呈色反応に基づく細菌の運動性の可視化

病原性には運動性が重要であるため、細菌の運動性の検出は重要です。ここで説明するプロトコルは、TTCと生菌の細胞内デヒドロゲナーゼとの色反応に基づいているため、細菌の運動性を検出するための信頼性の高い方法です。細菌の運動性を検出するためのTTC半固体寒天法は、シンプルで操作が簡単で、大型で高価な器具を必要としません。

この方法は、臨床微生物学者や研究者が病原菌を調査するために使用できます。この手順を実演するのは、私の研究室の上級実験家であるXiyi Zhuangです。まず、10グラムのトリプトース、15グラムの塩化ナトリウム、4グラムの寒天を適切な量の蒸留水に加えて、従来の半固体培地を準備します。

pH を 7.2 に調整し、最終容量を 1 、 000 ミリリットルにします。培地を摂氏121度で20分間オートクレーブし、培地を10ミリリットルの試験管に3cmの高さまで分注します。TTC培地を調製するには、オートクレーブ処理した従来の培地を摂氏50度に冷却し、100ミリリットルの培地に5ミリリットルの滅菌1%TTC溶液を加えます。

培地を10ミリリットルの試験管に3cmの高さまで混合して分注します。寒天プレートから細菌の単一コロニーを採取し、接種針を使用して穿刺することにより、それらを両方の半固体培地に接種します。非モーダル株をネガティブコントロールとして、モーダル株をポジティブコントロールとして含めることを忘れないでください。

寒天濃度が細菌の運動性に及ぼす影響を観察するには、さまざまな寒天濃度を含む半固体培地を調製し、穿刺して接種します。チューブを摂氏37度でインキュベートし、インキュベーションの24〜48時間後に結果を観察します。穿刺線のみが赤い場合は、細菌を非モーダルとして特徴付けます。

赤色が穿刺線に沿って外側に広がる場合は、細菌をモーダルとして特徴付けます。細菌の運動性を、従来の半固体培地とTTC半固体培地上のさまざまな菌株で比較し、この表にまとめました。TTC半固体培地で24時間培養した後、黄色ブドウ球菌は接種線に沿って成長を示しました。

一方、大腸菌は、接種線の周りのすべての方向に成長を示しました。大腸菌の最も高い運動性は、培地がほぼ完全に赤に変わった0.3%寒天で調製されたTTC半固体培地で観察されました。これに対し、0.5%寒天では赤色拡散の面積が減少し、寒天濃度が0.8%に増加するにつれて拡散が延長されたため、針を用いて接種する前にpHを7.2に調整し、オートクレーブ培地を50°Cまで冷却することが重要である。

細菌は、TTCを含む半固体培地に穿刺して接種する必要があります。これは、細菌の運動性を検出するための直接的な方法です。また、電子顕微鏡により間接的に運動性を検出することも可能です。