Introduction
Den kliniskt relevant, mock kataraktkirurgi, var ex vivo epitelial sårläkning modell som beskrivs här utvecklats för att ge ett verktyg för att undersöka de mekanismer som reglerar reparation av epitelvävnader som svar på en skada. Viktiga funktioner som syftade till att skapa denna modell ingår 1) ger förutsättningar som är nära replikerade svaret in vivo såra i en kultur miljö, 2) underlätta att modulera de regulatoriska elementen av reparation, och 3) förmåga att avbilda reparationsprocessen, i sin helhet, i realtid. Utmaningen var därför att skapa en kultur modell där det var möjligt att studera och manipulera, epitel sårläkning i cellernas infödda mikro. Tillgängligheten av detta sår-reparation modell öppnar nya möjligheter för att identifiera de endogena signal signaler från matrixproteiner, cytokiner och kemokiner som reglerar reparationsprocessen. Dessutom är modellen idealisk för att undersöka hur enn epitel kan röra sig som en kollektiv ark att åter epithelialize sårområdet 2,3, och för att bestämma linjen av mesenkymala ledare celler vid sårkanten som fungerar för att styra den kollektiva migration av de skadade epitel 4. Denna modell ger också en plattform som man kan identifiera läkemedel som kan främja en effektiv sårläkning och förhindra avvikande sårläkning 5.
Det finns redan ett antal tillgängliga sår-reparation modeller, både i kultur och in vivo, som har lämnat det mesta av vad som är känt om såret reparationsprocessen idag. I djurskademodeller, såsom hornhinnan 6-12 och hud 13-17, finns det möjlighet att studera svaret från vävnaden att såra i samband med alla reparations medlare som kan vara inblandade i processen, inklusive bidrag från kärl och nervsystemet. Det finns dock begränsningar för att manipulera erfapsykiska tillstånd in vivo, och det är ännu inte möjligt att genomföra imaging studier av reparationssvar in vivo kontinuerligt över tiden. Däremot flesta in vitro-sår-reparation kulturmodeller, såsom scratch såret, lätt kan manipuleras och följas över tiden men saknar miljösammanhang att studera sårläkning i in vivo-vävnaden. Medan ex vivo-modeller har fördelen att studera skadereparationsprocessen kontinuerligt över tiden inom ramen för cellernas mikromiljö i kombination med förmågan att modulera de molekylära regulatorer av reparation vid någon tidpunkt i processen, det finns några modeller som passar dessa parametrar.
Här beskrivs ett förfarande för att generera mycket reproducerbar ex vivo epitelial sårläknings kulturer som reproducerar en epitelvävnad svar på en fysiologisk sårande. Använda kycklingembryo linsen som en vävnadskälla, en ex vivo mock kataraktkirurgi utförs. Linsen är en idealisk vävnad som ska användas för dessa studier, eftersom det är självinnesluten i en tjock basmembran kapsel, avaskulär inte innerveras, och fri från tillhörande stroma 18,19. I den humana sjukdomen, adresserar kataraktkirurgi synförlust på grund av grumling av linsen, och innebär avlägsnande av linsfibercellmassa, vilken innefattar huvuddelen av linsen. Efter kataraktkirurgi vision återställdes genom infogning av en artificiell intraokulär lins. Den kataraktkirurgi förfarande, genom avlägsnande av fiberceller, inducerar en skada svar i den intilliggande lins epitel, som svarar genom att återpitelisering av den bakre delen av linskapseln som hade ockuperats av fiberceller. I kataraktkirurgi, som i de flesta sårläkning svar, ibland sker det en avvikande fibrotisk resultat av sårläknings svar, i samband med framväxten av myofibroblaster, som i linsen kallas posterior Capsule opacifiering 20-22. För att generera kataraktkirurgi sårläkning modell är en kataraktkirurgi förfarande härmade i linser bort från kycklingembryo ögat för att producera en fysiologisk skada. Mikro