Name: マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法における炭水化物イオン信号を強化する効率的なサンプル調製法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 学ぶMALDI質量分析法における炭水化物イオン信号強化のための効率的なサンプル調製法。乾燥過程で結晶構造を再形成し、シアリルルイスAやマルトヘプタオースなどの糖質サンプルの信号強度を向上させる実験的手順を解説します。

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著者の謝辞があります。

1. サンプル プレートの前処理
<ol><li>
サンプル板のクリーニング
	<ol>
<li>サンプル プレートの洗浄時の汚染を避けるためにニトリル手袋を着用します。</li>
		<li>手洗い洗剤 (1.0 mg/mL) の 100.0 ml サンプル プレート。</li>
		<li>手洗い蒸留脱イオン水 (DDW) でサンプル プレート。</li>
		<li>30.0 ml の MeOH のサンプル プレートの表面を洗い流してください。</li>
		<li>サンプル プレートは完全に水に浸漬されるまで 600 mL ビーカー、DDW でいっぱいサンプル プレートを置きます。</li>
		<li>超音波でビーカーを置いて (表の資料を参照してください) お風呂し、15 分 (200 W、40 kHz) のサンプル プレートを超音波照射します。</li>
		<li>サンプル プレートを取り出し、加圧窒素を使用して水滴を吹き飛ばします。</li>
		<li>メタノール メタノールが他のスポットに広がるかどうかを確認するサンプル プレートを 0.2 μ を入金します。 注:メタノールは、他のスポットと合併、繰り返します手順 1.1.3-1.1.5;ない場合は、次の手順に進みます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
乾燥室内温度の調節
	<ol>
<li>11,12,13を前述のように、水滴を乾燥して安定した条件の下で乾燥室を使用します。特に、Ou、Y. M の手順 2.1 2.5 で説明する詳細な手順を使用します。ら201612。簡潔に。<ol>
<li>乾燥室を低湿度環境を維持するために一定の流量で常温窒素パージします。</li>
			<li>サンプル プレート温度を一定に保つ正 (25 ° C) または高速乾燥条件 (50 ° C) で乾燥室の温度制御の銅ブロックによって規制されています。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
行列と試料溶液の調製
	<ol>
<li>
溶液の調製
		<ol>
<li>50% アセトニ トリル (ACN) に DHB の溶解: 50% DDW 0.1 M の溶液を調製します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>
炭水化物検体の調製
		<ol>
<li>10-4 M 溶液を調製する DDW ではSLe を溶解します。</li>
			<li>10-4 M 溶液を調製する DDW で MH を溶解します。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. サンプル ・析出・再結晶
注:小さくて正規量試料の分析に最適化された手順は以下のとおりです。ソリューションを堆積させる前に所望の温度に試料皿温度を安定化していることを確認します。サンプルは結晶中に他のサンプルのスポットをカバーする広いエリアに広がる、新しいサンプルを準備または 1.1 の手順を繰り返します。
<ol><li>
サンプルの少量 (0.1 μ L) の分析のため 注:次の手順は、サンプルおよび時間消費を最小化するため開発されています。限られた量と定量分析のための迅速な IMS 実際試料の定量分析に適しています。<ol>
<li>DHB ソリューションと 0.25 の sleA μ L または微量遠心チューブに MH ソリューションの 0.25 μ L をプレミックスします。</li>
		<li>渦 3 渦のミキサーを使用して混合液 s。</li>
		<li>2 ミニ遠心分離機で混合液をスピン s (2000 x g)。</li>
