Introduction
Klinisk relevante, mock katarakt kirurgi, ble ex vivo epitelial sårheling modellen beskrevet her er utviklet for å tilveiebringe et verktøy for å undersøke mekanismene som regulerer reparasjon av epitelvev som respons på skade. Viktige funksjoner som ble rettet for å skape denne modellen inngår en) som gir vilkår som tett replikert in vivo respons på såret i en kultur setting, 2) lette å modulere de regulatoriske elementer av reparasjon, og 3) evne til bilde reparasjonsprosessen, i sin helhet, i sanntid. Utfordringen var derfor å skape en kultur modell hvor det var mulig å studere og manipulere, epitelial reparasjon sår i cellens opprinnelige mikromiljø. Tilgjengeligheten av dette såret-reparasjon modellen åpner nye muligheter for å identifisere de endogene signal signaler fra matrix proteiner, cytokiner og chemokiner som regulerer reparasjonsprosessen. I tillegg er modellen ideell for å undersøke hvordan enN epitelet er i stand til å bevege seg som et kollektiv ark for å re-epithelialize sårområdet 2,3, og for bestemmelse av linjen av mesenchymale celler leder ved viklet kant som fungerer i å styre den kollektive migrering av skadde epitel 4. Denne modellen gir også en plattform som brukes til å identifisere legemiddelselskap som kan fremme effektiv sårtilheling og hindre avvikende sår reparasjon 5.
Det finnes allerede en rekke tilgjengelige såret-reparasjon modeller, både i kultur og in vivo, som har gitt det meste av det som er kjent om såret reparasjonsprosessen i dag. I dyremodeller skade, så som hornhinnen 6-12 og 13-17 hud, er det anledning til å studere responsen av vevet til såret i sammenheng med alle reparasjonsmediatorer som kan være involvert i prosessen, blant annet bidrag fra blodkar og nervesystemet. Det er imidlertid begrensninger manipulere experimentale tilstander in vivo, og det er ennå ikke mulig å foreta bildediagnostikk av reparasjonsrespons in vivo, kontinuerlig over tid. I motsetning til de fleste in vitro-sår-reparasjon kultur modeller, som for eksempel bunnen av såret, kan lett manipuleres og fulgt over tid, men mangler den miljøsammenheng studere sårheling i in vivo vev. Mens ex vivo-modeller har den fordelen av å studere skadereparasjonsprosessen kontinuerlig over tid i forbindelse med cellens mikro kombinert med evnen til å modulere den molekylære regulatorer av reparasjons som helst punkt i prosessen, er det få modeller som passer disse parametere.
Her beskrives en fremgangsmåte for å generere svært reproduserbare ex vivo epitelial sårheling kulturer som reproduserer en epitelvev respons på en fysiologisk såret. Bruke kylling embryo objektivet som en vev kilde, en ex vivo Mock katarakt operasjonen er utført. Objektivet er et ideelt vev å bruke for disse studiene, siden det er selvforsynt innen en tykk basalmembran kapsel, avascular, ikke innervert, og fri for eventuelle tilknyttede stroma 18,19. I den humane sykdommen, løser katarakt kirurgi synstap på grunn av opasifisering av linsen, og innebærer fjerning av linsen fibercellemassen, som omfatter hoveddelen av linsen. Etter kataraktkirurgi visjon er gjenopprettet gjennom innsetting av en kunstig intraokulær linse. Katarakt kirurgi prosedyre, ved fjerning av fiberceller, induserer en skade respons i den tilstøtende linse epitel, som reagerer ved å re-epitelialisering av det bakre området av linsekapsel som hadde blitt okkupert av fibercellene. I katarakt kirurgi, som i de fleste sår reparasjon svar, er det noen ganger oppstår en avvik fibrotisk utfallet til sårtilheling respons, forbundet med fremveksten av myofibroblasts, som i objektivet er kjent som Bakre Capsule opasifikasjon 20-22. For å generere katarakt kirurgi sårtilheling modell, er en katarakt kirurgi prosedyre etterlignet i linsene fjernet