borttagning av linsfiberceller resulterar i en mycket konsekvent cirkulärt sår område omgivet av linsepitelceller. Denna cellpopulation förblir stadigt fäst linsbasalmembranet kapseln och skadas av det kirurgiska ingreppet. De epitelceller migrerar på blottlagda delen av endogena basalmembranet att läka såret, som leds av en population av vimentin rika mesenkymala celler är kända inom reparationsprocessen som ledare celler 1. Med denna modell svaret hos ett epitel på skada kan lätt visualiseras och följes med tiden i samband med cellernas mikromiljö. Cellerna är lätt tillgängliga för modifieringar av expression eller aktivering av molekyler som förväntas spela en roll i sårläkning. En kraftfull funktion i thär modell är förmågan att isolera och studera migration specifika förändringar inom ramen för sårläkning. Förmågan att framställa stora antal åldrade matchade ex vivo sårläknings odlingar för studier är en annan fördel med denna modell. Således tillhandahåller denna modell systemet en unik möjlighet att retas isär mekanismer för sårläkning och test läkemedel för deras effekt på såret läkningsprocessen. Den ex vivo mock kataraktkirurgi modellen förväntas ha bred användbarhet, vilket ger en kritisk resurs för att studera mekanismer för skada reparation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Följande protokoll uppfyller Thomas Jefferson University Institutional Animal Care och användning kommittén riktlinjer och med Arvo uttalande för användning av djur i Vision Research.
1. Inställning och framställning av linser för ex vivo Wound Kultur
- Placera tre 100 mm petriskålar i en steril, laminärt flöde huva. Fyll två av de petriskålar halvvägs med Tris / dextros-buffert (TD-buffert; 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 0,7 mM Na 2 PO 4, 5 mM D-glukos, 8,25 mM Tris-bas, pH till 7,4 med HCl) vid RT , lämnar den tredje tom. Pre-varm odlingsmedier (Media 199 kompletterat med 1% L-glutamin och 1% penicillin / streptomycin) till 37 ° C.
Obs: Standardsårläkningsodlingsmedier är serumfritt, som sker in vivo; Men, kan sår-reparation kulturer odlas med framgång i definierade medier förhållanden som innehåller serum eller andra faktorer. - Avlägsna bördig embryo day 15 vit leghorn chick ägg från inkubatorn (hölls vid 37,7 ° C med försiktig skakning)
- Placera vald ägg i laminärt flöde huva och ren utanför skal med 70% etanol från en tvättflaska. Genomför alla förfaranden nedan under aseptiska förhållanden i laminärt flöde huva, med hjälp av sterila lösningar och instrument.
- Spricka ägg och placera innehållet i den tomma 100 mm petriskål. Decapitate embryo med användning av standard pincett och fina saxar. Placera kycklingembryo huvudet i en petriskål med TD buffert och kasta resten av embryot. Eventuellt hålla kycklingembryohuvudena i TD-buffert för en kort tidsperiod, inte längre än 15 minuter.
- Placera kycklingembryo huvudet på en petriskål lock. Med hög precision pincett, ta bort objektivet tillsammans med dess anslutna glasvätskan från ögat i följande ordning. Nyp den bakre delen av ögat med pincett för att skapa en liten öppning i den bakre delen av ögat.
- Sedan ta tag i glaskroppen wed pincett och försiktigt dra i glaskroppen med en rullande rörelse, kommer glaskroppen med objektivet monterat rubbas från ögat. Placera lins / glaskroppen i den återstående petriskål med TD buffert. Låt linserna att förbli i TD buffert för längre än 30 minuter.
- Flytta objektivet till en ny petriskål lock under ett dissektionsmikroskop. Från denna punkt på utföra alla stegen under ett dissektionsmikroskop. Med hög precision pincett försiktigt borsta bort alla ciliarkroppen (pigmenterade celler) som rubbas med objektivet med kanten av pincett, ta försiktighet inte att skada linsen vävnaden.