		<li>ピペットを使用して予混合液の 0.1 μ L を引き出すし、すぐにサンプル プレートに入金します。 注:10 人以上でピペットの先端で予混合ソリューションをしないで保持時に少量の試料を入金、s。</li>
		<li>サンプルを乾燥するを待ちます。典型的な乾燥時間は表 1のとおりです。</li>
		<li>乾燥サンプル スポットを右にメタノールの 0.2 μ L を入金するのにピペットを使用します。サンプルを得るが濡れているし、すぐに乾きます。 注:3 堆積工程が終了したことを確認 s MeOH の大きな蒸発損失を避けるために。</li>
		<li>顕微鏡を使用してサンプルを確認します。結晶の形態は期待どおりに (例えば望ましい結果の図 1を参照) は、新しいサンプルを準備する 2.1.1-2.1.6 が手順繰り返します。</li>
		<li>ニトリル手袋を着用し、乾燥室からサンプル プレートを慎重に取り出します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
サンプルの正規の金額 (1 μ L) の分析のため 注:次の手順は、通常利用した MALDI サンプル量と炭水化物サンプルの均質性を最大化するために開発されています。プロセスは、ルーチンおよび定量分析に適しています。再結晶化プロセスは、サンプルおよびより大きい区域に均等にマトリックスに再分配します。<ol>
<li>DHB ソリューションと 2.5 μA SLe または微量遠心チューブに MH のソリューションの 2.5 μ L をプレミックスします。</li>
		<li>渦 5 渦のミキサーと予混合ソリューション s。</li>
		<li>2 ミニ遠心分離機で混合液をスピン s (2000 x g)。</li>
		<li>ピペットを使用して予混合溶液 1.0 μ L を引き出すし、すぐにサンプル プレートに入金します。 注: しない残りの使用サンプルを入金後に再度ソリューションを予混合します。</li>
		<li>サンプルを乾燥するを待ちます。典型的な乾燥時間は表 1のとおりです。</li>
		<li>乾燥サンプル スポットを右にメタノールの 1.5 μ L を入金するのにピペットを使用します。サンプルを得るが濡れているし、すぐに乾きます。 注:5 内高いサンプル プレート温度 (50 ° C) の場合、再結晶のステップを行う必要があります s ピペット チップでメタノールの蒸発を最小限に抑える。</li>
		<li>顕微鏡を使用してサンプルを確認します。結晶の形態は期待どおりに (例えば望ましい結果の図 1を参照) は、新しいサンプルを準備する 2.2.1-2.2.6 が手順繰り返します。</li>
		<li>ニトリル手袋を着用し、乾燥室からサンプル プレートを慎重に取り出します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 質量分析データ集録および解析
注:商業飛行時間質量分析計 (材料表) MALDI イオン源を装備を使用して解析が実行されます。特定のコントロール ソフトウェア (材料表) 事前に最適化抽出遅延とレーザー エネルギーと楽器が運営しています。スペクトル m/z 質量範囲で線形モードで記録されます = 0-1500。潜在的なサンプル プレートは ± 25 keV とあらゆるスペクトル平均 10 レーザー ショット。ユーザーは、楽器最適化および互換性のあるソフトウェアを使用してのサンプル分析を実施する必要があり、楽器の製造元の指示に従ってください。
<ol><li>計測器制御ソフトウェアを開く (材料の表を参照してください)。</li>
	<li>サンプル プレートを質量分析計に挿入します。</li>
	<li>ソフトウェアで事前に最適化されたデータ取得方法を選択します。</li>
	<li>IMS のイメージング ソフトウェアを使用しての全体のサンプル領域を登録 (材料の表を参照してください)。 注:IMS をやっていない場合、この手順をスキップします。</li>
	<li>コントロール ソフトのバッチ モードでデータ集録を開始します。</li>
	<li>データ集録が完了した後に、イメージング ソフトウェアを使用してイオンのイメージをプロットします。</li>
	<li>解析ソフトウェアを使用して質量スペクトルの解析 (材料の表を参照してください) イオン イメージなしのデータが記録される場合。</li>
</ol>