fra kylling embryo øyet å produsere en fysiologisk skade. Mikro fjerning av linsefiber celler resulterer i en meget konsistent sirkulært sårområdet omgitt av linsen epitelceller. Denne cellepopulasjonen forblir fast festet til linsebasalmembran kapselen og blir skadet av den kirurgiske prosedyren. Epitelceller migrere på ribbet området av endogen basalmembran å helbrede såret, ledet av en befolkning på vimentin rike mesenchymalceller kjent i reparasjonsprosessen som leder celler 1. Med denne modellen responsen av et epitel for skade lett kan visualiseres og følges med tiden i forbindelse med cellens mikromiljø. Cellene er lett tilgjengelige for modifikasjoner av ekspresjonen eller aktivering av molekyler som forventes å spille en rolle i sårheling. En kraftig funksjon i ther modellen er evnen til å isolere og studere migrasjons-spesifikke forandringer i rammeverket av sårheling. Evnen til å fremstille store mengder av alderen passet ex vivo sårheling kulturer i studiene er en annen fordel med denne modellen. Dermed gir denne modellen systemet en unik mulighet til å erte hverandre mekanismer for sårheling og test therapeutics for deres effekt på sårtilheling prosessen. Den ex vivo uekte kataraktkirurgi modellen antas å ha bred anvendelse, noe som gir en kritisk ressurs for å studere skademekanismer reparasjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende protokoll i samsvar med Thomas Jefferson Universitetet Institutional Animal Care og bruk komité retningslinjer og med ARVO Statement for bruk av dyr i Vision Research.
1. Oppsett og klargjøring av objektiver for Ex Vivo Wound Culture
- Plasser tre 100 mm petriskåler i et sterilt, laminær hette. Fyll to av petriskåler halvveis med Tris / dekstrose-buffer (TD-buffer; 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 0,7 mM Na 2 PO 4, 5 mM D-glukose, 8,25 mM Tris Base, pH til 7,4 med HCl) ved romtemperatur , forlater den tredje tom. Pre-varm kultur media (Media 199 supplert med, 1% L-glutamin og 1% penicillin / streptomycin) til 37 o C.
Merk: Standard sårheling kultur media er serum-free, som oppstår in vivo; Imidlertid kan de sår-reparasjon av kulturene dyrket med hell i definerte medier tilstander som inkluderer serum eller andre faktorer. - Fjern frukt embryonale day 15 hvit leghorn chick egg fra inkubator (holdt på 37,7 ° C med milde rocking)
- Plasser valgt egg i laminær hette og ren utsiden av skallet med 70% etanol fra en vaskeflaske. Gjennomføre alle prosedyrer nedenfor under aseptiske forhold i laminær hette, ved hjelp av sterile løsninger og instrumenter.
- Sprekk egg og plassere innholdet i tomt 100 mm petriskål. Halshogge embryo ved hjelp av standard tang og fine saks. Plasser kylling embryo hodet i en petriskål med TD buffer og riktig kast resten av embryo. Eventuelt holde kyllingembryo hoder i TD buffer for en kort periode, ikke lenger enn 15 min.
- Plasser kylling embryo hodet på en petriskål lokket. Ved hjelp av høy presisjon pinsett, fjerner objektivet sammen med sin festet glasslegemet fra øyet i følgende rekkefølge. Klem bak øyet med tang for å skape en liten åpning i den bakre del av øyet.
- Deretter tar du tak i glasslegemet wed pinsett og forsiktig napp på glasslegemet med en rullende bevegelse, vil glasslegemet med objektivet festet løsner fra øyet. Place linse / glasslegemet i den gjenværende petriskål inneholdende TD buffer. La linsene til å forbli i TD buffer for ikke lenger enn 30 min.
- Flytt linsen til en ny petriskål lokket under et dissekere mikroskop. Fra dette punktet utføre alle trinnene under en dissekere mikroskop. Med høy presisjon pinsett forsiktig børste bort noen strålelegeme (pigmenterte celler) som ble løsnet med objektivet ved hjelp kanten av pinsett, ta forsiktighet for ikke å skade linseklut.