Anm: Borttagning av ciliarkroppen säkerställer att celltyper som inte är endogen till linsen inte är inkluderade i sårläkning kulturen. - Separera linsen från glaskroppen med hög precision pincett genom att nypa bort glaskroppen från sitt samarbete med den bakre linskapseln.
- Använda hög precision pincett överföra linsen i en liten droppeav TD-buffert (omkring 200 | il) i en 35 mm vävnadsodlingsskål.
2. Utföra Mock kataraktoperation
- Rikta linsen i droppe TD buffert i 35 mm skålen med främre delen av linsen uppåt.
Obs: Det främre av linsen kan lätt identifieras genom närvaron av en tät ring i den vävnad som noterar gränsen mellan den främre och ekvatorområde av linsen epitel. Däremot finns det en frånvaro av markeringarna på den bakre delen av linskapseln som linsfiberceller bifogas. - Med hjälp av två höga precision pincett göra ett litet snitt (ungefär 850μm) i mitten av den främre linskapseln, den tjocka basalmembranet som omger linsvävnaden, och dess tillhörande främre lins epitel, genom att ta tag i vävnaden med en pincett i varje hand och försiktigt rycka i motsatta riktningar.
- Avlägsna fibercellmassan, som utgör huvuddelen av linsvävnaden, dislodging det från dess bilagor till linsen epitel och omgivande linskapseln genom hydro-eluering (en metod som används i klassisk kataraktkirurgi, modelleras i figur 1A).
- Fyll en 1 ml spruta med en 27,5 G nålspets med 300 ul av TD-buffert. Stick in nålen spetsen i snitt i den främre linskapseln, och ungefär halvvägs in i linsen.
- Tryck försiktigt sprutan injicera TD bufferten i linsfibercellmassa. Injicera mellan 50 och 200 ^ TD, och aldrig mer än 300 l. Observera fibercellmassa lossa sig från epitel och linskapseln.
- Med hög precision pincett, ta bort lossade fibercellmassa från linsen genom den främre snittet webbplatsen.
Obs: Denna procedur lämnar bakre linsbasalmembranet kapsel som fiber cellerna hade fäst utblottad av celler, och en skadad lins epitel precis intill denna webbplats.
3. Preparing sårades lins för Ex vivo Kultur
- Platta linskapselpåsen som är resultatet av kataraktkirurgi som beskrivs ovan på kulturen skålen, cell uppåt, genom att göra fem nedskärningar i främre delen av kapselsäcken.
- Klipp vinkelrätt mot den ursprungliga snittstället genom ekvatorn på linsen. Platta de resulterande fem "flikar" av linskapseln med tillhörande epitel på kulturen skålen kapselsidan nedåt, cell uppåt. Notera ex vivo sårade lins nu bör ta på en stjärna eller flower form (se figur 1B).
- För att säkra kapseln till skålen, tryck försiktigt ner den med pincetten vid varje punkt av stjärnan. Detta kommer att göra en liten inbuktning på de fem mest utanför tips av explantatet och resultera i ihållande engagemang för skålen.
OBS: Det är möjligt att skada kapseln under detta förfarande och därför är det viktigt att säkra kapseln skålen så nära spetsarna av flaps som möjligt, samt att göra den minsta mängden av fästpunkterna som möjligt (i allmänhet två, högst tre per flik). - Ta bort TD bufferten från 35mm skålen och ersätta den med 1,5 ml förvärmda media. Täck 35mm skålen med lock och plats i inkubatorn (37 ° C, 5% CO2).
4. Separation av Central Migrations Zone (CMZ), där Re pitelisering av skadade området av den bakre kapseln Inträffar, från den ursprungliga Attachment Zone (OAZ) i Lens epitelceller, för kvantitativ analys.
