Name: 1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: 学ぶ 1,2-ジチオラン修飾ペプチドの固相合成法と自己組織化超分子構造の特性評価技術。レジン上での効率的なカップリングと脱保護、単一精製ステップによる高収率合成プロトコルを解説します。

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著者博士 B. エレン Scanley をありがとう彼女の技術的なトレーニングと彼女の CD にアクセスするためのナノテク ・ ウェスリアン大学で博士中川ムカージについてコネチカット州立大学および大学 (CSCU) センターで TEM を使用してヘルプをしたいです。分光光度計。報告される作業は、フェア フィールド大学、NASA コネチカット宇宙グラント コンソーシアムの科学研究所、国立科学財団助成番号チェ-1624774 の下に一部サポートされていました。

1. 1, 2-ジチオランの合成・精製ペプチドを変更
<ol><li>ジチオラン前駆体、3-(acetylthio)-2 の合成-(acetylthiomethyl) プロパン酸19。
	<ol>
<li>3 の 1 グラムを追加-ブロモ - 2-(ブロモメチル) プロピオン酸 (1 当量) 最小限の 55 ° C で攪拌しながら 25 mL 丸底反応フラスコに 1 M 水酸化ナトリウム (約 4 mL) に溶解隔壁を有する反応フラスコを密封し、窒素雰囲気下で配置します。</li>
		<li>1.49 カリウム thioacetate g を含むソリューションを準備 (3.2 当量) 4 ml の脱イオン水と 2 M 硫酸 3 mL (H2SO4) 酸場チオを作成します。</li>
		<li>プラスチック製の使い捨て 10 mL 注射器にチオ酢酸溶液を引き、注射器に針を配置します。セプテムを針で突き刺すことにより、反応フラスコに滴下し混合物を追加します。55 ° C で一晩反応を続ける</li>
		<li>メタノール及びジクロロ メタン (1:9) の混合物を用いたシリカゲル 60 F254板の薄層クロマトグラフィー (TLC) による反応を監視します。ブロモ クレゾール グリーン染色で反応の進行を視覚化します。製品は Rf = 0.57。</li>
		<li>反応が完了したら部屋の温度に冷却後、だから 2 M H2pH 1 に混合物を酸性化4。黄色の油をソリューションから分離します。</li>
		<li>冷たいクロロホルム (40 mL x 3) 製品を抽出します。有機層を結合し、硫酸マグネシウムで乾燥します。減圧下でクロロホルムを削除します。</li>
		<li>図 1 bとCに示すように、核磁気共鳴 (NMR) 分光法による分離製品 ( 1) の id を確認します。次の結果を期待する: 1H NMR、CDCl3, 300 MHz: d = (s、6 H) 2.4 2.9 (m, 1 H)、3.2 (m, 4 H) 10.1 (b、1 H)13C NMR、CDCl3、75 MHz: d = 195.1 (CH3COS-)、177.6 (-COOH)、45.1 (CH2S-)、30.5 (CH)、29.2 (-SCOCH3)。 注: 製品は黄色の油、83% の全体的な利回り。さらに精製することがなく製品を使用します。</li>
	</ol></li>
	<li>SPP とジチオラン前駆体の樹脂に結合 注: 自動化されたペプチッド シンセサイザー、推奨メーカーのプロトコルを次に下記固相ペプチド合成を行った。設定と試薬は、特殊なアミノ酸を使用する場合またはその他の商業器械のため適応かもしれません。<ol>
<li>0.156 g リンク アミド 4-methylbenzhydrylamine (MBHA) 樹脂 (0.1 モル) の重量を量り、反応容器の場所します。合成の開始前に少なくとも 15 分のジメチルホルムアミド (DMF) に樹脂をうねり。</li>
		<li>各 fluorenylmethyloxycarbonyl (fmoc 保護) の 4 の同等物を重量を量る保護アミノ酸 (0.4 モル) シーケンスと 0.152 g N、N、N'、N'- テトラメチル-O-(1H- benotriazol-1-イル) ウラン ヘキサフルオロリン酸 (0.4 モル、HBTU) のシーケンスの各アミノ酸。各カートリッジには、fmoc 保護保護アミノ酸と HBTU の両方が含まれています。</li>
		<li>すべて事前合成シンセサイザーのチェックを実行した後 (補充試薬、試薬の行をフラッシュされ、すべての試薬瓶を加圧)、C のカルーセルにアミノ酸カートリッジを配置 'n' 末端方向。N 末端 fmoc 保護脱保護の最後の手順の最終的なアミノ酸位置の後、空のカートリッジを配置します。</li>
		<li>標準の推奨設定を使用するペプチドを合成します。<ol>
<li>DMF (5 分 × 2) で 20% ピペリジンの樹脂 5 mL を fmoc 保護グループを deprotect します。</li>
			<li>カップリング ステップの前に DMF (6 x 5 mL) と樹脂を洗浄します。</li>
			<li>単一ステップの fmoc 保護保護アミノ酸と HBTU DMF で 0.4 M N-メチルモルホリン 4 mL を追加します。30 アミノ酸 fmoc 保護で保護されたソリューションをアクティブ ソリューションを反応容器に転送する前に s。 注: 自動ペプチド合成装置ミックス樹脂とソリューション N2ガスをバブリングによってあらゆる 30 のカップリング反応しながら 20 分間は場所を取ります。手動ペプチッド統合、低速で軌道シェーカーでカップリング段階の間反応容器を配置します。</li>
			<li>ソリューションをドレインし、DMF (3 x 5 mL) と樹脂を洗浄します。</li>
			<li>1.2.4.4 を通じて 1.2.4.1 手順各 fmoc 保護保護アミノ酸の c 'n'-末端方向興味のペプチドを合成します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>最後の N ターミナル脱保護手順後ガラスフリット シリンジに樹脂を転送します。DMF (3 x 5 mL)、ジクロロ メタン (DCM、3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。 メモ: 樹脂は DCM 真空デシケータで洗浄後保存可能性があります。樹脂は、結合前に保存されていた、DMF でカップリング反応前に、の樹脂を膨張するを確認します。</li>
		<li>HBTU 4 相当 10 及び n, N-diisopropylethylamine (DIPEA) 1、dmf、5 mL の 4 の同等物を追加することによって樹脂のペプチドの N 末端にジチオラン前駆体 (1) のカップルします。ガラスフリットの注射器を含む樹脂を追加する前に 10 分間結合混合物を前活動化させます。</li>
		<li>2 h のカップリング反応を振る。2 時間後に DMF (3 x 5 mL) 樹脂を洗浄し、一晩振動カップリング反応を繰り返します。</li>
		<li>2 番目の結合後 DMF (3 x 5 mL)、DCM (3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。 注: 樹脂は真空下でこの時点で胸の谷間まで格納できます。</li>
	</ol></li>
	<li>Thioacetate および樹脂からペプチド胸の谷間
	<ol>
<li>N 末端ジチオラン前駆体から thioacetate グループを deprotect、乾燥した樹脂を 10 mL マイクロ波反応管に転送し、DMF の 2 mL を追加します。樹脂を膨潤する容器に小さな電磁攪拌棒を追加して、15 分間電磁攪拌の低速で再停止を許可します。</li>
		<li>濃アンモニア水 2 mL を加えてシリコーン隔壁を有する反応容器のキャップ 45 分攪拌の 75 ° C の電子レンジ設定を使用してマイクロ波リアクター反応容器に配置。</li>
		<li>マイクロ波反応の完了後は、ガラスフリットきれいなシリンジに樹脂を転送します。DMF (2 x 5 mL)、メタノール (メタノール、2 x 5 mL) で洗浄します。</li>
		<li>量 5 mL のメタノール (1:4)、濃水酸化アンモニウムのソリューションを追加します。ジチオラン環ジスルフィド結合の分子内酸化を増加するために一晩を振ることを残します。</li>
		<li>メタノール (2 x 5 mL)、DCM (3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。 注意: 乾燥した樹脂が格納する真空デシケータでこの時点で。</li>
		<li>胸の谷間のカクテルを優しく 1.5 時間振とうしながら注射器を含む樹脂に追加します。95% トリフルオロ酢酸 (TFA)、2.5 %triisopropylsilane (ヒント)、2.5% 水 5 mL の容量であり、使用されるカクテルの谷間。 注意: にのみ化学発煙のフードの下で動作します。TFA は、揮発性および腐食性です。 注記: ペプチド配列とアミノ酸側鎖の保護基の大半は、上記の胸の谷間カクテル ソリューションは十分です。ただし、代替胸の谷間のカクテルは、特定のアミノ酸の側鎖 (システイン、メチオニン、Trp、Arg を含む特定のペプチド) のグループまたは他の樹脂化学20の保護のため必要かもしれない。</li>
		<li>ガラスフリットの注射器から滴下することで 50 mL の円錐管に冷たいジエチル エーテル 25 mL に原油のペプチドを沈殿させます。ペプチドは、白色固体として析出します。ペレットで 1300 x g で 10 分間の遠心分離によってペプチドは慎重に廃棄物収集のための別の容器にジエチル エーテルをデカントします。</li>
		<li>円錐管にジエチル エーテルの別の 25 mL を追加し、再ボルテックスで沈殿を中断します。10 分間 1300 × g で遠心分離を繰り返し、ジエチル エーテルを再度デカントします。真空下でペレットを乾燥させます。</li>
	</ol></li>
	<li>1, 2-ジチオランの精製は、ペプチドを変更 注: は、逆相高速液体クロマトグラフィーによる原油のペプチドを浄化します。収集しペプチド ピーク、MALDI-TOF 質量分析法による質量を確認します。<ol>
<li>0.1% アセトニ トリルの最小限の量で粗ペプチド ペレットを溶解 TFA。ペプチドの疎水性と集約傾向のため優しく溶解度を支援する 40 の ° C のサンプルを加熱します。 注: は、潜在的なジスルフィド交換反応21,22,23を防ぐために高い温度およびペプチドの超音波処理を避けてください。</li>
		<li>HPLC 精製の粗ペプチドの 1 mL を準備をするには、400 μ L を追加集中ペプチド株式のアセトニ トリルで 600 μ L H2O 0.1 %tfa とフィルターに 22 μ m シリンジ フィルターを通して HPLC バイアルに。追加の 5% イソプロパノールは、ペプチドの凝集を防ぐために追加できます。</li>
		<li>浄化の 20 分セット 15-55% アセトニ トリルの線形グラデーションを 3 mL/min の流速で C-18 セミ分取カラムを用いたペプチド 222 に UV 検出器 nm (アミド バックボーン) と 330 nm (ジスルフィド結合)。収集し、(図 2 a) の関心のピークを組み合わせます。</li>
		<li>リフレクトロン モード (図 2 b) で MALDI-TOF 質量分析計でペプチド製品質量を確認します。0.5 μ L 2, 5-ジヒドロキシ安息香酸 (DHB) 行列の解析、ミックス MALDI プレートに収集されたピークの 0.5 μ L (10 mg/mL DHB アセトニ トリル 50%、0.1 %tfa)。 注: 一般的な MALDI-TOF における付加体の質量分析法は、ナトリウムとカリウム塩の付加物 ([M+na]+ [M + k]+) のピーク。推奨は、分析の前にサンプルの脱塩塩付加ピーク [M + H]+主峰の信号を抑制する場合。さらに、[M + O]+の酸化ピークも 1, 2-ジチオラン変更ペプチドの検出します。DHB 行列を用いた MALDI イオンからのレーザー誘起酸化に関する報告書では、MALDI 誘起酸化アーティファクト24を制限するため、サンプル濃度、溶媒、レーザー強度などの要因を変更できることを示唆しています。</li>
		<li>MALDI-TOF 正しい質量の確認の後に、フラッシュの凍結後ペプチドを凍結乾燥します。アセンブリまで真空下で凍結乾燥させたペプチド粉末を保ちます。</li>
	</ol></li>
</ol>2 分子の特性は自己組織化構造します。
<ol><li>
アミロイド線維の形成
	<ol>
<li>自己集合ソリューションを準備するには、分析用天秤を用いたペプチド粉末の 1 mg を重量を量る。20% アセトニ トリルと 10 mM (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic 酸 (HEPES) 1 mg/mL ペプチド アセンブリ混合物の最終的な集中に、1.5 mL 遠心チューブの混合物 (pH 7.5) に溶解します。渦アセンブリ ソリューションと室温でアセンブルする残す。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
アミロイド線維の分光学的キャラクタリゼーション
	<ol>
<li>数日おきフーリエ変換の赤外線 (FTIR) 分光法によるペプチド アセンブリ プロセスに従います。1670 cm-1を中心とした広範なピークは、サンプル17の組み立てのペプチドから生じる IR 署名です。ペプチド アセンブリ サンプルは通常消えて、成熟に達する広い組み立てピークの 1 〜 2 週間を取る。<ol>
<li>ATR のダイヤモンド結晶の薄膜としてアセンブリ ソリューションの 8-10 μ L の因数を乾燥します。ドライ フィルム フォームとして 1630 cm-1に 1640 年から大きく、広い水のピークの消失を監視します。</li>
			<li>1500-1800 cm-1 2 cm-1解像度 50 のスキャンの平均から IR スペクトルを取得します。取得し、各サンプル スキャン前にバック グラウンド ・ スキャンを減算します。Β シート アセンブリの赤外線署名は、1625 と 1635 cm-1 (図 3 a)25,26の間鋭いピークです。</li>