Merk: Fjerne ciliarkropp sikrer at celletyper som ikke er endogene til objektivet ikke er inkludert i såret reparasjon kultur. - Separer linsen fra glasslegemet med høy presisjon tang ved å knipe av glasslegemet fra sin tilknytning til den bakre linsekapsel.
- Ved hjelp av høy presisjon tang overføre objektivet i en liten dråpeav TD-buffer (ca. 200 ul) i en 35 mm vevskulturskål.
2. Utføre Mock Cataract Surgery
- Orientere linsen i dråpe TD buffer i 35 mm fatet med fremre del av linsen vendt opp.
Merk: Den fremre linsen er lett identifiseres ved nærvær av en tett ring i vevet som bemerker grensen mellom den fremre og ekvatoriale region av linsen epitel. I motsetning til dette er det et fravær av markeringer på den bakre linsekapsel i hvilken linsen fiber cellene er festet. - Ved hjelp av to høy presisjon tang lage et lite snitt (ca. 850μm) i midten av den fremre linsekapsel, den tykke basalmembranen som omgir linsepapir, og dens tilhørende fremre linse epitel, ved å gripe vevet med en tang i hver hånd og trekke forsiktig i motsatte retninger.
- Fjern fibercellemassen, som utgjør hoveddelen av linseklut, dislodging det fra sine vedlegg til linsen epitel og rundt linsekapsel ved hydro-eluering (en tilnærming som brukes i klassisk katarakt kirurgi, modellert i figur 1A).
- Fyll en 1 ml sprøyte med en 27,5 G nålespiss med 300 ul TD buffer. Sett nålespissen inn i snitt gjort i fremre linsekapsel, og omtrent halvveis inn i linsen.
- Forsiktig trykke sprøyten injisere TD buffer inn i linsen fibercellemassen. Injisere mellom 50 og 200 pl TD, og aldri mer enn 300 mL. Observer fiber cellemassen løsner seg fra epitel og linsekapsel.
- Ved hjelp av høy presisjon pinsett, fjerner løsnet fiber cellemassen fra linsen gjennom fremre innsnitt området.
Merk: Denne prosedyren forlater bakre linse kjelleren membran kapsel som fiber cellene hadde blitt festet ribbet for celler, og en skadet linsen epitel like ved siden av dette nettstedet.
3. Preparing Wounded Lens for Ex Vivo Kultur
- Flat ut objektivet kapselposen som følger av katarakt kirurgi beskrevet ovenfor på kultur fatet, celle siden opp, ved å gjøre fem kutt i fremre del av kapselposen.
- Skjær vinkelrett på det opprinnelige snitt gjennom området ved ekvator på linsen. Flat ut de resulterende fem "flaps" av linsekapsel med vedlagt epitel på dyrkningsskålen kapsel siden ned, celle siden opp. Legg merke til ex vivo sårede objektivet nå bør ta på seg en stjerne eller flowerlike form (se figur 1B).
- For å sikre kapselen til parabolen, trykker sakte ned med tang på hvert punkt av stjernen. Dette vil gjøre en liten fordypning i de fem mest utenfor tips av eksplantatet og resultere i vedvarende vedlegg til parabolen.
Merk: Det er mulig å skade kapselen under denne prosedyren, og så er det viktig å sikre kapselen til parabolen så nær tips av flaps som mulig, så vel som å gjøre minst mulig festepunkter som mulig (som regel to, maksimalt tre pr klaff). - Fjern TD buffer fra 35mm fatet og erstatte den med 1,5 ml forvarmet media. Dekk 35mm fatet med lokk og plass i inkubatoren (37 ° C, 5% CO 2).
4. Separasjon av Central Migration Zone (CMZ), hvor Re-epithelialization av Wounded området av bakre Capsule Oppstår, fra den opprinnelige Attachment Zone (OAZ) fra Lens epitelceller for Quantitative Analysis.
