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DOI: 10.3791/51321-v
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組織操作された線維芽細胞由来の天然のマトリックスは、上皮細胞の増殖および分化を支持する間質基質を生成するための新興のツールである。ここでは、腫瘍細胞の生物学上の異なる間質細胞タイプの影響を評価するためにこの方法を適用するプロトコルが提示される。
次の手順の全体的な目標は、腫瘍細胞の浸潤を評価するための線維芽細胞からネイティブマトリックスを生成することです。これは、まず、ソルビン酸が豊富な培地でプラスチック上に線維芽細胞を成長させ、ネイティブマトリックスを生成することによって達成されます。第2ステップでは、天然マトリックスをプラスチック成長面から剥離して放出し、次にこのマトリックスに腫瘍細胞を播種し、一定期間後に空気液体界面に持ち上げます。
これらの3D培養物は、腫瘍細胞浸潤の組織学的分析のために採取されます。最終的に、腫瘍細胞の浸潤に対する天然の線維芽細胞マトリックスの影響は、免疫組織学的分析によって評価できます。したがって、3D典型培養物を生成するためのこの技術の利点は、我々は、合成または異種1型コラーゲンのような合成または異種基質の不在下で線維芽細胞自体によって産生される天然マトリックスを評価できることである繊維芽細胞培地中の6ウェルプレートにウェルあたり200, 000線維芽細胞を播種することから始め、新たに調製されたIC酸を補充する。
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