Name: 出芽酵母における細胞周期依存過程の操作と解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: 学ぶ出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeの細胞周期同期化法。αファクター阻害によるG1期停止と蛍光顕微鏡を用いて、染色体分配と紡錘体動態を解析する手法を解説します。

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<table><tbody><tr><td>。-因子</td><td>ユタ大学コア合成施設</td><td></td><td>シーケンス: WHWLQLKPGQPMY</td></tr><tr><td>1.5 mL エッペンドルフ管</td><td>アクシゲン</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10mM dNTPミックス</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>R0193</td><td></td></tr><tr><td>50 mL円錐形チューブ</td><td>グライナー・バイオ・ワン</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>5倍のPhusion HF反応バッファー</td><td>ニューイングランド・バイオラボ</td><td>B0518S</td><td></td></tr><tr><td>酢酸、氷河期</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>BP2401C-212</td><td></td></tr><tr><td>アデニン・ヘミ硫酸塩</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A9126-100G</td><td></td></tr><tr><td>寒天、顆粒状</td><td>Apex Chemicals and Reagents</td><td>20-275</td><td></td></tr><tr><td>アガロース</td><td>エイペックス・バイオリサーチ・プロダクツ</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>オートクレーブ Amsco センチュリー蒸気滅菌器</td><td>ステリス</td><td>SV-1262</td><td></td></tr><tr><td>オートクレーブ処理されたDI水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>オーキシン</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>Cat#I3750-5G-A;CAS: 87-51-4</td><td></td></tr><tr><td>カーギルレーザーリキッド</td><td>カーギル研究所</td><td>20130</td><td></td></tr><tr><td>D-ソルビトール</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>S1876-500G</td><td></td></tr><tr><td>DAPI(40 、6-ジアミジノ-2-フェニルリンドール、ジヒドロ塩)</td><td>分子プローブ</td><td>Cat#D1306</td><td></td></tr><tr><td>サーモン精巣からのデオキシリボ核酸ナトリウム塩</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>D1626</td><td></td></tr><tr><td>葡萄糖</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>D16-10</td><td></td></tr><tr><td>ジナトリウムエチレンジアミン・テトラアセテート</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>S811-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>20688</td><td></td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ2 と 2.14.0/1.54f の比較</td><td>イメージJ2</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr><tr><td>固定速度渦ミキサー</td><td>VWR</td><td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&gQT=2</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡 DV Ultra</td><td>ライカ</td><td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&utm_content=text_ad&utm_term=fluorescence%20microscopes&gad_source=1&gad_campaignid=170130111&gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td><td>シリアル#:NV01063。サポート終了</td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>カテゴリー#F79-500</td><td></td></tr><tr><td>ゲル装置</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>オウル・イージーキャスト B1</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler DNAラダーミックス</td><td>発酵</td><td>SM0333</td><td></td></tr><tr><td>ガラスビーズ</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>11312A</td><td></td></tr><tr><td>ガラススライド</td><td>VWR</td><td>48300-026</td><td></td></tr><tr><td>イノバ2300プラットフォームシェイカー</td><td>ニューブランズウィック</td><td>NB-2300</td><td></td></tr><tr><td>キムワイプズ</td><td>キムテック</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mLチューブ用の実験室遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>2525</td><td></td></tr><tr><td>50 mLチューブ用の実験室遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5804</td><td></td></tr><tr><td>酢酸リチウム二水和物</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>L4158-250G</td><td></td></tr><tr><td>マスターサイクラーネクサスX2</td><td>エッペンドルフ</td><td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td><td></td></tr><tr><td>マイクロピペットp2、p20、p200、p1000および対応するチップ</td><td>レイニン</td><td>L-2XLS+R、L-20XLS-R、L-200XLS-R、L-1000XLS-R</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡カバーガラス</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12541014</td><td></td></tr><tr><td>ノコダゾール</td><td>カルバイオケム</td><td>猫#487928;CAS: 31430-18-9;ロット#B35705</td><td></td></tr><tr><td>オレンジG</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>O7252</td><td></td></tr><tr><td>ペッグ</td><td>ハンプトン・リサーチ</td><td>HR2-591</td><td></td></tr><tr><td>ペプトン顆粒化&nbsp;</td><td>フィッシャー・バイオリエージェント</td><td>BP9725-5</td><td></td></tr><tr><td>フュージョンHF DNAポリメラーゼ</td><td>ニューイングランド・バイオラボ</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>ピペトX</td><td>レイニン</td><td>PX-100R</td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム、二塩基</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>424195000</td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム、単塩基</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>424200025</td><td></td></tr><tr><td>電源</td><td>バイオ・ラッド</td><td>23786</td><td></td></tr><tr><td>開始 取得 Ultra 1.2.2</td><td>softWoRx Cytiva</td><td>DVウルトラで取得</td><td></td></tr><tr><td>トリス・ベース</td><td>フィッシャー・バイオリエージェント</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>トライトン X-100</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>チューブローテーター</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>水浴</td><td>VWR</td><td>WBE10A11B</td><td></td></tr><tr><td>水、超純粋</td><td>エイペックス・バイオリサーチ・プロダクツ</td><td>18-194</td><td></td></tr><tr><td>粒状酵母抽出物</td><td>フィッシャー・バイオリエージェント</td><td>BP9727-5</td><td></td></tr></tbody></table>