Obs! Cellerna börjar flytta in i CMZ regionen omedelbart svar på skada. På dagen en i odling tillräckligt med celler migrerar över CMZ för molekylär och biokemisk analys, efter separation av CMZ och OAZ av mikro-dissektion 23. Detta protokoll innefattar avlägsnande av en flik (OAZ) åt gången från den skadade området av kapseln.
- Observera en Demarning, tydligt under dissekera mikroskop, mellan OAZ och CMZ (se figur 2A). Med hjälp av två höga precision pincett, ta tag med båda pincett vid kanten av OAZ / CMZ linje, en precis intill den andra, på ömse sidor om linjen (se figur 2A, B, pil).
- Med en hand / en pincett på CMZ sidan fortsätter att hålla fast vid de sårade kultur, medan med den andra handen / pincett, försiktigt dra OAZ längs OAZ / CMZ linje. Den CMZ separerar lätt från OAZ längs denna linje. Fortsätt längs denna linje runt hela kulturen tills de två regionerna är helt separerade.
- Studera separerade Oaz och CMZ fraktioner för molekylär analys såsom RNA-Seq 24 eller biokemisk analys såsom western blöt eller co-immunoprecipitation 23,25.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ex vivo-modell som skapats för att studera sårläkningsprocessen i cellernas infödda mikro
För att undersöka mekanismer som är involverade i regleringen av sårläkning av en epitel inom cellernas infödda mikro, var ett kliniskt relevant ex vivo mock kataraktoperation modell skapas. Denna modell är skapad från linsvävnad som erbjuder många fördelar på grund av dess inneboende egenskaper: 1) Objektivet är ett fristående organ som omges av en tjock basmembran kallas linskapseln; 2) Det är avaskulär, 3) inte innerverad och 4) utan tillhörande stroma. Därför är reparationsprocessen undersöks begränsad till celler som är inneboende till linsen korrekt. För att skapa den här modellen, är linser bort från ett embryo (E) dag 15 kycklingembryo (Figur 1A). Ett litet snitt görs i den främre linskapseln och dess tillhörande linsepitelceller genom vilken linsfibercellmassan avlägsnasgenom hydro eluering, en klassisk katarakt förfarande som skapar en fysiologiskt relevant sårskada (Figur 1A). Lins epitel, som är närvarande som en kontinuerlig monoskikt av celler utmed den främre och ekvatoriella aspekter av linskapseln som omger fibercellmassan, tillsammans med dess endogena population av vimentin rika mesenkymala reparation cellstamfäder 1, förblir i linsen under extraktion av fiberceller (Figur 1A). Efter avlägsnande av fibercellmassan, är fem nedskärningar görs i främre delen av linskapseln och epitel tillplattad cell uppåt, mot mediet. Detta förfarande möjliggör avbildning av svaret från den skadade epitel av olika mikroskopiska metoder, bland annat tidsförlopp mikroskopi (Video 1). Dessa ytterligare nedskärningar i den främre linskapseln skapa en stjärnform explantat av sårade linsen med den cirkulära såret skapas genom att ta bort fibercellmassan i center av explantatet (Figur 1B). Post-kataraktkirurgi och flackare vävnaden, är den sårade epitel ligger i de punkter i stjärnan, som kallas den ursprungliga Attachment Zone (OAZ) (Figur 1A, B).
Avlägsnandet av fibercellmassan från dess fästställe på den bakre linskapseln skapar en mycket reproducerbar sårområdet på basalmembranet, som omges av de sårade epitel (Figur 1B, C). Den exponerade kanten på linsen ekvatorial epitel, precis intill där fiber cellerna fäst, är den främre kanten av såret. Omedelbart efter skada, är en subpopulation av vimentin rika mesenkymala reparera celler aktiveras och migrerar till sårkanten av epitel 1. Linsen epitel, med dessa mesenkymala läkningscellerna vid deras främre kant, rör sig snabbt på cellfria regionen av den endogena Basement membran kapsel, Central Migrations Zone (CMZ), att börja läka såret. Lins epitelceller flytta tillsammans, som ett ark, i CMZ leds av mesenkymala ledare celler 1, som sträcker sig utsprång utmed substratet och styr sårläkningsprocessen (F igure 1D, Video 1). Sårläkning fortskrider, som täcker ett betydande område av såret (67%) vid dag 1 i odling (Figur 1C), och anges vanligtvis avslutad inom 3 dagar i kultur (figur 1B, C).