<ol><li>Holme, D. J., Peck, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHolme%2C+DJ+%22Analytical+Biochemistry%22">Analytical Biochemistry</a>. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).</li>
<li>Costello, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time%2C+life+...+and+mass+spectrometry+-+New+techniques+to+address+biological+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions.</a> Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).</li>
<li>Caroff, M., Karibian, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14670707">Structure of bacterial lipopolysaccharides.</a> Carbohydrate Research. 338 (23), 2431-2447 (2003).</li>
<li>Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+time-of-flight+mass+spectrometry+in+clinical+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry.</a> Clinica Chimica Acta. 337 (1), 11-21 (2003).</li>
<li>Harvey, D. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10639030">Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates.</a> Mass Spectrometry Reviews. 18 (6), 349-450 (1999).</li>
<li>Ciucanu, I., Kerek, F. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0008621584852428">A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates.</a> Carbohydrate Research. 131 (2), 209-217 (1984).</li>
<li>Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivatization+of+carbohydrates+for+chromatographic%2C+electrophoretic+and+mass+spectrometric+structure+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis.</a> Journal of Chromatography B. 793 (1), 15-36 (2003).</li>
<li>Nishikaze, T., Amano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+thin+layer+method+for+enhanced+ion+yield+of+oligosaccharides+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).</li>
<li>Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+matrix+crystal+structure+on+ion+abundance+of+carbohydrates+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+Fourier+transform+ion+cyclotron+resonance+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).</li>
<li>Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+fast-evaporation+sample+preparation+method+for+improving+quantification+of+angiotensin+II+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9 (12), 1164-1171 (1995).</li>
<li>Lai, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Spatial+Heterogeneity+of+MALDI+Samples+with+Marangoni+Flows+During+Sample+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).</li>
<li>Ou, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Homogeneous+MALDI+Samples+for+Quantitative+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54409(2016).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+carbohydrate+ion+yield+by+controlling+crystalline+structures+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry.</a> Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).</li>
<li>Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0169433296005302">Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes.</a> Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).</li>
<li>Sadeghi, M., Vertes, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169433297006363">Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization.</a> Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).</li>
</ol>

