組織工学用植物組織の Decellularization の 2 つの方法

これらの方法は、高度な超構造とスケーラブルな製造を備えた優れた流体移動能力を備えた足場の開発など、生体材料分野の重要な問題に対処するのに役立ちます。これらの技術の主な利点は、特殊な機器を必要とせずに、ほとんどの植物に茎組織に適用できることです。まず、F.hispidaの葉の新鮮または冷凍のサンプルを収集します。

残りの新鮮なサンプルは、将来の使用のために摂氏マイナス20度で保管してください。葉を摂氏20〜25度の脱イオン水に浮かび上がらせます。きれいな生検パンチを使用して、葉を直径8ミリメートルの円盤に切ります。

次に、葉のサンプルを洗浄するために、脱イオン水に浸したシェイクプレート上で低速で5〜10分間インキュベートします。次に、脱イオン水にSDSを容量で10%調製します。SDS溶液を調製した後、葉のサンプルをプラスチック皿に置きます。

次に、SDS溶液を追加してサンプルを完全に覆います。SDSエマードリーフサンプルを蓋をして、蒸発を防ぐためにシェイクプレートに置きます。次に、葉のサンプルを室温で5日間インキュベートします。

5日間のインキュベーション後、SDS溶液を脱イオン水と交換します。脱イオン水に浸したサンプルをシェイクプレート上で10〜15分間インキュベートします。次に、5ミリリットルの非イオン性界面活性剤と50ミリリットルの漂白剤を混合します。

この混合物を445ミリリットルの脱イオン水に加えます。次に、新たに調製した非イオン性界面活性剤漂白剤溶液にサンプルを入れます。サンプルがクリアされるまで、24時間ごとに非イオン性界面活性剤漂白剤溶液を交換し続けます。

次に、透明化したサンプルを脱イオン水にエマージュし、シェイクプレートに2分間置きます。界面活性剤を含まない脱細胞化のためには、3体積%の重炭酸ナトリウム溶液中に5体積の漂白剤を調製します。次に、ヒュームフード内のホットプレートで溶液を摂氏60〜70度に温めます。

溶液が目的の温度に達したらすぐに、葉のサンプルを浸します。次に、サンプルの損傷を防ぐために攪拌板の速度を下げ、目に見える形でクリアされたサンプルを探して、バスから慎重に移します。最後に、サンプルを脱イオン水で1〜2分間インキュベートします。

すべてのサンプルは本質的に異なるため、サンプルが損傷を受けていないことを確認するために、約15分ごとに脱細胞化の進行状況を確認することをお勧めします。MTM、SAF、およびUTSパラメータは、P.aquatica種とF.hispida種の両方のユニークな脱細胞化足場特性を調査するために最初に研究されます。実際、3つのパラメータはすべて、界面活性剤ベースの脱細胞化法と界面活性剤を含まない脱細胞化法の両方を使用して、同様の機械的特性を示します。

しかし、F.hispidaのUTS機械的特性は、脱細胞化のために漂白剤ではなくSDSを使用した方が有意に高い平均値を示しています。また、研究対象となった植物種のゲノムDNA含量は、非脱細胞化サンプルと比較した場合、脱細胞化時に大幅に減少します。次に、ヒトの真皮甲状腺芽細胞の代謝活性も、脱細胞化されたP.aquaticaまたはGarciniaの足場の存在下で測定されます。

興味深いことに、洗剤を含まないベースの足場は、細胞代謝活性に対する影響の減少を誘発したが、トリス塩酸緩衝液による洗浄、続いてSDSクリア後に無血清培地による洗浄は、脱イオン水のみで洗浄した場合と比較すると、細胞代謝活性に対する影響を減少させる。最後に、F.hispidaの葉構造の表面に焼成で染色した間葉系幹細胞の増殖を示します。これらのテクニックを習得すると、適切に実行すれば、約7日から最短15分で完了することができます。

これらの手順を実行するときは、サンプルがバッチごとに異なる可能性があり、クリア時間が異なる可能性があるため、サンプルが脱細胞化するときにサンプルを監視することを忘れないでください。この手順に続いて、減量化や機械的試験などの他の方法を適用して、サンプルがどの程度クリアされているか、サンプルが機械的に類似している他の組織は何かなどの追加の質問に答えることができます。その開発後、この技術は、組織工学の分野の研究者が灌流可能な足場を製造する道を開くのに役立ちました。

このビデオを見た後、足場として使用するために植物組織を脱細胞化する方法についてよく理解しているはずです。洗剤や漂白剤の煙を扱う作業は危険な場合があり、これらの手順を実行する際には、適切な保護具の使用やドラフトの使用などの予防措置を常に講じる必要があることを忘れないでください。