操作された血管柄マッスルフラップ

今日まで、厚い組織の欠陥は通常、自家組織フラップまたは人工組織を適用することによって再構築されています。このプロトコルでは、自家皮弁の代わりとして機能するために、自家椎弓根を持つ血管新生組織皮弁をエンジニアリングするための新しい方法を提示します。

この手順の全体的な目標は、全層の腹壁欠損の再建に利用できる、血管新生された組織フラップを作成することです。これは、最初に生分解性ポリ乳酸ポリ乳酸-co-グリコール酸足場を調製することによって達成されます。次に、内皮細胞、筋細胞、線維芽細胞を播種し、移植片をin vitroで培養して細胞が自己組織化できるようにします。

次に、操作された組織はマウスの大腿動脈と静脈の周りに移植され、そこで宿主血管によるアナスティメーシスを受け、高度に血管新生されます。最後に、組織は椎弓根フラップとして全層腹壁欠損に移されます。最終的に、移植片の血管新生は、超音波、Tデキストラン注射、およびCD31の免疫染色によって証明され、フラップの硬さはバイオダイナミック法試験装置を使用して検査されます。

既存の方法と比較した場合の主な利点は、ドナー部位の移動性が低く、全層軟組織の構築に使用できる人工フラップの高い生存率です。この方法は、腹壁の全層欠損を持つ患者に役立ちます。手順のデモンストレーションは、形成外科医のダナ・エゴジ博士が私の研究室と協力して行い、アニナ・フライマンが彼女を支援します。

テキストプロトコルに従って足場と細胞の埋め込みを準備した後、次の手術ツールをオートクレーブします:小さな細いまっすぐなハサミ、スプリングハサミ、まっすぐな細い先端の鉗子、鋸歯状の鉗子、ハドソン鉗子、ニードルホルダー、および15番のブレードメス。425マイクロリットルのケタミンと75マイクロリットルのシロジンの混合物を微量遠心チューブに調製し、注射器に移します。次に、ブプレノルフィン1ミリリットルあたり0.3ミリグラムを滅菌生理食塩水で1〜20に希釈します。.

テキストプロトコルに従ってマウスに麻酔をかけた後、ステージに置き、摂氏37度に加熱して正常な体温を維持し、絆創膏を使用してステージに固定します。綿チップを使用して、ヨウ素を使用し、続いて70%エタノールを使用して切開部位を洗浄し、無菌作業場を確立します。鎮静レベルを確認した後、メスを使用して、膝から大腿骨血管と平行な鼠径靭帯までの皮膚を切開し、大腿動脈と静脈血管が露出するまで行います。

クリップや針を使って肌を押さえます。次に、スプリングハサミと鉗子を使用して、大腿骨房から深部の下、分岐部から脛骨房と腓骨房まで、大腿動脈と静脈血管を周囲の組織から慎重に分離します。脚への血流を維持し、その後の虚血を防ぐために、深部はそのままにしておきます。

次に、前に準備したグラフトを露出した大腿骨AVの周りに、深部の下と分岐部の上で脛骨と腹部のAVに折り畳み、8-0を使用します。その端を結合するために絹の縫合糸。大腿部AV血管からのみ発芽する毛細血管によるインプラントの血管新生を確実にするために、滅菌したラテックスの一部を移植片の下に置き、6-0シルクを使用して移植片と縫合糸に巻き付けます。次に、4-0シルク縫合糸を使用して、上にある皮膚を閉じます。

ブプレオルフィンを1日2回、2〜3日間皮下注射します。麻酔から回復するまで、その後は移植片がフラップとして移植されるまで毎日、マウスを注意深く観察してください。移植後1〜2週間後、マウスに麻酔をかけた後、動物を加熱されたステージに置き、固定します。

このビデオで前述したように切開部位を洗浄した後、はさみと鉗子を使用して皮膚の縫合糸を慎重に開き、メスで鼠径靭帯に垂直な皮膚を切開し、腹側の皮膚を通って続けます。メスを使用して、腹側腹壁を切開します。ラテックス片を慎重に取り外し、血管新生したフラップを露出させます。

次に、はさみと鉗子を使用して、周囲の組織から組織フラップを解剖します。8-0で絹の縫合糸は、大腿骨AVの遠位端を結紮して、AVからの出血を防ぎます。次に、折りたたまれた移植組織と8-0の遠位にある膝でAVを焼灼します。縫合。移植片に包まれた大腿骨AVを腹側腹壁に向かって静かに移し、動脈の損傷を避けて、全層欠損をどの距離で行うべきかを決定します。

スプリングハサミで腹直筋を切開し、その上にある皮膚で筋肉の約1センチ×0.8センチの部分を取り除きます。8-0 を使用して、血管新生移植片に軸方向フラップとして包まれた大腿骨房を腹側腹壁の全層欠損に移します。ヘルニアを予防するためのシルク縫合糸。フラップを周囲の筋肉組織に縫合します。

次に、4-0シルクで脚の皮膚を縫合します。腹側の皮膚を露出させたままにして、完全な腹壁の欠損の影響を模倣します。ヨウ素化ガーゼと滅菌包帯で、露出領域の汚染を防ぐために皮膚の傷を覆います。

このビデオで前述したように、ブプレノルフィンを投与します。.麻酔から回復するまで動物を注意深く監視し、その後は毎日、テキストプロトコルで概説されている研究のためにフラップが回復するまで観察してください。移植後1週間および2週間で、移植片領域の肉眼的観察により、陽性のCD31免疫染色によって決定された生存可能で高度に血管新生された組織移植片が明らかになりました。

組織移植片も、FITC-デキストラン尾静脈注射と超音波測定で見られるように、高度に灌流されていました。このグラフは、移植後1週間ですでに多くの血管が観察されており、AV血管の近くでさらに1週間後にその数が大幅に増加したことを示しています。ここで見られるように、移植片移植後の大腿骨後の開存性と完全性は、カラードップラーモードでの超音波画像によって確認されました。

青と赤は移植片の血流を表しています。さらに、超音波グラフィック検査では、移植片領域内の灌流が明らかになり、移植後は1週間と比較してわずかに高かった。移載後1週間のフラップの全眼検査では、フラップが周囲にしっかりと付着していることが明らかになりました。

血管新生前の細胞包埋フラップを比較すると、対照の無細胞非血管新生移植片は、剛性や強度などの優れた機械的特性を示し、裂開やヘルニアも少なくなりました。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば約30分で完了します。その開発後、この技術は、形成外科医が全層腹壁欠損やその他の複雑で重大な軟部組織欠損に苦しむ患者を治療する道を開きます。