Merk: Cellene begynner å flytte inn i CMZ regionen umiddelbart respons på skade. Etter dag én i kultur nok celler migrerer over CMZ for molekylær og biokjemisk analyse, etter separasjon av CMZ og OAZ av mikro-disseksjon 23. Denne protokollen innebærer fjerning av en klaff (OAZ) om gangen fra det sårede område av kapselen.
- Observere en Demarkation, godt synlig under disseksjonsmikroskop, mellom OAZ og CMZ (se figur 2A). Ved hjelp av to høy presisjon tang, griper med begge tang ved kanten av OAZ / CMZ linje, en like ved siden av hverandre, på hver side av linjen (se figur 2A, B, pil).
- Med én hånd / en tang på CMZ side fortsette å holde på de sårede kultur, mens med den andre hånden / tang, trekk forsiktig OAZ langs OAZ / CMZ linje. Den CMZ lett løsner fra OAZ langs denne linjen. Fortsett langs denne linje rundt hele kulturen til de to områdene er helt atskilt.
- Studere de separerte OAZ og CMZ fraksjoner for molekylær analyse som RNA-Seq 24 eller biokjemisk analyse som western blot eller co-immunoprecipitation 23,25.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ex vivo modell for å studere laget sårhelingsprosessen i cellenes opprinnelige mikro
For å undersøke mekanismene som er involvert i regulering sårtilheling av en epitel i cellene 'innfødte mikromiljø, ble en klinisk relevant ex vivo mock katarakt kirurgi modell laget. Denne modellen er laget av linseklut som tilbyr mange fordeler på grunn av sine iboende egenskaper: 1) objektivet er et selvstendig organ omgitt av en tykk basalmembran kalt linsekapsel; 2) det er avascular, 3) ikke stimuleres og 4) uten tilhørende stroma. Derfor er reparasjonsprosessen undersøkt begrenset til celler som er medfødt til linsen riktig. For å lage denne modellen, er linser fjernes fra et embryo (E) dag 15 kylling embryo (figur 1A). Et lite snitt i den fremre linsekapsel og de tilhørende linse epitelceller gjennom hvilken linsen fibercellemassen er fjernetav hydro-eluering, en klassisk grå stær prosedyre som skaper en fysiologisk relevant såret (figur 1A). Linsen epitelet, noe som er til stede som en kontinuerlig monolag av celler langs den fremre og ekvatoriale aspekter av linsekapsel som omgir fibercellemassen, sammen med dets endogene populasjon av vimentin-rik mesenchymale stamceller en reparasjonscelle, forblir i linsen under utvinning av fiber-celler (figur 1A). Etter fjerning av fibercellemassen, er fem kutt gjort i den fremre del av det linsekapsel og epitelet flatet cellesiden opp, vender medium. Denne fremgangsmåten gjør at avbildning av responsen av de skadde epitel av ulike mikroskopiske tilnærminger, inkludert time-lapse mikroskopi (Video 1). Disse ekstra kutt i fremre linsekapsel lage en stjerneform eksplantering av de sårede linsen med sirkulære såret skapt ved å fjerne fibercellemassen i CENter av eksplantatet (figur 1B). Post-katarakt kirurgi og utflating av vev, er såret epitel ligger i punktene i stjernen, som er referert til som den opprinnelige Vedlegg Zone (OAZ) (figur 1A, B).
