November 24th, 2014
大動脈の病理は、重篤な罹患率と死亡率につながる可能性があるため、疾患の進行と潜在的な治療法の研究が必要です。ここでは、研究者が心血管疾患の調査を支援するために、マウス大動脈を分離して切除するプロトコルを紹介します。
この手順の全体的な目標は、マウス大動脈をスターリー、分離、および切除することです。これは、最初に胸腔と腹腔を露出させることによって達成されます。2番目のステップは、冷たく滅菌された生理食塩水で灌流することです。
次に、胸腔と腹腔の臓器が取り除かれ、心臓が大動脈に付着したままになります。最後のステップは、大動脈から血管周囲脂肪組織と外降組織を切除することです。最終的には、解剖顕微鏡を使用して周囲の組織がすべて除去されたことを確認し、大動脈をさまざまな実験分析に使用できます。
したがって、この手法は、動脈瘤の発生やアテローム性動脈硬化症プラークの形成など、心血管研究分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。ですから、遺伝子やタンパク質の発現など、分子生物学の変化を見ることで、それらを調べることができます。マウスを安楽死させた後、つま先をつまんで安楽死状態を確認します。
次に、腹部の被毛を70%エタノールで濡らして皮膚を滅菌します。次に、付属肢を伸ばした状態でマウスを仰向けの手術ボードに固定します。鉗子を使用して、剣状突起より少し劣った腹部の皮膚を見つけて分離することから手術を開始します。
次に、皮を持ち上げ、ハサミで切り落とします。これにより、腹膜の上部と下胸腔が露出するはずです。次に、鉗子とはさみを使用して、剣状突起を持ち上げ、肋骨下縁に沿ってそれよりわずかに劣る横方向の切開を行います。
胸腔を解剖するには、その過程で心臓や主要な血管を傷つけないように注意しながら、横隔膜から入ります。現在、頭蓋は肋骨下縁に沿って側方切開を延長します。したがって、胸郭の前部を取り外します。
これらの切開を完了するには、胸壁の前部から心臓を切除するための鈍的解剖が必要になる場合があります。次に、ガーゼを使用して、余分な水分の胸腔をきれいにし、臓器にアクセスしやすくします。次に、鉗子とハサミを使用して肺をローブごとに取り除きます。
その後、心臓と大動脈を完全に露出させ、心臓穿刺を介して血液を採取するために簡単にアクセスする必要があります。心臓を灌流するための灌流を進める前に、10ccの注射器に10ミリリットルの滅菌氷冷XPBSを満たしてください。次に、25ゲージの針を取り付けます。
針を左心室に慎重に挿入します。次に、次のステップで循環器系に過度の圧力が蓄積しないように、右心房を切開します。次に、次の2〜3分で、PBSを注射器から心臓にゆっくりと排出します。
PBS排出中は、滅菌ガーゼを使用して、切開部で心房から注がれる液体を吸収します。PERFUSE eightがすべて排出されたら、胸腔のきれいな視界を遮るガーゼで残りの液体を吸収します。消化管の内容物を露出させるには、腹壁をこっそりと切り取り、切開部を恥骨上領域まで伸ばします。
そこに一度、下肢に向かって両側に切って皮膚のフラップを作り、ピンで留めたり切除したりできます。次に進むと、いくつかの臓器、肝臓の葉、膵臓、脾臓、腸、下部食道が取り除かれます。これにより、大動脈への視界が広がります。
この領域には大動脈から腎動脈への表在枝があるため、ペレン領域を解剖する際には特に注意してください。消化管の細菌が他の組織を汚染し、片付けられた部分を1つのXPBSで洗い流し、ガーゼで余分な溶液を吸収する可能性があるため、この解剖は正確かつ慎重に行ってください。したがって、はさみと鉗子を使用して、大動脈を脊椎から分離します。
鈍器解剖が適切であり、解剖顕微鏡の使用を強くお勧めします。大動脈は、コドリーまたはクランから取り外すことができます。重要なのは、組織を洗浄し、分離する整然とした植物プロセスです。
血管周囲脂肪組織を解剖するときは、大動脈壁の損傷を避けるために、細いマイクロハサミを使用してそれを取り除きます。これにより、大動脈平滑筋細胞を培養する際の線維芽細胞汚染の可能性が最小限に抑えられます。血管周囲組織、脂肪組織、および外膜の慎重な切除は非常に重要です。
残った組織は、細胞培養に汚染を引き起こすだけでなく、分子アッセイに偏りを与える可能性もあります。この手順を使用すると、心臓に由来する無傷の大動脈が胸腔と腹腔に下降します。腎動脈が付着したままの状態で、腹部大動脈瘤の研究において診断的である形態測定の変化を定量化するために、大動脈をその場で画像化することができます。
その後、大動脈を切除し、固定し、染色してヘマット、トイン、エオイン染色などの組織学的変化を観察したり、ベラスチンバンドを見て大動脈の構造的完全性を見るためにver Hoff Van Geen染色を行うことができます。大動脈細胞は、初代細胞の単離や、生存率研究やタンパク質局在化などのin vitro研究にも使用できます。手順に続いて、タンパク質やRNAの単離などの他の手法を使用して、タンパク質の発現、酵素活性、および遺伝子の発現を調べることができます。
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この記事では、心血管疾患の研究に不可欠なマウス大動脈の分離と切除のためのプロトコルを提示します。大動脈の病理を理解することは、罹患率と死亡率への影響のため重要です。
Isolation of the murine aorta enables direct assessment of vascular pathology in preclinical models, supporting target validation and mechanistic de-risking in cardiovascular drug discovery. This technique provides quantitative morphometric and molecular readouts that improve predictive confidence in early-stage therapeutic evaluation. By facilitating reproducible tissue preparation, it strengthens translational continuity from discovery through preclinical validation.
The aorta isolation technique fits within the discovery continuum, supporting hypothesis testing in early discovery, assay readiness in screening, and quantitative analytics in preclinical evaluation.