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試料の不均質は MALDI さん DD の重要な問題は最も一般的に使用されるサンプルの準備方法、得られた結晶は非常に異種。そのようなサンプルは、劣悪なショット-ショットとサンプル-サンプル信号の再現性を示します。したがって、データ集録時にサンプル エリアの「甘いスポット」の検索は、MALDI 実験の一般的な手順です。このような異種のサンプル、ルーチンな分析の定量化のため適していません。
現在の研究では、MALDI サンプル形態は、再結晶によって最適化されます。炭水化物信号強度と再結晶によりデータの安定性の改善は、炭水化物とマトリックス間の改善された定款に起因します。ほとんどの炭水化物とマトリックスの親水性の特性のため、効率的にメタノールはできます MALDI 結晶と炭水化物に崩壊します。観測は、蒸着とメタノールの速い蒸発が小さなフレークのような結晶構造に大きな針状 DHB 結晶を改革を示しています。このプロセスはまたサンプル分離を最小化し、表面積を高めます。IMS データによると改革の結晶は炭水化物のイオン化のためのより良い微小環境を提供します。特に、乾燥室の利用は、精密に制御され...

炭水化物分析重要かつ困難な課題であります。炭水化物及びその誘導体を果たす重要な役割生物1,2,3の生活します。これらの分子は複雑な構造があるし、分解する傾向があります。それらの多くは、明確に分離と検出の難しさによる特徴付けられることはできません。マトリックス支援レーザー脱離イオン化 (MALDI) 質量分析 (MS) は、その感度とわかりやすい結果4のための生体分子の広い範囲の分析に適用されている続けて MALDI MS による糖の分析このような分子5の低イオン化効率のため主要な挑戦になります。化学誘導体化は炭水化物6、7のイオン化効率を向上させる一般的な方法がそのようなプロシージャは時間と消費するサンプルです。また、炭水化物の誘導体のイオン化効率はまだ蛋白質のより低いです。したがって、複雑な手続きなし MALDI MS で炭水化物の信号を改善する方法の開発が必要です。
MALDI MS の定量分析への応用は、もう一つの挑戦的な件名です。MALDI MS の主要な問題は、その感度とデータの再現性がサンプル準備のプロトコルおよび実験的パラメーターに批判的に依存していることです。多くの場合、MALDI 質量分析法による定量分析は異種サンプル形態と試料配布のため信頼できません。有名な例は、2, 5-ジヒドロキシ安息香酸 (DHB) MALDI マトリックスを使用したサンプルです。DHB を周囲の環境の下でゆっくりと結晶化させたとき、試料マトリックス結晶混入の程度は予測、結果サンプルは不規則な形態を示すため。そのようなサンプルは通常、大きな針形と細かい結晶で構成されます。DHB は、揮発性溶剤や加熱サンプル プレートを使用して準備ができたら、高速乾燥処理はより均一な微細な結晶とより量的な結果8,9,10の結果します。この手法は、MALDI のサンプルの「結晶」と呼ばれます。改善、良い混入検体の微細なマトリックス結晶高速結晶化プロセス中に起因します。我々 はまた、サンプル調製環境の調整減少炭水化物信号および改善された定量的な結果11,12の不均一性であることを実証しました。これらの作品のサンプル形態が炭水化物の信号の品質を決定する重要な要因であることが示唆します。毎日の分析の一般的な戦略の開発、改良された炭水化物感度を提供する効率的なサンプル改革メソッドが必要です。
最近レポート13MALDI MS のサンプルの形態と炭水化物感度の相関関係を体系的に検討する.いくつかの重要な炭水化物を使った結果、最高の信号強調が再結晶によって満たされるマトリックス ショー乾燥 MALDI のサンプル。従来乾燥されたしぶき (DD) 法による試料の形態はメタノール (メタノール) と高速再結晶によって改良されます。ここで詳細なサンプル準備のプロトコルを示します。プロトコルは、サンプル プレートの前処理、サンプル成膜および再結晶、質量分析など、3 つの主な手順で構成されています。利用の炭水化物には、シアリル ルイス (SLeA) と maltoheptaose (MH) が含まれます。DHB は、モデル行列として使用されます。炭水化物信号強度と空間分布を再結晶した後著しく改善することを示した。このようなメソッドは、他の人気のあるマトリックス、2,4,6 trihydroxyacetophenone (タップ) とα- シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸を含む試料に適用できます。このメソッドは、炭水化物分析研究室のルーチンに簡単に統合することができます一般的なアプローチとして機能します。

<table><tbody><tr><td>試薬</強力></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>界面活性剤</td>粉末 <td>アルコノックス</td><td>242985</td><td></td></tr><tr><td>メタノール</td><td>メルク</td><td>106009</td><td></td></tr><tr><td>アセトニトリル</td><td>メルク</td><td>100003</td><td></td></tr><tr><td>2,5-ジヒドロキシ安息香酸 (DHB)</td> <td>アルファ エーザー</td><td>A11459</td><td></td></tr><tr><td>シアリルルイス A (SLeA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1782</td> Maltoheptaose <td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7753</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ</td><td>メトラー・トレド</td><td>17005091</td><td></td></tr><tr><td>微量遠心チューブ</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q water purification system</td><td>Millipore</td><td>ZMQS6VFT1</td><td></td></tr><tr><td>パウダーフリーのニトリル手袋</td><td>Microflex</td><td>SU-690</td><td></td></tr><tr><td>600 mLビーカー</td><td>デュラン</td><td>2110648</td><td></td></tr><tr><td>超音波洗浄機</td><td>デルタ</td><td>DC300H</td><td></td></tr><tr><td>湿度計</td><td>Wisewind</td><td>5330</td><td></td></tr><tr><td>窒素ガス流量計</td><td>ドワイヤー</td><td>RMA-6-SSV</td><td></td></tr><tr><td>K型熱電対</td><td>Digitron</td><td>311-1670</td><td></td></tr><tr><td>ボルテックスミキサー</td><td>Scientific Industries</td><td>&nbsp;SI-0236</td><td></td></tr><tr><td>小型遠心分離機</td><td>Select BioProducts</td><td>Force Mini&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ピペット</td><td>レイニン</td><td>ピペットライト XLS</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZX16</td><td></td></tr><tr><td>温度制御可能な乾燥チャンバー</td><td>このラボ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウルトラフレックス II TOF/TOF 質量分析計</td><td>ブルカー ダルトニクス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MTP 384 ターゲットプレート ポリッシュスチール BC</td><td>ブルカーダルトニクス</td><td>8280781</td><td></td></tr><tr><td>Flexcontrol バージョン 3.4</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>Control ソフトウェア</td></tr><tr><td>Fleximaging バージョン 2.1</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>Imaging ソフトウェア</td></tr><tr><td>Flexanalysis バージョン 3.4</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>Analysis ソフトウェア</td></tr></tbody></table>

