを外します。再覚醒するまで暖かいマウスを保管してください。 </li></ol> 7。レーザードップラー灌流イメージング<ol><li>レーザードップラー灌流画像化は、以前に記載のように行われる。8手順を簡単に説明する。 </li><li>マウスによる髪へのアーティファクトを防ぐために、後肢と腹部領域の両方の上に位置する領域にきれいに剃っているあるべきイメージングドップラー前に。 </li><li>ドップラ画像に調製される場合、畝前述したように、SEに麻酔されるべきである。 </li><li>直腸温度計で体温を監視しながらホットプレート上で36℃にマウスを温める。 </li><li>非反射黒色の表面にマウスを置き、ノーズ​​コーンにより麻酔維持。マウスが均等にさらされ、その手足との背面に配置する必要があります。 </li><li>約15 CMマウスの上に、マウスの鼠径部地域に向けたセンサからレーザーポインターを向けるレーザードップラーセンサを配置します。 </li><li>マウスおよびドップラーセンサ位置にあるとき、画像は、スタートボタンを押すことによってLDPIwinソフトウェアを利用して撮影することができる。 </li><li>相対潅流測定が利益率（ROI）の領域として両方の後肢（虚血性および非虚血性）を示すことによって取ることができる。非虚血性後肢の虚血性の平均灌流の比率が相対的灌流を示します。 </li></ol> 8。組織の収穫手順<ol><li>収穫マウスTISに調製された場合組織学および/または生化学的処理のために訴訟を起こす、マウスを安楽死させなければならない。ここでは、マウスを頚椎脱臼によりマウスを安楽死して、3〜5分間、5％イソフルランに曝露することによって安楽死させている。 </li><li>後肢の遠位に腹部と近位で円周方向に後肢を取り巻く覆っている皮膚を切った。皮膚は、皮膚が足への後肢上に引き戻すことができるように、背側表面に腹側から切断される。 </li><li>肌を引き戻す際に、四肢、骨盤と大腿骨の関節で切断する鈍い切開はさみを利用することによって切断することができた。 </li><li>二つの主要な組織は、分析のために採取されています。内側転筋および腓腹筋を。 </li><li>組織学のために、凍結切片に最適な切削温度（10月）の1つまたは両方の組織を埋め込む。 </li><li>生化学分析のために、1.5mlのエッペンドルフに一方または両方の組織を収集し、少なくとも2分間液体窒素の浴中に沈める。サンプルは、することができます将来の処理のために-80℃で保存した。 </li></ol>

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<li>Dave, U. P., Jenkins, N. A., Copeland, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+insertional+mutagenesis+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene therapy insertional mutagenesis insights.</a> Science. 303, 333(2004).</li>
</ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

ここでは、非ウイルス性、生分解性ナノ粒子を用いた治療因子を過剰発現する成体幹細胞をプログラムする方法を報告している。このプラットフォームは、例えば、虚血および癌などの、ここで幹細胞が自然に自宅できる疾患を治療するために特に有用である。9-10さらに、非ウイルス遺伝子送達プラットフォームは、ほとんどの組織再生および創傷に適した、治療因子の一過性過剰発現を可能にする治癒過程。トランスフェクション法は、細胞への効率的なDNAのエントリに依存し、一般的には、非分裂細胞でも同様ではない積極的に分裂細胞型でうまく動作しますが、。 PBAEポリマーのトランスフェクション効率は、細胞型への細胞型と異なる場合があり、個別に最適化されるべきであり、さらに化学構造の改変は、特定の標的細胞集団における最適なトランスフェクション効率を達成するために探求されてもよい。上記の方法でトランスフェクト11-12細胞通常、私は結果2-4日の周りに達成されるピーク遺伝子発現を有する2週間一過性の遺伝子発現およびタンパク質分泌、nである。動物実験で20％を超えるトランスフェクション効率を有するのADSCが適していると考えられる。これ...