Kan göras en tydlig fysisk åtskillnad mellan Oaz och CMZ regioner så tidigt som dag 1, som fastställts vara ett veck eller rynka mellan dessa två zoner (figur 2A, pil). Detta fenomen ger en riktlinje av för att separera dessa områden på helst under sårläkningsprocessen. Med hjälp av en fin spets pincett, kan kulturerna vara mikro-dissekeras att separåt de Oaz och CMZ regionerna för att analysera molekylära skillnader mellan dessa olika zoner (Figur 2B). Detta är en kraftfull metod som har använts för att identifiera migrationsspecifika förändringar i samband med sår-reparation. Tidigare konstaterades att det finns en ökning av Focal Adhesion Kinase (FAK) aktivering i ex vivo sårade kulturer under sårläkningsprocessen 5. FAK har en väletablerad roll i cellmigration 26-29. Möjligheten att berika för OAZ vs. CMZ nu gjort det möjligt att undersöka om denna ökning i FAK aktivering är specifik för migration specifika CMZ region. För denna studie var de Oaz och CMZ regioner separerades på dag 1 - 3 (hela sårläkningsprocessen) och analyserades för biokemiska förändringar i FAK aktivering (FAK pY397). Resultaten visade att ökningen i FAK aktivering i samband med migreringen specifika CMZ region (Figur 2C). Denex vivo modellsystem som beskrivs här ger en unik och ovärderlig möjlighet där att undersöka de molekylära program delaktig i samordningen av såret reparationsprocessen.
Figur 1. Skapande av en ex vivo modell där för att studera sårläkningsprocessen inom cellernas nativa mikromiljö som svar på en fysiologisk sårskada. Mock kataraktkirurgi utfördes på E15 chick linser. Linsfibercellmassan (vit) avlägsnas genom ett snitt i den främre kapseln genom hydro eluering. Denna process lämnar efter epitelceller (grön) som förblir tätt vidhäftande till linskapseln och en cellblottade basalmembran (BM) på vilka celler kommer att migrera för att läka såret (A). Fem nedskärningar görs i epitelet att platta ut och skapa en stjärnformad ex vivo kult ure (B). De kvarvarande linsepitelceller som fyller de punkter av stjärnan kallas den ursprungliga anslutningszonen (OAZ) (A, B). Den blottlagda BM på vilka celler kommer att migrera kallas den centrala Migrations zonen (CMZ) (A, B). Omedelbart svar på skada, cellerna börjar flytta in i CMZ region på cellblottade BM (B). Den öppna sårområdet kvantifieras över tiden i (C). Sårläkning typiskt avslutas med D3 i kultur (B, C). I (B, C) T0 betecknar tidpunkten för sårskada, D1-3 betecknar Days 1-3. Inom CMZ kan två populationer av celler urskiljas, linsepitelceller och de mesenkymala ledar celler som lokaliserar till sårkanten, sträckande utsprång utmed substratet (D). Denna siffra är omtryckt från Menko m.fl. 23.target = "_ blank"> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Separation av Oaz och CMZ regionerna för att identifiera migrationsspecifika förändringar i samband med sårläkning. Vid dag 1, kan Oaz och CMZ regioner särskiljas från varandra genom ett veck (pil), som kan användas som en guide för att separera dessa zoner (A). Vid denna veck, kan fin spets pincett användas för att gripa kanten av OAZ / CMZ linje. Kulturen kan separeras längs denna linje som tillåter isolering av Oaz och CMZ regioner (B). Mikro-dissektion av OAZ och CMZ dagligen från dag 1 (D1) - dag 3 (D3) utfördes för att bestämma om migrationsspecifika förändringar i FAK-aktivering uppträder i området för sårläkning. Lysat från varje region undersöktes genom Western blot-analys för antingen FAK aktivering (pFAK Y397) eller total FAK-uttrycket (C). Även små förändringar i den totala FAK nivåer observerades en ökning av FAK aktivering i samband med migreringen specifika CMZ region (C).