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法における炭水化物イオン信号を強化する効率的なサンプル調製法

An Efficient Sample Preparation Method to Enhance Carbohydrate Ion Signals in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry

試料は、質量分析法 (MS) における炭水化物の重要なプロセスです。マトリックス支援レーザー脱離イオン化 (MALDI) MS は炭水化物分析に最適な方法が、糖質の貧しいイオン信号とデータの再現性は深刻な問題であり続けます。炭水化物の定量分析、優れたデータ品質を提供する効果的な分析プロトコルが必要です。このビデオは、信号強度を改善し、炭水化物 MALDI MS のデータ変動を最小限に抑えるためのサンプル準備のプロトコルを示します。乾燥とサンプル滴の結晶化の後結晶形態は質量分析の前にメタノールによって改良されます。MALDI イメージング質量分析法 (IMS) と炭水化物信号の強化を調べた実験を行い結晶改革が結晶構造を調整し、炭水化物の検体を再配布します。従来の MALDI MS、メタノール ショーより信号強度、イオン イメージ分布データの安定性と改革の炭水化物結晶の形態で乾燥されたしぶき製法との比較ここに示したプロトコルがサンプル組成の変化を伴わないので彼らは一般的に様々 な炭水化物およびマトリックスに適用されます。

再結晶法は、図 1に示すが、SLeAの代表的な SEM 画像混合 DHB DD を使用して準備します。典型的な DHB 形態 DD 法により作製した縁でサンプル スポットの中心部に微細な結晶の大きな針状結晶です。このような針状結晶の典型的な長さは、〜 100 μ m です。メタノールによって再結晶後、サンプルに均等に細かいフレーク状の結晶で覆われて大きなエリアがあります。「フレーク」結晶の長さがおよそ 20-50 μ m. 再結晶サンプル提供従来の DD サンプルで作り出されるそれらより大きい区域の有効な表面。
IMS が示唆されたフレーク状の結晶は、通常より高い炭水化物信号強度およびより均一な分布になります。従来の DD サンプル サンプル スポットの周辺ではほとんど炭水化物イオン信号が分散されます。図 2は、...

サンプル準備プロセス中に改革の結晶構造により MALDI 質量分析法における炭水化物イオン信号を強化するためのプロトコルが示されています。

Sample preparation is a critical process in mass spectrometry (MS) analysis of carbohydrates. Although matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) ...