この技術の全体的な目標は、虚血の部位で治療因子を過剰発現する非ウイルスプログラムされた幹細胞を用いた治療的血管新生を促進することである。幹細胞は、実験室で合成された生分解性ナノ粒子を用いてex vivoで最初に修飾し、次いで血管形成および組織サルベージを高めるためのその可能性を検証するために、後肢虚血のマウスモデルに移植した。 制御された血管増殖に成功した重要な組織再生の成分、ならびに卒中、四肢虚血、および心筋梗塞のような種々の虚血性疾患を治療するためのものである。いくつかの戦略は、成長因子の送達および細胞ベースの治療を含む血管の成長を促進するために開発されてきた。1動物疾患モデルにおいて観察された効力にもかかわらず、これらの方法は未だに不十分な成長因子の送達のための超生理学的用量の必要性などの制約に直面し、又はパラクリン細胞のみでリリースする。上記の制限を克服するための1つの潜在的な戦略は、幹細胞療法及び幹細胞が遺伝的に望ましい治療因子を過剰発現するようにex vivoで移植前にプログラムされることにより、遺伝子治療を組み合わせることである。このアプローチは、 等後肢虚血2、心疾患3、骨治癒4および神経損傷5を含む種々の疾患モデルで実証されている。しかし、ほとんどの遺伝子治療技術は、このような潜在的な免疫原性および挿入突然変異のような安全性の懸念に関連しているウイルスベクターに依存している。非ウイルス遺伝子送達媒介される生体材料は、これらの制限を克服するが、多くの場合、低いトランスフェクション効率に悩まされる可能性がある。効率的な非ウイルス性遺伝子送達のための新規な生体材料の発見を加速するために、最近の研究は、コンビナトリアルケミストリーおよびハイスループットスクリーニングアプローチを採用している。このようなポリ（β-アミノESとして生分解性ポリマーのライブラリTERS）（PBAE）は、従来の高分子のベクトルの対応に比べて格段に強化されたトランスフェクション効率を持つ大手ポリマーの発見につながっている、開発され、上映されている。6-7 ここで、我々は、後肢虚血のマウスモデルにおいて血管内皮増殖因子（VEGF）を過剰発現する遺伝子改変されたADSCのその後の移植に続いて、PBAEの合成およびインビトロで脂肪由来幹細胞（ADSCを）をトランスフェクトする能力の検証を記載。成果は、生物発光イメージングを用いて細胞の運命を追跡するレーザードップラー灌流画像（LDPI）を用いて、組織灌流を評価し、組織学により、血管新生および組織サルベージを決定することによって評価した。

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Invitrogen</td><td>10082</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>Invitrogen</td><td>15070</td><td></td></tr><tr><td>塩基性線維芽細胞成長因子</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>1,4-ブタンジオールジアクリレート (90%)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>411744</td><td>頭字語: C</td></tr><tr><td>5-アミノ-1-ペンタノール(97%)</td><td>アルファAesar</td><td>2508-29-4</td><td>頭字語:32</td></tr><tr><td>テトラエチレングリコルジアミン>99 %)</td><td>Molecular Biosciences</td><td>17774</td><td>頭字語: 122</td></tr><tr><td>酢酸ナトリウム</td><td>G-Biosciences</td><td>R010</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>Invitrogen</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>テトラヒオフラン無水 (>99.9 %)</td> <td>シグマ アルドリッチ</td><td>401757</td><td></td></tr><tr><td>ジエチル エーテル無水 (>99 %)</td> <td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>E138-4</td><td></td></tr><tr><td>DMSO 無水 (>99.9 %)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>ゼラチン</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9391</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferin</td><td>GoldBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature (O.C.T)</td><td>Tissue-Tek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>ラット 抗マウス CD31</td><td>BD Pharmingen</td><td>550274</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 594 抗ラット IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A11007</td><td></td></tr></tbody></table>

生分解性ポリマーナノ粒子を用いた治療的血管形成のためのプログラミング幹細胞

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

制御された血管増殖は、正常組織再生および創傷治癒、ならびに、例えば、脳卒中、心臓発作、または末梢動脈疾患などの虚血性疾患を治療するために重要である。血管新生増殖因子の直接送達は、新たな血管の成長を刺激する潜在能力を有するが、しばしば、標的化および生体内での半減期が短いの欠如などの制限に関連付けられる。遺伝子治療は、血管新生因子をコードする遺伝子を提供することにより、別のアプローチを提供するが、多くの場合、ウイルスを用いる必要があり、安全上の懸念によって制限される。ここでは、生分解性高分子ナノ粒子を用いてin situ での血管新生因子を過剰発現するようにプログラミング幹細胞によって血管成長を刺激するために最近開発された戦略を記載している。具体的には我々の戦略は、 インビボにおける虚血組織に向かって移動する能力を利用することにより、送達ビヒクルとしての幹細胞を利用した。最適化された高分子のベクターを用いて、脂肪由来幹細胞は、血管内皮増殖因子（VEGF）をコードする遺伝子、血管新生を過剰発現するように改変した。我々は、ポリマー合成、ナノ粒子形成、 インビトロで幹細胞をトランスフェクトするだけでなく、マウスの後肢虚血モデルにおける血管新生を促進するVEGFを発現する幹細胞の有効性を検証するための方法のためのプロセスを説明した。