		</ol>
</li>
		<li>円二色性 (CD) による β シート豊富な超分子構造にペプチド組み立てを特徴付けます。ペルチェ温度コントロール システムで CD 性分光を使用してスペクトルを記録します。<ol>
<li>0.1 mm のパス長さ microcuvette でアセンブリ ソリューションの 30 μ L をピペットします。 注: 電池ホルダーはクランプし、楽器の短いパスの長さセルを配置する必要です。</li>
			<li>各スペクトル CD 楽器を次のパラメーターに設定: 300 の波長をスキャン nm、180 nm、100/分のスキャン率 1 海里、25 ° C、3 つのスキャンの平均帯域幅。</li>
			<li>バッファー (20% アセトニ トリル/10 mM HEPES、pH 7.5) のスペクトルを収集し、コントロールとして各サンプル スキャンから減算します。Β シートの CD 署名は、楕円率、最小中心約 220 nm (図 3 b)27です。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
アミロイド繊維の顕微鏡観察
	<ol>
<li>Β シート豊富な超分子構造に成熟するペプチド試料の 2 〜 3 週間かかります。 注: アセンブリは、同様のアセンブリ プロセスの初期の段階で透過型電子顕微鏡 (TEM) を使用してイメージすることができます。<ol>
<li>カーボンの TEM グリッドの表面上にペプチド アセンブリ ソリューションの 10 μ L をピペットします。 注: グリッド表面にピペット チップに触れないように注意してください。高精度、自動閉鎖準備中に TEM グリッドを保持するためにピンセットを使用します。</li>
			<li>1-2 分グリッド表面に吸着するアセンブリを許可するを待ちます。余分なサンプルを削除するには、グリッドの端にフィルター ペーパーに触れます。</li>
			<li>市販のウラニル 4% 酢酸溶液を 100 μ L の脱イオン水を追加することによって 2% ウラニル アセテート染色を準備します。グリッド サーフェス上に 2% ウラニル アセテート染色の 10 μ L をピペットし、2-3 分間インキュベートします。、孵化後、グリッドの端にろ紙を触れることにより、余分な汚れを削除します。</li>
			<li>一晩真空デシケータに TEM グリッドを配置します。イメージングまで真空下で保存します。</li>
			<li>TEM (図 3) で作製した試料をイメージします。顕微鏡検査のための一般的なパラメーターは次のとおりです: に至る 9,300 X 23、倍率で画像 000 X 120 の加速電圧を持つタングステン フィラメント kV。 注: 取得した TEM 画像28の超分子構造体の平均繊維の幅を測定する ImageJ を使用できます。 注意: 使用する前にすべての関連する安全性データ シート (SDS) を参照してください。いくつかの化学物質は、合成、精製で使用されると説明 1, 2-ジチオラン修正の自己組織化ペプチドの解析、腐食性や毒性と化学の発煙のフードの下でのみ使用する必要があります。常に適切な個人用保護具 (安全眼鏡、白衣、フルの長さのズボン、閉じてつま先の靴を含む) を使用して、研究室で作業するとき。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Wang, J., Liu, K., Xing, R., Yan, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+self-assembly%3A+Thermodynamics+and+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Peptide self-assembly: Thermodynamics and kinetics.</a> Chemical Society Reviews. 45, 5589-5604 (2016).</li>
<li>Dong, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+supramolecular+polymers+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Functional supramolecular polymers for biomedical applications.</a> Advanced Materials. 27, 498-526 (2015).</li>
<li>Edwards-Gayle, C. J. C., Hamley, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+bioactive+peptides%2C+peptide+conjugates%2C+and+peptide+mimetic+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+and+Biomolecular+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of bioactive peptides, peptide conjugates, and peptide mimetic materials.</a> Organic and Biomolecular Chemistry. 15, 5867-5876 (2017).</li>
<li>Goor, O. J. G. M., Hendrikse, S. I. S., Dankers, P. Y. W., Meijer, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+supramolecular+polymers+to+multi-component+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">From supramolecular polymers to multi-component biomaterials.</a> Chemical Society Reviews. 46, 6621-6637 (2017).</li>
<li>DiMaio, J. T. M., Doran, T. M., Ryan, D. M., Raymond, D. M., Nilsson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulating+supramolecular+peptide+hydrogel+viscoelasticity+using+biomolecular+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Modulating supramolecular peptide hydrogel viscoelasticity using biomolecular recognition.</a> Biomacromolecules. 18, 3591-3599 (2017).</li>
<li>DiMaio, J. T. M., Raymond, D. M., Nilsson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Display+of+functional+proteins+on+supramolecular+peptide+nanofibrils+using+a+split-protein+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+and+Biomolecular+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Display of functional proteins on supramolecular peptide nanofibrils using a split-protein strategy.</a> Organic and Biomolecular Chemistry. 15, 5279-5283 (2017).</li>
<li>Mahmoud, Z. N., Gunnoo, S. B., Thomson, A. R., Fletcher, J. M., Woolfson, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioorthogonal+dual+functionalization+of+self-assembling+peptide+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Bioorthogonal dual functionalization of self-assembling peptide fibers.</a> Biomaterials. 32, 3712-3720 (2011).</li>
<li>Petkau-Milroy, K., Uhlenheuer, D. A., Spiering, A. J. H., Vekemans, J. A. J. M., Brunsveld, L. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/sc/c3sc50891a">Dynamic and bio-orthogonal protein assembly along a supramolecular polymer.</a> Chemical Science. 4, 2886-2891 (2013).</li>
<li>Li, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrillar+tangle+surrogates%3A+Histone+H1+binding+to+patterned+phosphotyrosine+peptide+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Neurofibrillar tangle surrogates: Histone H1 binding to patterned phosphotyrosine peptide nanotubes.</a> Biochemistry. 53, 4225-4227 (2014).</li>
<li>Sadownik, A., Stefely, J., Regen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerized+liposomes+formed+under+extremely+mild+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Polymerized liposomes formed under extremely mild conditions.</a> Journal of the American Chemical Society. 108, 7789-7791 (1986).</li>
<li>Zhang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATN-161+Peptide+functionalized+reversibly+cross-linked+polymersomes+mediate+targeted+doxorubicin+delivery+into+melanoma-bearing+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">ATN-161 Peptide functionalized reversibly cross-linked polymersomes mediate targeted doxorubicin delivery into melanoma-bearing C57BL/6 mice.</a> Molecular Pharmaceutics. 14, 2538-2547 (2017).</li>
<li>Margulis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+polymeric+nanocubes+by+self-assembly+and+crystallization+of+dithiolane-containing+triblock+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Formation of polymeric nanocubes by self-assembly and crystallization of dithiolane-containing triblock copolymers.</a> Angewandte Chemie International Edition. 56, 16357-16362 (2017).</li>
<li>Zhang, X., Waymouth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1%2C2-Dithiolane-Derived+Dynamic%2C+Covalent+Materials%3A+Cooperative+Self-Assembly+and+Reversible+Cross-Linking%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">1,2-Dithiolane-Derived Dynamic, Covalent Materials: Cooperative Self-Assembly and Reversible Cross-Linking.</a> Journal of the American Chemical Society. 139, 3822-3833 (2017).</li>