Fjerningen av fibercellemassen fra sitt festested på det bakre linsekapsel skaper en meget reproduserbar sårområdet på basalmembranen, omgitt av den sårede epitel (Figur 1 B, C). Den eksponerte kanten av linsen ekvatoriale epitel, like ved siden av hvor fiber cellene var festet, er den fremre kant av såret. Umiddelbart etter skade, er en subpopulasjon av vimentin-rik mesenchymal reparasjonsceller aktivert og migrerer til såret kanten av epitel 1. Objektivet epitel, med disse mesenchymale reparasjonsceller ved deres forkant, beveger seg raskt mot den cellefrie region av det endogene basement membran kapsel, Central Migration Zone (CMZ), for å begynne å helbrede såret. Linse epitelceller bevege samlet som et ark, inn i CMZ ledet av mesenchymal ledercellene 1, fremspring som strekker seg langs underlaget og direkte sårhelingsprosessen (F igur 1D, Video 1). Sårheling utvikler seg, som dekker et betydelig område av såret (67%) etter en dag i kultur (figur 1C), og er vanligvis fullført i løpet av 3 dager i kultur (figur 1 B, C).
En klar fysisk kan skilles mellom OAZ og CMZ regioner så tidlig som dag 1, som er avgrenset som en krøll eller rynke mellom disse to sonene (Figur 2A, pil). Dette fenomenet gir en retningslinje ved å skille disse områdene på helst under sårtilheling prosessen. Ved hjelp av en fin tippet tang, kan kulturene være mikro-dissekert å Separspiste Oaz og CMZ regioner for å analysere molekylære forskjeller mellom disse forskjellige soner (figur 2B). Dette er en kraftig metode som har blitt brukt for å identifisere migrasjons-spesifikke forandringer i forbindelse med sår-reparasjon. Tidligere ble det funnet at det er en økning i Focal Adhesion Kinase (FAK) aktivering i ex vivo såret kulturer under sårhelingsprosessen 5. FAK har en veletablert rolle i celle migrasjon 26-29. Evnen til å anrike for OAZ vs. CMZ nå gjort det mulig å undersøke hvorvidt denne økningen i FAK aktivering er spesifikk for migrasjon spesifikke CMZ region. For denne undersøkelsen ble OAZ og CMZ regioner adskilt på dag 1 - 3 (i løpet av sårhelingsprosessen) og analysert for biokjemiske forandringer i FAK-aktivering (FAK pY397). Resultatene viste at økningen i FAK aktivisering var knyttet til migrasjonsspesifikke CMZ region (Figur 2C). Denex vivo modell system beskrevet her gir en unik og uvurderlig mulighet der for å undersøke de molekylære programmer involvert i koordineringen såret reparasjonsprosessen.
Figur 1. Opprettelse av en ex vivo-modell for å studere sårhelingsprosessen i cellene fødemikromiljø som reaksjon på en fysiologisk sår. Mock katarakt kirurgi ble utført på E15 kylling linser. Linsen fibercellemasse (hvit) fjernes gjennom et snitt i fremre kapselen ved hydro-eluering. Denne fremgangsmåten etterlater bak epitelceller (grønn) som forblir tett adherende til linsekapsel og en celle-ribbet basalmembran (BM) på hvilken cellene vil migrere til å helbrede såret (A). Fem kutt er gjort i epitel å flate ut og opprette et stjerneformet ex vivo kult ure (B). De gjenværende linse epitelceller som fyller avreise stjernen er referert til som den opprinnelige Vedlegg Zone (OAZ) (A, B). Den ribbet BM hvorpå cellene migrerer er referert til som den sentrale sonen Migration (CMZ) (A, B). Umiddelbart svar til skade, cellene begynner å flytte inn i CMZ regionen på celle-avdekt BM (B). Den åpne sårområdet er kvantifisert over tid i (C). Sårheling er vanligvis ferdig innen D3 i kultur (B, C). I (B, C) betegner T0 tiden av såret, betegner D1-3 Days 1-3. Innenfor CMZ, kan to populasjoner av celler skilles, linse epitelceller og leder mesenchymale celler som lokaliserer seg til såret kant, forløpende fremspring langs underlaget (D). Dette tallet er gjengitt fra Menko et al 23.target = "_ blank"> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Separasjon av Oaz og CMZ regioner for å identifisere migrasjonsspesifikke endringer knyttet til sårheling. Etter dag 1, kan OAZ og CMZ regioner skilles fra hverandre ved en krøll (pil), som kan brukes som en guide for å skille disse sonene (A). På dette krøll, kan fin tippet tang brukes til å gripe kanten av OAZ / CMZ linje. Kulturen kan skilles langs denne linje som tillater isolering av OAZ og CMZ regioner (B). Mikro disseksjon av OAZ og CMZ daglig, fra dag 1 (D1) - dag 3 (D3) ble utført for å bestemme om migrasjons-spesifikke forandringer i FAK-aktivering forekommer i området ved sårheling. Lysater fra hver region ble undersøkt av Western blot analyse for enten FAK aktivering (pFAK Y397) eller total FAK-ekspresjon (C). Mens liten endring i total FAK-nivåer ble observert, ble en økning i FAK aktivering i forbindelse med migrasjonsspesifikke CMZ området (C).