一緒に混合すると、正に帯電したポリマー（C32-122）及び負に荷電したDNAプラスミド自己集合ナノ粒子に変換する。 C32-122とプラスミドDNAとの間の複合体形成は、電気泳動中にDNAの動員を防止する、すなわち 、ナノ粒子の形成は、電気泳動分析を通じて確認することができる。ポリマーは、標的細胞へのDNAの増強された取り込みおよびコードするタンパク質のその後の発現（ 図2）を容易にするために、トランスフェクション試薬として機能する。細胞は、蛍光活性化細胞選別（FACS）および蛍光顕微鏡法（ 図3）を用いて高効率を有するポリマーベクター設計およびトランスフェクション条件の迅速な最適化を容易にするために、緑色蛍光タンパク質（GFP）などの任意の治療遺伝子またはレポーターDNAでトランスフェクトすることができる。 ADSCをするために、20％以上の効率が適切であると考えている。 細胞運命ポストtransplantaの追跡を容易にするTiONから、細胞は、安定的に非侵襲的生物発光イメージング（BLI）...

我々は、生分解性高分子ナノ粒子を用いて、血管新生のための治療因子を過剰発現するためのプログラミング幹細胞の方法を記載している。記載された方法は、 インビトロで脂肪由来幹細胞をトランスフェクトし、マウス後肢虚血モデルにおける血管新生を促進するためにプログラムされた幹細胞の有効性を検証する、ポリマー合成が挙げられる。

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

本手順の目的は、海洋性後肢虚血モデルを用い、ポリマーナノ粒子を用いて幹細胞に治療遺伝子を過剰発現させる手法を実演することである。まず、2段階の縮合反応を通じて生分解性ポリマーを合成し、続いて治療遺伝子をコードするポリマーナノ粒子を作製する。次に、ヒト脂肪由来幹細胞をin vitroでトランスフェクションし、血管内皮増殖因子を過剰発現させる。次に、プログラムされた幹細胞を虚血状態の後肢に筋肉内注射し、治療因子の産生を促します。最終ステップとして、生物発光イメージングおよびレーザードップラーイメージングを用いて、虚血肢における細胞の生存と血流再開を経時的にモニターします。最終的に、定量的な遺伝子発現解析および組織学的検査を行い、治療因子の局所的な発現と組織再生の有効性を確認することができます。血管新生における従来の手法に対する本手法の利点は、薬剤配送の担体として幹細胞を利用することにあります。この戦略により、虚血部位に向かって移動するという幹細胞が本来持つホーミング能を利用でき、さらに微小環境のシグナルに対する動的な反応も可能となります。プラスミドDNAの配送に使用されるナノ粒子は非常に効率的かつ生分解性に優れており、細胞毒性を低減しつつ、より多くのコピー数のDNAを細胞内に導入することができます。この手法は、生分解性の非ウイルスベクターを用いて自律細胞に遺伝子を導入するため、多くの臨床的に重要な細胞ベースの治療法に適用可能です。ドラフトチャンバー内でブタンダイアルDLIを計量し、撹拌子が入ったガラス製吸入バイアルに物質を移します。次に、あらかじめ加熱した5-アミノ-1-ペンタイルを同じバイアルに加えます。直ちにバイアルを撹拌機に設置し、回転速度を600 RPMに設定します。バイアルを90°Cに設定したオーブンに移し、4時間後に撹拌速度を1000 RPMに上げ、その後速度を300 RPMに下げてさらに12〜16時間撹拌します。準備ができたら、スターバーを入れたガラスバイアルにC 32を5 g入れ、無水テトラヒドロフランを10 mL加えます。アルミ箔で包み、完全に溶解するまで高速度でボルテックスします。スターバーを入れた別のガラスバイアルに、10 mMのテトラエチレングリコールジアミンを加えます。このバイアルに40 millilitersのTHFを加え、両方のバイアルをスターラープレート上に置き、5分間撹拌してから混合させます。得られた溶液をアルミホイルで覆い、室温で24時間撹拌させます。最終生成物をC 32 1 22と定義します。次に、5本の50 mLファルコンチューブに、それぞれ30 mLの脱水ジエチルエーテルを移します。脱水ジエチルエーテルにC 32 1 22を加えると、白色の濁った溶液が形成されます。チューブをボルテックスした後、遠心分離を行います。抽出さ

programming-stem-cells-for-therapeutic-angiogenesis-using

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Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

胚性幹細胞の配信のための外科的処置は、虚血後肢への細胞由来の内皮細胞は、生物発光イメージングによる非侵襲的な追跡と、示されている。...