<li>Sakia, N., Matile, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stack+exchange+strategies+for+the+synthesis+of+covalent+double-channel+photosystems+by+self-organizing+surface-initiated+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Stack exchange strategies for the synthesis of covalent double-channel photosystems by self-organizing surface-initiated polymerization.</a> Journal of the American Chemical Society. 133, 18542-18545 (2011).</li>
<li>Uji, H., Morita, T., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+direction+dependence+of+single-molecule+conductance+of+a+helical+peptide+in+molecular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Chemistry+Chemical+Physics%22%5BJournal%5D)">Molecular direction dependence of single-molecule conductance of a helical peptide in molecular junction.</a> Physical Chemistry Chemical Physics. 15, 757-760 (2013).</li>
<li>Liang, C., Ni, R., Smith, J. E., Childers, W. S., Mehta, A. K., Lynn, D. G. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja508621b">Kinetic intermediates in amyloid assembly.</a> Journal of the American Chemical Society. 136, 15116-15149 (2014).</li>
<li>Smith, J. E., et al. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/ijch.201500012">Defining the dynamic conformational network of cross-β peptide assembly.</a> Israel Journal of Chemistry. 55, 763-769 (2015).</li>
<li>Black, S. P., Sanders, J. K. M., Stefankiewicz, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+exchange%3A+Exposing+supramolecular+reactivity+through+dynamic+covalent+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Disulfide exchange: Exposing supramolecular reactivity through dynamic covalent chemistry.</a> Chemical Society Reviews. 43, 1861-1872 (2014).</li>
<li>Vendetti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dihydroasparagusic+acid%3A+Antioxidant+and+tyrosinase+inhibitory+activities+and+improved+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Dihydroasparagusic acid: Antioxidant and tyrosinase inhibitory activities and improved synthesis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 6848-6855 (2013).</li>
<li>Stawikowski, M., Fields, G. B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3564544/">Introduction to peptide synthesis.</a> Current Protocols in Protein Science. 26, (2002).</li>
<li>Canadell, J., Goossens, H., Klumperman, B. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ma2001492">Self-healing materials based on disulfide links.</a> Macromolecules. 44, 2536-2541 (2011).</li>
<li>Lafont, U., van Zeijl, H., van der Zwaag, S. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/am301879z">Influence of cross-linkers on the cohesive and adhesive self-healing ability of polydisulfide-based thermosets.</a> ACS Applied Materials and Interfaces. 4, 6280-6288 (2012).</li>
<li>Komaromy, D., Stuart, M. C. A., Santiago, G. M., Tezcan, M., Krasnikov, V. V., Otto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+can+direct+dynamic+covalent+bond+formation+toward+diversity+or+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Self-assembly can direct dynamic covalent bond formation toward diversity or specificity.</a> Journal of the American Chemical Society. 139, 6234-6241 (2017).</li>
<li>McAvery, K. M., Guan, B., Fortier, C. A., Tarr, M. A., Cole, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+oxidation+of+cholesterol+observed+during+MALDI-TOF+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Laser-induced oxidation of cholesterol observed during MALDI-TOF mass spectrometry.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 22, 659-669 (2011).</li>
<li>Krimm, S., Bandekar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrational+spectroscopy+and+conformation+of+peptides%2C+polypeptides%2C+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Protein+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Vibrational spectroscopy and conformation of peptides, polypeptides, and proteins.</a> Advances in Protein Chemistry. 38, 181-364 (1986).</li>
<li>Halverson, K. J., Sucholeiki, I., Ashburn, T. T., Lansbury, P. T. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja00017a068">Location of β-sheet-forming sequences in amyloid proteins by FTIR.</a> Journal of the American Chemical Society. 113, 6701-6703 (1991).</li>
<li>Greenfield, N., Fasman, G. D. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/bi00838a031">Computed circular dichroism spectra for the evaluation of protein confirmation.</a> Biochemistry. 8, 4108-4116 (1969).</li>
<li>Rasband, W. S. ImageJ. , National Institutes of Health. Bethesda, Maryland, USA. Available from:
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij">https://imagej.nih.gov/ij</a> (2016).</li>
<li>Roy, S., Shinde, S., Hamilton, G. A., Hartnett, H. E., Jones, A. K. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/ejic.201000979">Artificial [FeFe]-hydrogenase: On resin modification of an amino acid to anchor a hexacarbonyldiiron cluster in a peptide framework.</a> European Journal of Inorganic Chemistry. 2011, 1050-1055 (2011).</li>
<li>Van Duinen, S. G., Castano, E. M., Prelli, F., Bots, G. T. A. B., Luyendijk, W., Frangione, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hereditary+cerebral+hemorrhage+with+amyloidosis+in+patients+of+Dutch+origin+is+related+to+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis in patients of Dutch origin is related to Alzheimer disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 5991-5994 (1987).</li>
<li>Barth, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0079610700000213">The infrared absorption of amino acid sidechains.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 74, 141-173 (2000).</li>
<li>Jayaraman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+amyloid+nucleation+via+%CE%B1-helix-rich+oligomeric+intermediates+in+short+polyglutamine-containing+Huntingtin+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Slow amyloid nucleation via α-helix-rich oligomeric intermediates in short polyglutamine-containing Huntingtin fragments.</a> Journal of Molecular Biology. 415, 881-899 (2012).</li>
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この記事では、両方の合成の詳細は、N ターミナル 1, 2-ジチオラン修正の自己組織化ペプチドの精製と結果の超分子構造の性質をについて説明します。ここで報告される 1, 2-ジチオラン ペプチドの合成ジチオラン前駆体、3-(acetylthio)-2 を生成するワンステップ合成を含む利点があります-(acetylthiomethyl) プロパン酸と樹脂の電子レンジの脱保護反応、有毒なヒドラジンの脱保護する安全な代替案は既報29水酸化アンモニウムを利用しながら酸化 1, 2-ジチオラン構造を生成するためのグループを保護する前駆体 thioacetate。シーケンスの長さと合わせて fmoc 保護で保護された不自然なアミノ酸および C ターミナル樹脂化学を使用するなど、組成を変更することによって (図 1 a) 1, 2-ジチオラン ペプチドの全体的な固相ペプチド合成を簡単に変更することができます。多くの異なる研究アプリケーション。
求側鎖を有するアミノ酸またはグループを保護する...

