イメージング質量分析のための卵巣がんコミュニケーションのモデリング:転移性卵巣腫瘍の発生における低分子化学コミュニケーターを同定する方法

卵管からの腫瘍形成細胞は、健康な卵巣細胞を刺激して、腫瘍転移を促進する化学伝達体または小分子を生成します。これらの化学コミュニケーターを視覚化するには、まず適切なスライドガラスの上に井戸仕切りを組み立てます。プラスチック製の仕切りをウェル内に斜めに配置して、ウェルを2つの同じサイズのコンパートメントに分離します。液体アガロース中の卵管腫瘍細胞の懸濁液をウェルの1つのコンパートメントに分注します。冷却すると、アガロースは固化して3Dネットワークを形成し、腫瘍細胞の閉じ込めを可能にします。

仕切りを取り外し、健康な卵巣組織を空のコンパートメントの中央に置きます。液体アガロース混合物で覆います。アガロースを固化させ、がん細胞の近くに卵巣組織を埋め込みます。所望の期間インキュベートします。腫瘍細胞と健康な卵巣細胞の両方が小分子を産生し、アガロースネットワークを介して隣接する細胞に向かって拡散します。

井戸仕切りを取り外します。共培養を乾燥させて寒天を乾燥させて平らにし、放出された小分子をマトリックス内に捕捉します。イメージング質量分析法またはIMSを使用して、小分子の分布を視覚化します。

ITO処理されたスライドの上に8ウェルディバイダーを置き、プラスチック製のディバイダーをウェルに斜めに挿入します。以前と同じように細胞培養を調製し、100マイクロリットルの細胞懸濁液と100マイクロリットルの液化アガロースを2ミリリットルのチューブに入れます。すぐに、ディバイダーの下向きの圧力を保ちながら、150マイクロリットルの細胞アガロース混合物をディバイダーの片側にプレートします。

アガロースを約1分間冷まして固めてから、仕切りを取り外します。鉗子を使用して、卵巣外植片をウェルの空の半分の中央に配置します。卵巣の上部に150マイクロリットルの細胞アガロース混合物を追加します。スライドを摂氏37度、二酸化炭素5%で加湿インキュベーターでインキュベートします。

4日後、チャンバーディバイダーをアガロースプラグから取り外します。平らなへらで、アガロースの側面をチャンバーから切り離し、チャンバーをそっと上に引っ張ります。アガロースプラグを動かした場合は、互いに接触しないようにゆっくりと位置を変えてください。

スライドを摂氏37度のオーブンに約4時間入れ、1時間ごとに90度回転させて、サンプル全体に均一な熱分布を確保します。スライドは完全に乾燥させる必要があります。そうしないと、MALDI-TOF質量分析計の高真空環境でサンプルが爆発する可能性があります。

スライドを乾燥させ、進行状況を監視することは、高い空間分解能と高品質の質量スペクトルを達成するための最も重要なステップです。はがれや過度のしわが発生した場合は、質量分析データの収集はお勧めしません。

マトリックス噴霧器にパラメータを設定した状態で、マトリックス溶液をスライドに塗布します。リンレッドをキャリブラントとして使用するには、スライド上の明確なスポットに1マイクロリットルのリンレッドを追加します。ペプチド混合物をキャリブラントとして使用するには、パラフィルム上のマトリックスと1対1の比率で混合してイオン化を助け、スライド上に0.5〜1マイクロリットルをスポットします。キャリブラントが乾くのを待ってから、イメージング質量分析データを取得します。