Cell-ACDCを用いた多次元顕微鏡データの解析

細胞分裂サイクル解析用のソフトウェア「Cell-ACDC」を開発し、迅速な生物学的発見のボトルネックを克服するため、多次元顕微鏡データの解析を改善しています。現在のAIモデルはアクセスが難しいことが多いです。さらに、高品質な結果を得るためには視覚化と手動の補正も必要です。

しかし、適切な道具がなければこれらの作業は非常に面倒に感じることがあります。まずは、ビジュアライズと修正モジュールのメインウィンドウで「GUIを起動」をクリックしてください。新しいウィンドウのツールバーにあるフォルダアイコンをクリックし、データを含むフォルダを選択します。

次に「フォルダー選択」を押して選択を確認してください。ドロップダウンメニューで「チャンネル位相差の事前処理済み」を選択し、OKを押して確認してください。セグメントマスク名を選択し、前ステップで作成したセグメントファイルを読み込むために「Load選択済み」をクリックします。

画像のプロパティは「OK」をクリックして読み込み済みの位置を確認してください。促されたら「いいえ」を選択して追加の蛍光データの読み込みを防ぎます。モードセレクターを使ってセグメンテーションモードとトラッキングモードを選択してください。

メニューバーで「トラッキング」に進み、「リアルタイムトラッキングアルゴリズムの選択」を選択し、生物に基づいて希望するリアルタイムトラッカーを選択します。左右の矢印キーを使ってフレーム間を移動してください。フレーム10に移動してください。

Sキーを押して手動芽分離ツールを起動し、右クリックでセル1のセグメントマスクを自動的に分割します。さて、フレーム14に移動しましょう。Bキーを押してブラシツールを起動し、左クリックで芽の欠けているセグメントマスクを描画します。

利用可能なツールを使ってセグメントやトラッキングの誤りを修正しながら、次のフレームを進めてください。少なくとも42フレームまでは修正してください。モードセレクターを使って細胞周期解析を起動してください。

表示されたら「はい」を選択してフレーム1に進みます。左右の矢印キーを使ってフレーム間を移動してください。促されたときに「OK」をクリックしてセルサイクル注釈表の初期化を受け入れ、フレーム41へ移動します。

セル1またはその芽を右クリックすると、接続を分離し、セル分裂イベントに注釈を付けます。関連するすべてのフレームを引き続き表示し、利用可能なツールを使って自動割り当ての誤りを修正してください。芽を母に割り当てるには、Aボタンを押して割り当てられた芽を起動します。右クリックを押し続け、対応する母細胞までドラッグしてからマウスボタンを離します。

細胞周期の注釈を再初期化するには、ツールバーから適切なオプションを選択してください。母芽の結合を断ち切ったり再結合したりするには、どの道具も選ばないことを確認しましょう。既存の母芽ペアを右クリックして関連付けを断ち切り、もう一度右クリックして接続を再確立します。

モードセレクターを使って通常のディビジョン系譜ツリーを起動します。表示されたら「はい」を選択してフレーム1に移動し、左右の矢印キーでフレーム間を移動します。編集ツールバーのツールを使って自動割り当ての誤りを修正してください。

促されたら「Propagate」をクリックして変更を適用してください。新しい細胞IDに母親を割り当てるには、Fボタンを押して新しい細胞IDの「母親検索」ツールを有効にしてください。新しい細胞を右クリックすると、候補母親を順に切り替えます。腫瘍球体の核分割は核体積の広範な分布を示し、多くの物体は小さな体積を示し、少数は非常に大きな体積を示すものも多い。

腫瘍オルガノイドの3Dビューでは、多数のセグメント化された核とラベル付けされた識別子が示され、zスライスには各核に適用される赤い断節輪郭が示されました。出芽酵母では、H2Bタンパク質の量は芽生え時に急激に増加し、核分裂前には停滞していました。酵母データセットにおける核分裂の時点で、核の数は突然増加しました。

マウス胚性幹細胞では、細胞面積が最大に達するまで徐々に増加し、その後細胞分裂時に減少し、その後娘細胞内で再び増加し始めました。そのため、Cell-ACDCはバイオイメージ解析のためにAIモデルに簡単にアクセスできるオープンソースソフトウェアフレームワークであり、顕微鏡データの高い共有性を保証します。Cell-ACDCの重要な側面は、コミュニティが標準化されたデータ構造を持つ既存のワークフローに新しい手法を簡単に統合できることです。

Cell-ACDCの補正データを活用して最先端手法を微調整することで、完全自動化されたバイオイメージ解析の基盤を築くことができます。