固相ペプチド合成に関与する堅牢なペプチド結合の化学を形成し、シーケンスの長さと構成を制御する機能、超分子構造に重く研究フィールドをまとめる自己ペプチド。制御し、側鎖の立体を含むペプチドの自己組織化構造と静電相互作用、水素結合、疎水性効果1、安定の要因はデザイン ルールのセットとして機能します。これらの基本的な設計ルールに研究が進み、ペプチドの論理の次の手順では自己ペプチド ベースの構造と機能の多様性を拡大して含まれます。自己組織化ペプチドがペプチド シーケンスまたはアセンブリ条件2,3,4のための戦略の開発をチューニングすることによって多くの医用に使用されている汎用性の高い生体材料ペプチド ナノファイバー5,6,7,8,9組立後変更のまま比較的未踏の領域です。
動的ジスルフィド交換とチオール化学超分子構造体の表面では、機能的な新しい生体材料をもたらす可能性がある 1 つの領域です。1, 2-ジチオラン鎖 (一般的リポ酸 (la) やアスパラガス酸 (aa) の派生物) の設立がリポソーム システム10、11ブロック共重合体12,13と報告されています。表面14,15でアンカーを整理します。ここで、合成と 1, 2-ジチオラン機能グループ16、N 末端修飾アルツハイマー病に関連付けられている a β ペプチドの核のコアから派生した自己組織化ペプチドの特性を報告します。 17。結果として得られる分子繊維は今アミロイド繊維18の超分子表面にチオール、ジスルフィド交換反応性を研究する実験的プラットフォームとして機能します。

