ダイヤモンド光源での固定ターゲットシリアルデータ収集

シリアルシンクロトロン結晶学(SSX)は、MXの比較的新しく急速に発展している領域です。それは低用量および室温実験に非常によく適していますが、おそらく最も重要なのは、ダイナミクスに従うのに本当に適しています。これにより、実際のタンパク質のストップモーションムービーを作成できます。I24では、SSXの複数のモードが利用可能です。

このプロトコルは固定ターゲット SSX に焦点を当てており、限られた量のサンプルを使用して広範囲のシリアル実験が可能です。シリコンチップは、シリコンチップをロードしてクリーニングするときに、それらに慣れていない場合に損傷を受ける可能性があります。また、チップアライメントプロトコルは多くの結晶学者にはまったく新しく、データ処理は標準的な回転データとは若干異なります。

チップホルダーを準備するには、ポリエステル箔の2枚を約6〜6センチメートルの正方形に切り、2つのベースプレートの上にシートを置きます。金属シールリングを使用して、シートを所定の位置に固定し、余分なホイルを慎重に引っ張って折り目を取り除きます。次に、分析する結晶の大きさに対して適切なサイズの開口を有するシリコンチップを選択する。

グローは、15ミリアンペア電流で0.39ミリバールで25秒間チップを排出します。ピンセットを使用して、チップローディングステージにシリコンチップを配置し、上げられたバーを下に向けます。次いで、ピペットを用いて、チップの平坦側に200マイクロクリスタルスラリーを塗布し、チップのすべての都市ブロックをカバーするためにスラリーを広げる。

チップが破損している場合は、ポリエステル箔の小片で任意の穴をカバーし、真空を均一に適用できることを確認します。その後、チップを介して余分な液体のすべてを吸引するために穏やかな真空を適用します。チップローディング段階からチップを取り出し、余分な液体を取り除くために慎重にフィルターペーパーでチップの下側をブロットします。

チップホルダーの大きな半分に、チップホルダーの大きな半分に、取り付けたチップをガイドマークの間に置き、平らな側を下に置きます。チップホルダーの小さい半分をチップの上に置き、それを密封します。チップホルダーの2つの半分は所定の位置にスナップする必要があります。

次に、六進ボルトを使用してチップを固定します。チップを整列させるには、チップホルダーを30度の角度で持ち、マウントに近づいてください。次に、キネマティックマウントを使用して、ビームラインのXYZステージにロードされたチップを配置します。

磁石が接触したら、チップホルダーが流れに平行に回転し、所定の位置をクリックします。チップを配置したら、ビームラインオン軸表示システムとチップアライメントグラフィカルユーザインターフェイスを使用して、チップの左上の受託者を見つけます。X、Y、Z の受託者 0 を中心に、フォーカスの出入りを行って Z を整列させ、上下に Y を揃え、左右に X を揃えます。

次に「ブロックチェック」をクリックして、XYZステージを各都市ブロックの最初の井戸に移動します。X線のクロスヘアが開口部と並ぶ場合、チップは整列されます。このグラフィック表示では、DIALS のスポット検索結果を更新するヒット率プロットを観察できます。

ヒットがクリックされると、対応する回折画像がDIALSイメージビューアに表示されます。この表では、訪問中にデータが収集される際にリアルタイムで更新される現在のインデックス作成と統合率を視覚化できます。単位細胞パラメータの可視化は、多形を明らかにすることができる。

また、有用なパラメータの2次元プロットを作成して、荷重や脱水効果によって生じる変動を明らかにすることもできます。ステレオグラフィック投影は、負荷プロトコルにフィードバックできる優先方向の有無を明らかにすることができます。例えば、この投影では、リソチーム結晶でチップをオーバーロードする効果が観察される。

チップをロードするときは、ピペットをゆっくりと指で使用してチップの上にピペットを置きます。チップに触れたり、シリコンの穴を誤って刺したりするのを防ぎます。データを処理する場合は、自動化されたパイプラインを利用できるようにします。

これは、実験がどのように進行しているかについて、そして何かを変える必要がある場合に、良いアイデアを与えるでしょう。この方法は、大量に結晶化することができる任意のタンパク質系に適用することができる。そして、反応は、光X線または急速な混合によって引き起こされ得る。

一連の構造に関する動的研究は、タンパク質がどのように機能するかについての洞察を提供することができます。