後肢虚血の治療のための胚性幹細胞由来血管内皮細胞

ここでは、二重播種部分的人工多能性幹細胞がマウスにグラフトするための機能的な組織工学血管移植片を生成するためのプロトコルを提示する（PiPSC）は - 脱細胞化血管足場バイオリアクターに由来内皮細胞 - 平滑筋細胞およびPiPSC由来。...

マウスモデルにおける組織工学血管の生成とグラフト

ここでは、血管形成生体内可視化するプロトコルを提案と多光子顕微鏡による 3 D 足場でリアルタイム。重要な性マウス頭蓋骨骨欠損モデルにおける血管新生遺伝子組み換え足場を調べた。コントロールの治療群よりもより新しい血管を認めた.

頭蓋骨の重要な骨欠損修復の多光子顕微鏡In Vivo遺伝子組み換え 3 D-PLGA/nHAp 足場による血管新生を可視化

この原稿は、PEI / MNPベクター及びその磁化により内皮細胞へのmiRの効率的な、非ウイルス送達を記載しています。このように、遺伝的改変に加えて、このアプローチは、磁気細胞ガイダンスやMRIの検出能が可能になります。技術は、治療用細胞製品の特性を改善するために使用することができます。...

準備と<em&gt;インビトロ</em磁化のmiR修飾内皮細胞の&gt;キャラクタリゼーション

このプロトコルを記述するように導電性高分子足場の in...

導電性足場を調節して幹細胞を提供するには

このプロトコルは、CD133 を変更する安全で効率的な手順を示しています+造血幹細胞。提示された非ウイルス性、磁気 polyplex...

成人骨髄由来造血幹細胞が細胞工学磁気ターゲッティングと結合を有効にするにマイクロ Rna の転送のためのプロトコル

高脂血症と糖尿病のウサギに末梢虚血を誘導するために用いられる外科的処置について述べる。この手術は、患者における末梢動脈疾患において経験される状態の前臨床モデルとして作用する。血管造影はまた、導入された虚血及び灌流の回復の程度を測定するための手段としても説明する。...

糖尿病性ウサギにおける後肢虚血の前臨床モデル

誘導多能性幹細胞(iPSC-EPs)に由来する内皮前駆体は、心血管疾患治療に革命を起こさせ、より忠実な心血管疾患モデルの作成を可能にする可能性を秘めています。本明細書において、三次元(3D)コラーゲン微小環境におけるiPSC-EPの封入およびこれらの細胞の血管球電位の定量分析について説明する。...

iPSC由来内皮前駆体の血管学的電位を定量化するインビトロ3Dモデルと計算パイプライン

この方法は、標準化されたマイクロ流体プラットフォームにおける40の浸透した3Dマイクロ容器としてiPSC由来内皮細胞の培養を記述する。このプラットフォームは、アナストモシスや、スケーラブルで高スループットな方法での血管新芽の安定化を含む、3Dでの勾配駆動血管新生芽芽の研究を可能にします。...

iPSC由来内皮細胞の浸透した3D血管新生発芽をインビトロで研究するための標準化およびスケーラブルなアッセイ

このアッセイは、3Dコラーゲンゲルで培養した胚様体に分化したマウス胚性幹細胞を利用して、 in...

インビトロ 血管疾患モデリングおよび薬物検査のためのマウス胚性幹細胞を用いた血管新生の三次元発芽アッセイ

この論文は、血管幹細胞の大動脈血管壁への正確な超音波ガイド下送達のためのプロトコルを提示します。この技術は、血管壁を効果的に標的とし、大動脈瘤や解剖における血管修復を促進します。...

大動脈疾患における血管修復のための精密超音波ガイド下幹細胞送達

学ぶ 生分解性ポリマーナノ粒子を用いた幹細胞プログラミングによる治療的血管形成の手法。ヒト脂肪由来幹細胞へのVEGF遺伝子導入とマウス後肢虚血モデルでの評価方法を解説します。

生分解性ポリマーナノ粒子を用いた治療的血管形成のためのプログラミング幹細胞

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