<table><tbody><tr><td>リンクアミドMBHA樹脂、高負荷</td><td>ジャイロスプロテインテクノロジー</td><td>RAM-5-HL</td><td>皮膚や目との接触を避け、</td></tr><tr><td>N,N-ジメチルホルムアミド</td>を吸い込まないでください <td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>D119-4</td><td>可燃性の液体と蒸気; 目や皮膚に刺激を与える;個人用保護具を使用してください。裸火から遠ざける</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Val-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-V</td><td>個人用保護具を着用し、</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Leu-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-L</td><td>個人用保護具を着用し、</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys(Boc)-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-KBC</td><td>個人用保護具を着用し、吸入しないでください</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-F</td><td>個人用保護具を着用し、</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ala-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-A</td><td>個人用保護具を着用し、</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Gln(Trt)-OH</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td>FLA-25-QT</td><td>個人用保護具を着用し、吸入しないでください</td></tr><tr><td>N,N,N&prime;,N&prime;-テトラメチル-O-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)ウロニウムヘキサフルオロリン酸</td><td>ジャイロスプロテインテクノロジー</td><td>26432</td><td>皮膚、目、呼吸器の刺激を引き起こします。吸入しないでください; フードの下または換気の良い場所で使用</td></tr><tr><td>DMF</td><td>ジャイロスプロテインテクノロジー</td><td>PS3-MM-L</td><td>非常に可燃性;個人用保護具を着用してください。熱から遠ざけ、容器をしっかりと閉じてください。吸い込んだり飲み込んだりしないでください。</td></tr><tr>DMF<td>ジャイロスプロテイン</td><td>テクノロジーPS3-PPR-L</td><td>で20%ピペリジン</td>を扱った後、皮膚を徹底的に洗ってください 重度の<td>目と皮膚の火傷を引き起こします。可燃性の液体および蒸気;</td></tr><tr><td>ジクロロメタン</td>を吸い込まないでください <td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>D37-4</td><td>癌を引き起こす可能性があります。吸い込まないでください。個人用保護具を着用してください。ボンネットの下でのみ使用してください。接触した場合は、少なくとも15分間水で上昇させ、医師の診察を受けてください</td></tr><tr><td>アセトニトリル</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>A998-4</td><td>可燃性; 目に刺激を与えます。個人用保護具を使用してください。ドラフトの下でのみ使用してください。裸火や高温の表面から遠ざけてください。接触した場合は、少なくとも15分間水ですすぎ、医師の診察を受けてください</td></tr><tr><td>トリフルオロ酢酸</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>A116-50</td><td>重度の火傷を引き起こします。吸い込まないでください;水生生物に有害です。個人用保護具を使用してください。ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触した場合は、少なくとも15分間水ですすぎ、直ちに医師の診察を受けてください</td></tr><tr><td>4%酢酸ウラニル</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>22400-4</td><td>吸い込まないでください。水生生物に有害</td></tr><tr><td>4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-エタンスルホン酸</td><td>アクロス 有機物</td><td>AC172571000</td><td>吸入しないでください。 屋外または換気の良い場所で使用</td></tr><tr><td>窒素 ガス</td><td>TechAir</td><td></td><td>圧力下では、加熱すると爆発する可能性があります</td></tr><tr><td>3-ブロモ-2-(ブロモメチル)プロピオン酸</td><td>アルファ アエサル</td><td>AAA1963014</td><td>吸入しないでください。</td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>S318-100</td><td>個人用保護具を使用し、ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触する場合は、少なくとも15分間すすぎ、医師の診察を受ける</td></tr><tr><td>チオ酢酸カリウム</td><td>アクロス・オーガニクス</td><td>AC221300250</td><td>皮膚や目の炎症を引き起こします。吸い込まないでください。個人用保護具</td></tr><tr><td>硫酸</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>SA213</td><td>を使用してください火傷を引き起こします。水から遠ざけてください。可燃物から遠ざけてください。吸い込まないでください。個人用保護具を使用する。接触した場合 少なくとも15分間すすぎ、医師の診察を受ける</td></tr><tr><td>クロロホルム-d</td><td>アクロスオーガニック</td><td>AC320690075</td><td>がんの危険性の可能性; 皮膚や目に刺激を与える; 吸入しないでください。個人用保護具を使用してください。ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触する場合は、少なくとも15分間領域をすすぎ、医師の診察を受ける</td></tr><tr><td>クロロホルム フィ</td><td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>C298-4</td><td>がんの危険性の可能性;皮膚や目に刺激を与える;吸入しないでください。個人用保護具を使用してください。ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触する場合は、少なくとも15分間すすぎ、医師の診察を受ける場合</td></tr><tr><td>N,N-ジイソプロピルエチルアミン</td><td>アクロス有機物</td><td></td><td>AC367841000 非常に可燃性; 水生生物に有害; 個人用保護具を着用し、</td></tr><tr><td>水酸化アンモニウム</td>を飲み込まないでください <td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>A669S-500</td>腐食性; メタノールを<td>吸い込まないでください</td></tr> フィ<tr><td></td><td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>A452-4</td><td>可燃性の液体と蒸気。個人用保護具を使用する。吸い込まないでください。接触する場合は、少なくとも15分間すすぎエリアをすすぎ、医師の診察を受ける</td></tr><tr><td>トリイソプロピルシラン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>233781</td><td>可燃性; 個人用の肛門保護安全装置を使用してください; 容器をしっかりと閉じたままにしてください</td></tr><tr><td>ジエチルエーテル</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>E138-1</td><td>非常に可燃性;皮膚や目に刺激を与える。個人用保護具</td></tr><tr><td>2,5-ジヒドロキシ安息香酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>39319-10x10MG-F</td><td>吸入しないでください; 皮膚や目に刺激を与える</td></tr><tr><td>α-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸</td><td>Alfa Aesar</td><td>AAJ67635EXK</td><td></td></tr><tr><td>c18 ジップチップ</td><td>ミリポア</td><td>ZTC18S096</td><td></td></tr><tr><td>トリス(2-カルボキシエチル) フォスパイン 塩酸塩</td><td>Thermo Scientific</td><td>PI20490</td><td></td></tr><tr><td>シリカゲル60 F254はアルミニウム裏打ちTLCシート</td><td>EMDミリポア</td><td>1.05549.0001</td><td></td></tr>薄い<tr><td>壁精密NMRチューブ</td><td>Bel-Art</td><td></td><td>663000585 5mm O.D.</td></tr><tr><td>全プラスチック製のNorm-Jectシリンジ</td><td>Air Tite</td><td>AL10</td><td></td></tr><tr><td>使い捨て針</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>BD 305185</td><td>使用済みの針は鋭利物に廃棄されます</td></tr><tr><td>廃棄物容器 使い捨てフリットシリンジ</td><td>Torviq</td><td>SF1000LL</td><td>10mL フリットシリンジがレポートで使用されましたが、大規模な合成に必要な場合は、より大きなシリンジが利用可能です。</td></tr><tr><td>カーボングリッド</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>CF200-CU</td> グリッド自己閉鎖ピンセット<td>の光沢のある銅側ではなく、カーボングリッド側でサンプルと染色を準備し</td></tr>てください <tr><td></td><td>電子顕微鏡科学</td><td>78318-3X</td><td>非常に鋭い先端、長さ:120 mm</td></tr><tr><td>0.1 mm 短経路長セル</td><td>Starna Cells, Inc.</td><td>20/C-Q-0.1</td><td>壊れやすい</td></tr><tr><td>10mL 容器キャップ</td><td>CEM</td><td>909210</td><td></td></tr><tr><td>10mL 圧力容器</td><td>CEM</td><td>908035</td><td></td></tr><tr><td>Aeris Semi-Prep HPLC カラム</td><td>Phenomenex</td><td>00F-4632-N0</td><td>150 x 10mm</td></tr><tr><td>セルホルダー</td><td>Starna Cells, Inc.</td><td>CH-2049</td><td>光路長の短い細胞を使用する場合に必要</td></tr><tr><td>PS3ペプチド合成装置</td><td>Gyros Protein Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DiscoverSP Microwave Reactor</td><td>CEM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>HERMLE</td><td>Z 206 A</td><td>固定 6x50 mL ローター</td></tr>を使用 <tr><td>HPLC</td><td>島津</td><td></td><td>製作所 UV 検出器</td></tr><tr><td>核磁気共鳴分光器</td><td>Avance, Bruker</td><td></td><td>300 MHz</td></tr><tr><td>MALDI-TOF質量分析計</td><td>Axima Confidence、島津</td><td></td><td></td></tr><tr><td>製作所の凍結乾燥機</td><td>Millrock Technology</td><td>BT85A</td><td></td></tr><tr><td>フーリエ変換赤外分光計</td><td>Alpha Tensor、Bruker</td><td></td><td></td></tr>透過<tr><td>型電子顕微鏡</td><td>Tecnai Spirit、FEI</td><td></td>ガ<td>タンオリウス光ファイバーCCDデジタルカメラと併用。CSCUナノテクノロジーセンターでアクセス</td></tr>可能 <tr><td>円二色性分光偏光計</td><td>J-810, JASCO</td><td></td><td>6セルペルチェ温度コントローラーと併用。ウェズリアン大学でアクセス。</td></tr></tbody></table>