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析の従来の方法を改善するために、乾燥プロセス中に単純な形態を改質することにより、簡単なサンプル調製手順を開発しました。この手法の利点は、この最適化された方法で調製した炭水化物サンプルのシグナル強度を効果的に増強できることです。一般的に、この方法に不慣れな個人は、メタノール減圧ステップが非常に重要であり、一度に行う必要があるため、苦労するでしょう。ためらうと、データの品質が低下します。まず、ニトリル手袋を着用した状態で、100ミリリットルの洗剤溶液を使用してサンプルプレートを手洗いします。蒸留脱イオン水(DD)を使用してプレートを手洗いします。次に、30ミリリットルのメタノールで、その表面をすすぎます。サンプルプレートを600ミリリットルのビーカーに挿入し、プレートが完全に浸るまでDD水で満たします。次に、ビーカーを超音波浴に入れ、プレートを15分間超音波処理します。ビーカーからサンプルプレートを取り出し、加圧窒素を使用して水滴を吹き飛ばします。次に、サンプルプレートに0.2マイクロリットルのメタノールを堆積させて、他のスポットに広がるかどうかを確認します。その場合は、示したように、洗浄、超音波処理、窒素処理を繰り返します。テキストプロトコルに従って乾燥室を準備した後、0.25マイクロリットルの2,5-ジヒドロキシ安息香酸溶液と0.25マイクロリットルのシアリルルイスA、またはマルトヘプタオース溶液をマイクロ遠心チューブにプレミックスします。次に、チューブを3秒間ボルテックスします。ミニ遠心分離機で混合溶液をGの2000倍で2秒間スピンダウンします。次に、すぐに0.1マイクロリットルの予備混合溶液をサンプルプレートにピペットで移します。サンプルが乾燥したら、蒸発を避けるために迅速に作業しながら、0.2マイクロリットルのメタノールをサンプルスポットに直接ピペットで移します。サンプルは再溶解し、すぐに乾燥します。メタノール蒸着ステップは、データの品質と再現性を決定する最も難しいステップです。最高のパフォーマンスを確保するために、メタノールの大幅な蒸発損失を避けるために、ユーザーは3〜5秒で堆積を完了することをお勧めします。ニトリル手袋を着用し、サンプルプレートを乾燥チャンバーから慎重に取り外します。次に、顕微鏡でサンプルを調べます。結晶形態が予想どおりでない場合は、サンプルを混合してサンプルプレートにスポッティングすることを繰り返します。再結晶後にサンプル結晶が最適な形態を持つように、常に顕微鏡を使用してそれらを検査します。結晶形態の品質を肉眼で正しく判断することは困難です。1マイクロリットルのサンプルを分析するには、2.5マイクロリットルの2、5-ジヒドロキシ安息香酸溶液と2.5マイクロリットルのシアリルルイスAまたはマルトヘプタオース溶液をマイクロ遠心チューブにプレミックスします。予め混合した溶液を5秒間ボルテックスします。混合溶液をGの2000倍で2秒間スピンダウンし、すぐに1マイクロリットルの予備混合溶液をサンプルプレートにピペットで移します。サンプルが乾いたら、1.5マイクロリットルのメタノールを乾燥したサンプルスポットに直接ピペットで移します。サンプルは再溶解し、すぐに乾燥します。サンプルを乾燥チャンバーから慎重に取り出します。顕微鏡でサンプルを検査します。結晶形態が予想どおりでない場合は、示したように溶液調製を繰り返します。質量分析を行うには、質量分析計制御ソフトウェアを開き、サンプルプレートを機械に挿入します。ソフトウェアで事前に最適化されたデータ取得方法を選択し、イメージングソフトウェアを使用して、イメージング質量分析用のサンプル領域全体を登録します。制御ソフトウェアのバッチモードでデータ取得を開始します。データ取得が完了したら、イメージングソフトウェアを使用してイオン画像をプロットし、テキストプロトコルに従ってデータを解析します。ここには、乾燥液滴および再結晶法を用いて調製したSialyl-Lewis Aを2,5-ジヒドロキシ安息香酸と混合した代表的なSEM画像を示します。典型的な2,5-ジヒドロキシ安息香酸の形態は、縁に大きな針状の結晶があり、サンプルスポットの中心に微細な結晶構造があります。メタノールによる再結晶後、サンプルは細かいフレーク状の結晶で均一に覆われた広い領域を有する。この図は、メタノール再結晶の有無にかかわらず、Sialyl-Lewis Aおよびマルトヘプタオースのイメージング質量分析結果を示しています。再結晶後、Sialyl-Lewis Aおよびマルトヘパオース信号の分布は、サンプルスポットの明視野画像とよく一致します。再結晶した炭水化物サンプルのシグナル強度も、従来の乾燥液滴サンプルと比較して向上しています。このグラフは、再結晶サンプルのナトリウム化またはポジティブイオンモードと脱プロトンまたはマイナスイオンモードの炭水化物のシグナル強度を、乾燥液滴サンプルのシグナル強度と比較したものです。平均して、Sialyl-Lewis Aおよびマルトヘプタオースサンプルの再結晶は、ナトリウム化シグナルを3.9倍および3.3倍に増加させました。脱プロトン化されたSialyl-Lewis Aイオンシグナルは、再結晶後に4.7倍に増強されました。マスターすると、適切に実行すれば、この手法を使用して10分でサンプルを調製できます。この手順を試行する際は、メタノール液滴をサンプルスポットに迅速かつ正確に堆積させることが重要です。このビデオを見れば、マルチサンプルの結晶形態を効果的に制御して、ルーチン分析に最適なイオンシグナルを得る方法について十分に理解できるはずです。