Video 1. sårtilheling i ex vivo mock katarakt kirurgi modellen er etterfulgt av time-lapse mikroskopi fra tid 0 etter skade gjennom til dag 3. sårlukking er sett fra midten av såret området.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride (NaCl) | Fisher Scientific | S271-3 | Use at 140 mM in TD Buffer |
| Potassium Chloride (KCl) | Fisher Scientific | P217-500 | Use at 5 mM in TD Buffer |
| Sodium Phosphate (Na2HPO4) | Sigma | S0876 | Use at 0.7 mM in TD Buffer |
| D-glucose (Dextrose) | Fisher Scientific | D16-500 | Use at 0.5 mM in TD Buffer |
| Tris Base | Fisher Scientific | BP152-1 | Use at 8.25 mM in TD Buffer |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 | Use to pH TD buffer to 7.4 |
| Media 199 | GIBCO | 11150-059 | |
| L-glutamine | Corning/CellGro | 25-005-CI | Use at 1% in Media199 |
| Penicillin/streptomycin | Corning/CellGro | 30-002-CI | Use at 1% in Media199 |
| 100 mm petri dishes | Fisher Scientific | FB0875711Z | |
| Stericup Filter Unit | Millipore | SCGPU01RE | Use to filter sterilize Media |
| Dumont #5 forceps (need 2) | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| 35 mm Cell Culture Dish | Corning | 430165 | |
| 27 G 1 ml SlipTip with precision glide needle | BD | 309623 | |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Standard Forceps | Fine Science Tools | 91100-12 | |
| Other Items Needed: General dissection instruments, fertile white leghorn chicken eggs, check egg incubator (humidified, 37.7°C), laminar flow hood, binocular stereovision dissecting microscope |
References
- Walker, J. L., et al. Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).
- Friedl, P., Gilmour, D. Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer. Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).
- Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration. Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).
- Khalil, A. A., Friedl, P. Determinants of leader cells in collective cell migration. Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).
- Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification. Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).
- Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. Disruption of the basement membrane after corneal debridement. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).
- Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease. Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).
- Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing. Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).
- Stepp, M. A., et al. Wounding the cornea to learn how it heals. Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).
- Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds. Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).
- Sherrard, E. S. The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma. Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).
- Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes. Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).
- Escamez, M. J., et al. An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice. The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).
- Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse. The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).
- Tarin, D., Croft, C. B. Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships. Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).
- Croft, C. B., Tarin, D. Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour. Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).
- Winstanley, E. W. The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog. Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).
- Wormstone, I. M., Wride, M. A. The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).
- Danysh, B. P., Duncan, M. K.
- Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated. Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).
- Walker, T. D. Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review. Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).
- Schmidbauer, J. M., et al.
- Menko, A. S., et al. A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium. Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).
- Chauss, D., et al. Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens. G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).
- Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).
- Sieg, D. J., et al. FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration. Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).
- Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration. Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).
- Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion). IUBMB life. 53, 115-119 (2002).
- Zhao, X., Guan, J. L. Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis. Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).
- Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury. Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).
- Martin, P. Wound healing--aiming for perfect skin regeneration. Science. 276, 75-81 (1997).
- Ferguson, M. W., O'Kane, S. Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).
- Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).
- Nodder, S., Martin, P. Wound healing in embryos: a review. Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).
- Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T.
