植物の鉄含有量を測定するための比色定量法

医学的に言えば、生物学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。例えば、生物学のコアサンプル中の鉄をいかに簡単に定量できるかなどです。この技術の主なベンチャーは、製造が容易で、非常に正確な比色技術であるということです。

この手法を好む一方で、鉄分汚染は避けるべきです。この方法を視覚的に示していると、さまざまな手順を理解するのに役立ちます。この手順を開始するには、5センチ×5センチのポットに標準のポットメディウムを入れて準備します。

各ポットにタバコの種を1つずつ植えます。植物を摂氏23度の長い日中の条件下で、一定の温度にある成長室に移します。鉢から水がなくなるまで水道水で灌漑し、約50日間植物を育てます。

この時間の後、実験に適した濃度で灌漑中の鉄処理を開始します。この溶液で植物を2日ごとに6〜8日間灌漑します。次に、金属製の器具を使わないように注意しながら、手で茎から葉を取り除きます。

二重蒸留水で満たされたスプレーボトルを使用して、各葉をきれいにします。ペーパータオルで葉を乾かし、紙袋に移します。葉っぱを詰めた袋をオーブンに入れ、摂氏80度の一定温度に2〜3日間入れます。

乳鉢と乳棒を4%塩酸溶液で2回洗浄します。そして、濾紙を使って乾かします。乳鉢と乳棒を使って、乾燥した葉を粉末に粉砕します。

次に、粉末を滅菌済みの15ミリリットルのプラスチックチューブに移します。まず、蓋のない新しい密封された20ミリリットルのシンチレーションバイアルの重量を量ります。重量を書き留めるか、はかりを風袋引きします。

次に、砕いた葉を追加します。バイアル内のサンプルを計量し、重量をメモします。ロックウールを使用してバイアルを閉じます。

サンプルを追加せずに、コントロールとして使用するために、追加の3つのバイアルを計量し、各重量をメモします。次に、サンプルとコントロールバイアルを炉に移します。テキストプロトコルで説明されているように葉を燃やします。

この後、サンプルを摂氏約100度に冷まします。厚手の手袋とピンセットを使用して、サンプルを炉から取り出し、バイアルを外側に保持します。バイアルを平らな面に置きます。

ロックウールを取り外し、バイアルを元の蓋で閉じます。次に、3つのコントロールバイアルを秤量し、それらの平均重量増加を計算します。重量増加が灰灰重量の1%以上の場合は、この値を測定誤差の推定値として使用します。

15ミリリットルのプラスチックチューブの重さを量ります。重量を記録するか、はかりを風袋引きします。次に、灰をチューブに移します。

この値(灰の重量)を記録します。次に、1モルの塩酸溶液を5ミリリットル灰に加えます。22マイクロメートルのフィルターで灰をろ過します。

次に、同じフィルターを通して1モルの塩酸溶液をさらに5ミリリットル加えると、最終的なサンプル量は10ミリリットルになります。この後、原子分光法による測定のために各サンプルから4ミリリットルを取り出します。そして、テキストプロトコルに概説されているように、灰のグラムあたりの鉄濃度を決定します。

まず、100ミリリットルの二重蒸留水に4グラムのフェロシアン化カリウムを加えて、プルシアンブルー溶液を調製します。渦を混ぜ合わせ、使用する準備ができるまで摂氏4度で保管します。使用する準備ができたら、50ミリリットルのプルシアンブルー溶液と50ミリリットルの1モル塩酸を混合してブランク溶液として機能します。

次に、ピペットを使用して、以前に取得したサンプル0.5ミリリットルと0.5ミリリットルのプルシアンブルー溶液を混合します。この混合物を少なくとも1分間、ただし5分未満で休ませます。この混合物をキュベットに移し、分光光度計を使用して715ナノメートルの光学密度を測定します。

次に、灰分1グラムあたりの光学密度を決定し、テキストプロトコルで概説されているように、鉄濃度間の線形回帰をプロットします。21のタバコの葉のサンプルからの代表的な結果は、灌漑用水の鉄濃度が葉の鉄含有量に大きく影響したことを示しています。次に、21の代表的なサンプルすべてのスペクトルをプルシアンブルー法でテストします。

ここに見られるように、715ナノメートルでの吸光度は、鉄2と鉄3の濃度が異なる溶液を測定する際の最適な波長です。原子分光法で得られた鉄濃度値とプルシアンブルー法で得られた吸光度値をプロットした線形回帰曲線により、同じ植物タイプの新しいサンプルを分析できます。HCLでの作業は非常に危険であることを忘れないでください。

また、この手順を実行するときは、目の保護などの予防策を常に講じる必要があります。線形回帰では、結果が現実的な範囲内にあることを確認することが重要です。開発後、この技術は、生物学研究者が食料生産やバイオレメディエーションのための追加の植物を探索するのに役立ちます。