1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド

Synthesis and Characterization of 1,2-Dithiolane Modified Self-Assembling Peptides

本報告では N 末端の 1, 2-ジチオランの合成に焦点を当てて自己組織化ペプチドとその結果の評価を変更された自己組織化超分子構造。合成経路は、ジチオラン前駆体分子 3-(acetylthio)-2 の樹脂の結合の固相ペプチド合成の活用-(acetylthiomethyl) プロパン酸、およびマイクロ波を用いた thioacetate ペプチドの deprotection1, 2-ジチオランに屈する前に、ガレージから最終的な胸の谷間 N 末端ペプチドを変更しました。アルツハイマー病に関連付けられている a β ペプチドの核のコアから派生した、1, 2-ジチオラン ペプチドの高速液体クロマトグラフィー (HPLC) 精製後、ペプチドはクロス β アミロイド線維に自己組み立てるに表示されます。フーリエ変換赤外分光法 (FT-IR)、円二色性分光法 (CD) と透過型電子顕微鏡 (TEM) によるアミロイド繊維を特徴付けるためのプロトコルが表示されます。組立後変更戦略を開発し、動的共有結合化学を探索するモデル系として、よ特徴付けられた自己組織化ペプチドを 1, 2-ジチオラン構造 N 末端修飾の方法を検討今することができます。超分子のペプチド ナノファイバーの表面。

