Utilizing Thermal Shift Assay to Probe Substrate Binding to Selenoprotein O

Abner Gonzalez; Anju Sreelatha

doi:10.3791/67139

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Utilizing Thermal Shift Assay to Probe Substrate Binding to Selenoprotein O

サーマルシフトアッセイによるセレノプロテインOへの基質結合のプローブ

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03:09 min

August 9, 2024

DOI: 10.3791/67139-v

Abner Gonzalez¹, Anju Sreelatha^1,2

¹Department of Physiology,University of Texas Southwestern Medical Center, ²Charles and Jane Pak Center for Mineral Metabolism and Clinical Research,University of Texas Southwestern Medical Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、低分子の目的のタンパク質への結合を調査するために使用されるハイスループットの蛍光ベースの手法であるサーマルシフトアッセイを紹介します。

私たちは、未知の機能を持つタンパク質の生化学的活性を研究することを目指しています。補因子結合は、一部のタンパク質の活性に不可欠であるだけでなく、それらの熱安定性を変化させる可能性もあります。この現象の実用化の1つは、タンパク質の融解温度によって測定される熱安定性の変化を利用して、リガンドの結合を分析することです。

サーマルシフトアッセイは、タンパク質と潜在的な補因子または薬物との相互作用を調査し、結晶構造解析の安定化条件を特定するための汎用性の高いツールです。他のスクリーニング法と比較した場合の利点は、比較的簡単なセットアップと、96ウェルプレートまたは384ウェルプレートによる高スループットです。セレノプロテインO(SelO)は、進化的に保存されたシュードキナーゼで、アデノシン一リン酸をATPからタンパク質基質に転移し、AMPylationとして知られる翻訳後修飾を行います。

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