an-efficient-sample-preparation-method-to-enhance-carbohydrate-ion

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このビデオでは、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（MALDI -...

MALDIサンプル調製：超薄層法

精密質量測定は、タンパク質の研究における重要なステップである。マトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）質量分析法（MS）は、そのような決定のために使用することができ、その主要な利点は、塩、界面活性剤および汚染に対する耐性である。ここでは、MALDI-MSによって100kDaのより大きなタンパク質の分析のためにアクセス可能なアプローチを示している。...

フライトのマトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間（MALDI-TOF）100kDaのより大きなインタクトタンパク質の質量分析

ジスラノール（DT、1,8  - ジヒドロキシ-9,10  - ジヒドロアントラセン-9  - オン）は、以前に小分子の組織イメージングのためのMALDIマトリックスとして報告されている上に、内因性脂質​​のMALDIイメージングのためのDTの使用のためのプロトコル超高分解能四重極-FTICR機器上の正イオンMALDI-MSによる組織切片の表面は、ここで提供される。...

変換にマトリックス支援レーザー脱離/イオンイメージングのためのマトリックスとしてジスラノールはイオンサイクロトロン共鳴質量分析計をフーリエ

サンプルの乾燥工程時の基板温度を調節することにより、MALDI質量分析法におけるイオン信号の空間的な不均一性を低減するためのプロトコルが示されています。...

定量的なアプリケーションのための均質なMALDI試料の調製

このプロトコルでは、ホルマリン固定組織イメージング質量分析向けの昇華ベース準備の再現性と信頼性の高い方法について説明します。...

ペプチド ベースのマトリックスのためにサンプルを固定ホルマリンの最適な準備支援レーザー脱離イオン化質量分析イメージング ワークフロー

合成高分子の質量分析法 (MALDI-TOF MS)...

マトリクスによる合成高分子のキャラクタリゼーション支援レーザー脱離イオン化時間 (MALDI Tof) 質量分析装置

イオン移動度分析(IMS)は、生体分子の特性評価のための質量分析を補完する興味深いものであり、特に異性化に敏感であるためです。このプロトコルは、分子の単離とその断片の移動度プロファイルの生成を可能にするタンデムIMS(IMS/IMS)実験を記述します。...

タンデムイオン移動度実験のための周期的イオン移動度分光計の使用

マトリックス支援レーザー脱離/イオン化イメージング質量分析 による...

イメージング質量分析 による 寒天上および感染組織内で増殖した細菌コロニーの微生物連携の検討

このプロトコールは、MALDI-IMS分析用の水分含有量の少ない硬いシードサンプル切片の調製、分析種の元の分布と存在量の維持、高品質のシグナルと空間分解能の提供に関する詳細なガイダンスを説明することを目的としています。...

マトリックス支援レーザー脱離/イオン化イメージング質量分析のための硬質パーム種子の調製(英語)

このプロトコルは、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型質量分析を使用して、さまざまな分散性と末端基を持つ合成ポリマーを特徴付けるためのサンプル調製、データ収集、およびデータ分析の詳細な手順と例を提供します。...

分散度と末端基が異なる合成ポリマーの特性評価のためのMALDI-ToF MS法

学ぶMALDI質量分析法における炭水化物イオン信号強化のための効率的なサンプル調製法。乾燥過程で結晶構造を再形成し、シアリルルイスAやマルトヘプタオースなどの糖質サンプルの信号強度を向上させる実験的手順を解説します。

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法における炭水化物イオン信号を強化する効率的なサンプル調製法

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