ジチオラン前駆体分子の初期段階合成、脇から 1, 2-ジチオラン変更ペプチド合成の残りの部分は、固体支持体 (図 1 a) で発生します。3 の変換-ブロモ - 2-(ブロモメチル) プロピオン酸 3-(acetylthio)-2- 1H (acetylthiomethyl) プロパン酸、ジチオラン前駆体を確認し、 13C の NMR (図 1 bとC) それの前に自由に結合まだガレージにペプチドの N 末端アミン。マイクロ波リアクターを用いた水酸化アンモニウムとチオールに thioacetate の脱保護を実行し、1, 2-ジチオラン変更ペプチドは樹脂から切断前に 1, 2-ジチオランはメタノールの酸化一晩。逆相高速液体クロマトグラフィー (図 2 a) による原油のペプチドを精製し、MALDI-TOF 質量分析法 ...

1, 2-ジチオランの合成のためのプロトコルは、ペプチドやペプチドの自己集合結果超分子構造の評価に変更されました。

This report focuses on the synthesis of an N-terminus 1,2-dithiolane modified self-assembling peptide and the characterization of the resulting ...

超分子構造の機能性を高めるための構造が成長するにつれて、1,2-ジチオラン基を自己組織化ペプチドに組み込むこの方法は、超分子表面での反応性に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、1,2-ジチオラン前駆体分子の結合と脱保護が、最終修飾ペプチドの精製ステップが1回のみで樹脂上で行われることです。アセンブリが最終的な超分子構造に成熟するのにかかる時間は異なるため、超分子アセンブリの特性評価方法と結果を視覚的に示すことが重要です。ジチオラン前駆体を合成するには、まず、1グラムの3-ブロモ-2-プロピオン酸を約4ミリリットルの1モル水酸化ナトリウムに溶解し、50ミリリットルの丸底反応フラスコで摂氏55度で攪拌しながら溶解します。すべての試薬を溶液に懸濁したら、反応フラスコをセプタムで密封し、フラスコを窒素雰囲気下に置く。次に、1.49グラムのチオ酢酸カリウムと3ミリリットルの2モル硫酸を4ミリリットルの脱イオン水に加えて、その場でチオ酢酸を作成します。チオ酢酸溶液をプラスチック製の使い捨て10ミリリットル注射器に吸引し、注射器に18ゲージの針を装備し、次に針で中隔を貫通して混合物を反応フラスコに滴下し、摂氏55度で一晩反応を続けます。翌朝、メタノールとジクロロメタンを混合したシリカゲル60 F254プレート上の薄層クロマトグラフィーにより反応をモニターし、ブロモクレゾールグリーン染色による反応進行を可視化します。完了した反応が室温まで冷却されたら、混合物を2モル硫酸でpH1に酸性化します。黄色の油を溶液から分離し、40ミリリットルの冷たいクロロホルムを3つ添加して製品を抽出し、有機層を組み合わせて硫酸マグネシウムを乾燥させ、減圧下でクロロホルムを除去します。製品は、全体の収率が83%の黄色のオイルである必要があり、さらに精製せずに使用できます。ジチオラン前駆体をオンレジンペプチドのN末端に結合させるために、5ミリリットルのジメチルホルムアミドに4等量のジチオラン前駆体、4等量のHBTUおよび10当量のDIPEAを添加します。カップリング混合物を室温で10分間予備活性化してから、N末端樹脂含有フリットシリンジにサンプルを添加します。カップリング反応を2時間振とうし、続いて新鮮なジメチルホルムアミドで5ミリリットルを3回洗浄し、カップリング反応と一晩の振とうを繰り返します。2回目のカップリング後、5ミリリットルのジメチルホルムアミド洗浄を3回、続いて5ミリリットルのジクロロメタン樹脂洗浄を3回行い、乾燥した樹脂を10ミリリットルのマイクロ波反応チューブに移します。次に、N末端ジチオラン前駆体からチオ酢酸基を脱保護するために、チューブに2ミリリットルのジメチルホルムアミドを添加します。樹脂を膨潤させ、容器に小さなマグネティックスターバーを追加し、低速マグネティックスターリングでレジンを再懸濁します。15分後、チューブに2ミリリットルの濃水酸化アンモニウムを加え、反応容器をシリコンセプタムでキャップし、容器を摂氏75度で45分間攪拌しながらマイクロ波反応器に入れます。マイクロ波反応が完了したら、レジンを清潔で使い捨てのフリットシリンジに移し、5ミリリットルのジメチルホルムアミド2回と5ミリリットルのメタノール洗浄2回でレジンを洗浄します。最後の洗浄後、樹脂含有シリンジに5ミリリットルの切断カクテルを加え、室温で穏やかに振とうしながら1時間半インキュベーションします。高速液体クロマトグラフィーまたはHPLC精製用に1ミリリットルの粗ペプチドを調製するには、アセトニトリル中の濃縮ペプチドストック400マイクロリットルを、0.1%のトリフルオロ酢酸を添加した600マイクロリットルの水に加え、22マイクロメートルシリンジフィルターで溶液をHPLCバイアルにろ過します。ペプチドを精製するには、UV検出器を222ナノメートルと330ナノメートルに設定したUV検出器を使用して、15〜55%アセトニトリルの線形グラジエントで20分間で3ミリリットル/分の流速でC18セミ分取カラムを使用します。次に、目的のピークを収集して組み合わせます。マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間またはMALDI-TOF質量分析法によるペプチド製品の確認には、0.5マイクロリットルの2,5-ジヒドロキシ安息香酸マトリックスを含むマトリックス支援レーザー脱離/イオン化プレート上で、収集したピークの0.5マイクロリットルを混合します。自己組織化溶液を調製するには、凍結乾燥ペプチド粉末1ミリグラムを20%アセトニトリルと10ミリモルHEPESの混合物に1.5ミリリットルの微量遠心チューブで溶解し、アセンブリ溶液をボルテックスしてサンプルを室温で組み立てます。ペプチド集合体が成熟に達したら、減衰した全反射ダイヤモンド結晶上の薄膜として8〜10マイクロリットルの集合溶液を乾燥させ、乾燥膜が形成されるにつれて1640〜1631センチメートルの大きくて広い水ピークが消失するのを監視します。1500〜1800逆センチメートルのバックグラウンドスペクトルと赤外線スペクトルを、2逆センチメートルの解像度で平均50回のスキャンで取得し、各サンプルスキャンの前にバックグラウンドスキャンを差し引きます。ベータシートアセンブリの赤外線シグネチャは、1625〜1635逆センチメートルの鋭いピークとして観察する必要があります。ペプチドサンプルがベータシートに富む超分子構造に成熟したら、透過型電子顕微鏡のカーボングリッドの表面に10マイクロリットルのペプチド集合体溶液をロードし、集合体をグリッドの表面に1〜2分間吸着させます。グリッドの端に濾紙をタッチして余分なサンプルを取り除き、新たに調製した2%酢酸ウラニルの汚れをグリッド表面に10マイクロリットル加えて2〜3分間インキュベーションした後、濾紙で余分な汚れを取り除き、グリッドを真空デシケーターに一晩置いてから、透過型電子顕微鏡による翌日のイメージングを行います。ジチオラン前駆体分子の最初のワンステップ合成を除けば、残りの1,2-ジチオラン修飾ペプチド合成は固体支持体上で行われます。3-ブロモ-2-プロピオン酸のジチオラン前駆体である3-2-プロパン酸への変換は、プロトンと炭素-13の核磁気共鳴によって確認され、その後、樹脂上にまだ残っているペプチドの遊離N末端アミンに結合します。脱保護後、粗ペプチドを逆相HPLCで精製し、MALDI-TOF質量分析法で製品の質量を確認します。フーリエ変換赤外分光法および円二色性分光法を使用して、精製された1,2-ジチオランペプチドの成熟アミロイド繊維への自己組織化を監視し、それらの拡張ベータシートコンフォメーションを特徴付けることができます。その後、透過型電子顕微鏡で繊維を画像化することができます。これらの方法は、レジン上に残っている任意のペプチド配列のN末端を修飾するために使用できますが、ペプチド自己組織化条件は各ペプチドに対して最適化する必要があることを覚えておくことが重要です。これらの技術は、自己組織化ペプチドに1,2-ジチオラン基を付加することで、生体材料分野の研究者が超分子表面反応性を探求することを可能にします。