Video 1. Sårläkning i ex vivo mock kataraktkirurgi modell följs av tidsförlopp mikroskopi från tiden 0 efter skada genom till dag 3. sårtillslutning ses från mitten av sårområdet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride (NaCl) | Fisher Scientific | S271-3 | Use at 140 mM in TD Buffer |
| Potassium Chloride (KCl) | Fisher Scientific | P217-500 | Use at 5 mM in TD Buffer |
| Sodium Phosphate (Na2HPO4) | Sigma | S0876 | Use at 0.7 mM in TD Buffer |
| D-glucose (Dextrose) | Fisher Scientific | D16-500 | Use at 0.5 mM in TD Buffer |
| Tris Base | Fisher Scientific | BP152-1 | Use at 8.25 mM in TD Buffer |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 | Use to pH TD buffer to 7.4 |
| Media 199 | GIBCO | 11150-059 | |
| L-glutamine | Corning/CellGro | 25-005-CI | Use at 1% in Media199 |
| Penicillin/streptomycin | Corning/CellGro | 30-002-CI | Use at 1% in Media199 |
| 100 mm petri dishes | Fisher Scientific | FB0875711Z | |
| Stericup Filter Unit | Millipore | SCGPU01RE | Use to filter sterilize Media |
| Dumont #5 forceps (need 2) | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| 35 mm Cell Culture Dish | Corning | 430165 | |
| 27 G 1 ml SlipTip with precision glide needle | BD | 309623 | |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Standard Forceps | Fine Science Tools | 91100-12 | |
| Other Items Needed: General dissection instruments, fertile white leghorn chicken eggs, check egg incubator (humidified, 37.7°C), laminar flow hood, binocular stereovision dissecting microscope |
References
- Walker, J. L., et al. Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).
- Friedl, P., Gilmour, D. Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer. Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).
- Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration. Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).
- Khalil, A. A., Friedl, P. Determinants of leader cells in collective cell migration. Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).
- Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification. Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).
- Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. Disruption of the basement membrane after corneal debridement. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).
- Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease. Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).
- Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing. Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).
- Stepp, M. A., et al. Wounding the cornea to learn how it heals. Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).
- Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds. Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).
- Sherrard, E. S. The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma. Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).
- Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes. Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).
- Escamez, M. J., et al. An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice. The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).
- Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse. The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).
- Tarin, D., Croft, C. B. Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships. Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).
- Croft, C. B., Tarin, D. Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour. Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).
- Winstanley, E. W. The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog. Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).
- Wormstone, I. M., Wride, M. A. The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).
- Danysh, B. P., Duncan, M. K.
- Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated. Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).
- Walker, T. D. Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review. Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).
- Schmidbauer, J. M., et al.
- Menko, A. S., et al. A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium. Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).
- Chauss, D., et al. Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens. G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).
- Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).
- Sieg, D. J., et al. FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration. Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).
- Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration. Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).
- Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion). IUBMB life. 53, 115-119 (2002).
- Zhao, X., Guan, J. L. Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis. Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).
- Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury. Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).
- Martin, P. Wound healing--aiming for perfect skin regeneration. Science. 276, 75-81 (1997).
- Ferguson, M. W., O'Kane, S. Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).
- Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).
- Nodder, S., Martin, P. Wound healing in embryos: a review. Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).
- Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T.