出芽酵母における細胞周期依存過程の操作と解析

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

manipulation-analysis-cell-cycle-dependent-processes-budding

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

遺伝子欠失と蛋白質の過剰発現は、タンパク質の機能を研究するための一般的な方法です。この記事では、我々は、人口および単一細胞レベルでのタンパク質の濃度の関数として表現型の開発の分析のためのプロトコルを記述する...

出芽酵母のタンパク質濃度の関数としての形態学的表現型の開発の分析

細胞集団の細胞周期の位置を決定する、または信号が増殖にどのような影響を与えるか理解する、容易にこのプロトコルを使用してフローサイトメトリーによって測定することができる。我々は、細胞を染色し、細胞周期内の位置を定量化するための簡単​​な実験的なアプローチを報告する。...

哺乳動物細胞における細胞周期の位置の解析

我々は、単一セルの時系列データを抽出するために蛍光成長酵母細胞の顕微鏡ムービー、GUIベースのソフトウェアパッケージを取得する単純なプロトコルを提示する。分析では、目視検査と追跡対象データの手動キュレーションと統合され自動化された系統と分裂時間の割り当てが含まれています。...

出芽酵母の蛍光タイムラプス作品を取得し、移植片を使用したシングルセルダイナミクスの解析

分裂酵母は、 分裂酵母は、細胞質分裂を研究するための優れたモデル系、細胞分裂の最終段階です。ここでは、ライブ分裂酵母細胞内の異なる細胞質分裂のイベントを分析するために、顕微鏡のアプローチを説明します。...

分裂酵母における細胞質分裂のイベントの時空間解析

出芽酵母は、その強力な遺伝学とその微小管細胞骨格のシンプルさにin vivoでの微小管ダイナミクスを研究するための有利なモデルです。以下のプロトコルを変換し、培養酵母細胞、共焦点顕微鏡画像を取得し、かつ定量的に酵母生細胞における微小管ダイナミクスを分析する方法について説明します。...

出芽酵母における高解像度画像と個人アストラル微小管動態の解析

Inherent Dynamics Visualizer、遺伝子調節ネットワーク推論パイプラインからの出力を評価および視覚化するためのインタラクティブなアプリケーション

タイムラプス顕微鏡は、出芽酵母の減数分裂を研究するための貴重なツールです。このプロトコルでは、細胞周期同期、タイムラプス顕微鏡、および標的タンパク質の条件付き枯渇を組み合わせて、減数分裂染色体分配中の特定のタンパク質の機能を研究する方法を実証する方法について説明しています。...

S. cerevisiaeの減数分裂を研究するためのタイムラプス顕微鏡とタンパク質のステージ特異的核枯渇の使用

同期時系列実験を分析する際の課題の1つは、実験によって同期からの回復の長さと細胞周期期間が異なることが多いことです。したがって、異なる実験からの測定値をまとめて分析したり、容易に比較したりすることはできません。ここでは、フェーズ固有の比較を可能にするために実験を調整する方法について説明します。...

実験間比較のための細胞周期同期喪失モデルを用いた同期時系列データのアライメント

この記事では、酵母の母細胞の複製寿命を測定するための一般的なプロトコルを提示する。...

出芽酵母の複製寿命の測定

分裂酵母の定量的なライブセル蛍光-顕微鏡解析

学ぶ出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeの細胞周期同期化法。αファクター阻害によるG1期停止と蛍光顕微鏡を用いて、染色体分配と紡錘体動態を解析する手法を解説します。

出芽酵母における細胞周期依存過程の操作と解析

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