MALDIサンプル調製：超薄層法

タンパク質の正確な質量測定に特に役立つ超薄層法に関するCHI Labのチュートリアルへようこそ。質量分析は感度が高いため、HPLCグレードの試薬とパウダーフリーのラテックスまたはニトリル手袋のみを使用してプレートを洗浄します。メタノール水で交互にすすぎ、最後に再びメタノールを洗います。

各すすぎの合間に、レンズティッシュを使用して余分な溶剤をやさしく拭き取ります。これらの洗浄手順を必要な回数だけ繰り返すと、きれいなプレートを作成できます。そして、洗浄して乾いたら、プレートをすぐに使用する必要があります。

20〜30マイクロリットルの薄層基板溶液をきれいなMALDIプレート全体に塗布して広げます。ここでは、P two 50ピペットチップを使用して、プレートを傷つけないようにしながら溶液を均等に広げます。薄層が乾いたら、残っている水滴がある場合は、キムワイプでやさしく吸い取ります。

その後、キムワイプでプレートを一気になめらかに拭き、薄層をきちんと形成します。最後に、質量分析計の汚染を避けるために、プレートの端を清掃します。サンプルを適用する前に、薄層をテストすることが重要です。

結晶が均一でない場所でテストスポットの乾燥に時間がかかりすぎる場合、問題がある可能性があります 薄層自体またはマトリックス溶液内で、プレートを清掃し、薄層を再塗布して再テストします。薄い層にスポットを付けるときは、スポットが蒸発して乾くのを望まないでください。むしろ、結晶化が遅くなり止まったら、余分な溶媒を取り除きます。

真空吸引器を使用すると、塩や洗剤などの汚染物質の存在、および高濃度の分析物が結晶化を妨げる可能性があります。さらにサンプルを希釈すると、結晶化が向上する可能性があります サンプルのすぐ近くでアリを見つけます。これにより、プレートをサンプルスポットからキャリブレーションスポットに移動する擬似的な内部キャリブレーションが可能になります。

サンプル取得時に、CASのレーザーショットをスペクトルに数回追加することで、このアプローチにより、外部キャリブレーションのみの場合よりも高い質量精度キャリブレーションが保証されます。分析物に干渉する可能性のある塩分や洗剤などの汚染物質を洗い流すことは非常に重要です。イオン化。これを行うには、氷冷した0.1%Tri Fluor酢酸をHPLCに滴下し、水を直接スポットに落とします。

ここに示すように、真空吸引器を使用して洗浄液を除去します。この方法は、膜タンパク質と可溶性タンパク質の両方について優れたスペクトルを生成します。