synthesis-characterization-12-dithiolane-modified-self-assembling

Research

JoVE Journal

Chemistry

化学

基本的な機器と市販の試薬を含む単純で一般的なマニュアルペプトイド合成法は、簡単に多くのラボで合成されるペプトイドを可能にする、概説されています。両親媒性ペプトイドの36merの合成、精製および特徴は、同様に高秩序のナノシートに、その自己組織化として、記述されています。...

高秩序のナノシートにペプトイドポリマーおよびそれらの自己組織化の固相Submonomer合成

このビデオでは、フーリエ変換赤外分光法を使用して、アミロイドペプチドの自己組織化をベータシートに富む超分子構造に示します。屈折率の高い結晶に赤外線ビームを通過させ、結晶とサンプルの界面を横切るエネルギー吸収を記録します。サンプルタンパク質の二次構造は、赤外スペクトルの特定の領域で特徴的な吸収ピークを分析することによって同定され、超分子アセンブリの形成の同定に役立ちます。...

ペプチド自己組織化を研究するためのフーリエ変換赤外分光法

本論文では、自己組織化の自発的プロセスによる高度に秩序ペプチドベースの構造の形成を説明しています。この方法は、市販のペプチドおよび共通実験装置を利用しています。この技術は、ペプチドの多種多様に適用することができる、新たなペプチドベースアセンブリの発見につながることができる。...

短いペプチドの自己組織化によって順序付け生体分子構造の形成

光誘起チオール-エン ・ チオール-イン hydrothiolation を使用して硫化テザー ヘリカル...

チオエーテル/ビニール硫化テザー ヘリカル ペプチドによる光誘起チオール-エン/イン Hydrothiolation を構築します。

このプロトコルでは、リジン ・ チロシン ・ フェニルアラニン (KYF) トリペプチドで安定したオレイン酸 acids-platinum(II) 共役のナノエマルションを合成するための効率的な方法について説明します。穏やかな条件合成を介しての自己集合、KYF と共役ナノエマルション...

オレイン酸のトリペプチド安定ナノエマルション

情報コード化されたペプトイドオリゴマーの合成と、アミンとアルデヒドを動的な共有反応物の対とルイス酸性希土類として使用して、これらのペプトイドの分子ラダーへの配列指向の自己集合のためのプロトコルが提示される金属トリフラはマルチロール試薬として...

情報を持つペプトイドの合成と、その配列指向動的共有自己集合

このプロトコルは、システインとメチオニンの間のビスアルキル化と、プロパルギルスルホニウム中心によって引き起こされる簡単なチオール-イン反応 を介した...

オンテザースルホニウム中心を用いた環状ペプチドの構築

このプロトコールは、免疫染色による細胞接着、オルガノイド形態、および遺伝子発現のための生体機能的自己組織化ペプチドを評価することを目的としています。結腸直腸癌細胞株を使用して、集中的なテストのためのオルガノイドを取得する費用対効果の高い方法を提供します。...

超短自己組織化ペプチドマトリックス中のSW1222細胞株由来結腸直腸癌オルガノイドの作製とキャラクタリゼーション

このプロトコールでは、環境条件を利用してペプチドのヒドロゲルへの自己組織化を誘発する3つの迅速でシンプルな調製方法を紹介します。さらに、ペプチドハイドロゲルの特性評価についても説明し、機械的に安定したペプチドハイドロゲルがこれらの単純な条件下で形成できることを示しています。...

機械的に安定な自己組織化ペプチドハイドロゲルの調製

ペプチドの第三級アミド（PTAは）が含まれるが、ペプチド、ペプトイドおよびN-メチル化ペプチドに限定されないが、ペプチドミメティックのスーパーファミリーである。ここでのPTAの1ビーズ1化合物ライブラリーを合成するためにスプリット·アンド·プールとサブモノマー戦略の両方を組み合わせた合成法を記載している。...

ペプチド第三級アミドライブラリのスプリット·アンド·プールの合成とキャラクタリゼーション

学ぶ 1,2-ジチオラン修飾ペプチドの固相合成法と自己組織化超分子構造の特性評価技術。レジン上での効率的なカップリングと脱保護、単一精製ステップによる高収率合成プロトコルを解説します。

1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド

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