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DOI: 10.3791/68887-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates how yeast (S. cerevisiae) cells manage chromosome segregation during mitosis, utilizing synchronized cell cycles to observe cellular dynamics. By employing alpha-factor arrest in BAR1 mutants, researchers can achieve a precise G1 arrest to monitor changes in protein localization and activity throughout the cell cycle.
このプロトコルは、酵母細胞周期停止とオプションの放出の2つの方法を詳述し、 S. cerevisiaeの細胞周期依存性プロセスを研究するための蛍光顕微鏡の使用について詳しく説明します。
私たちは、分裂する細胞が有糸分裂中に染色体を忠実に伝達する方法を研究し、正確な染色体分離を保証する分子機械やメカニズムに焦点を当てています。細胞を同期させて、細胞周期に伴う分子プロセスの研究を行います。これらの方法がなければ、重要な変化は同期していない細胞集団の中で隠れてしまいます。
他の同期法と比較して、BAR1変異体におけるアルファクター停止はよりクリーンで可逆的なG1停止を提供し、酵母培養全体が周期を同期的に進行している様子を追跡することを可能にします。私たちの研究は、細胞周期を通じて動的なタンパク質の局在化と活性変化を明らかにし、染色体分離やスピンドル維持といった主要な有糸分裂過程に光を当てています。まず、酵母を25ミリリットルのYPAD培地に接種し、一晩培養して600ナノメートルの0.5から2.0の光学密度に到達させます。
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