マイクロ流体装置を用いた細菌の運動性評価

マイクロ流体装置を考えてみましょう。入口管が多孔質チャネルでできたマイクロ流体チャンバーに接続され、細菌の移動を目的とします。

チャンバーは観測チャンバーに接続されており、観測チャンバーは出口チューブを通じてシリンジポンプに接続されています。

空気の泡を除去するために、チャンバーにバッファーを浸してください。

装置を顕微鏡ステージに置き、対物レンズを観察室の上に配置します。

顕微鏡の設定を調整して、個々の細菌細胞をはっきりと観察してください。

インレットチューブを蛍光標識菌の懸液に入れます。

流れを始めて細菌をマイクロ流体チャンバーに引き込み、多孔質のチャネルを通って観測チャンバーに到達します。

観察室を定期的にイメージしてください。

時間とともに多孔質マトリックスを通過する細菌の割合を示すブレイクスルーカーブを作成します。

真空からマイクロ流体を取り外し、顕微鏡ステージに置きます。シリンジポンプを使って運動性緩衝剤で飽和させてください。

ブライトフィールド顕微鏡や位相差を用いて、倍率を調整して個々の細菌細胞を可視化し、観測チャンネルの中心に焦点を合わせます。光路設定を蛍光顕微鏡に切り替えてください。ピントをオフセットとカメラの露光時間で調整し、個々の細菌細胞を分解します。この場合は100ミリ秒です。

次に、吸気チューブを細菌懸濁液を含む2ミリリットルの管に挿入します。ポンプの方向を逆にし、1分あたり1マイクロリットルの流量でサスペンションを引き出し始めます。

観測チャンネル全体の断面をスキャンし、1分ごとに画像を記録する。