Summary
In situ bioindications inschakelen bepaling van de geschiktheid van een omgeving voor bedreigde Mossel soorten. Beschrijven we twee methoden op basis van de jonge Gasbedwelming met behulp van zoetwater parel mosselen in kooien oligotrofe rivierhabitats. Beide methoden zijn geïmplementeerd in de varianten voor open water en hyporheic water omgevingen.
Abstract
Kennis van habitat geschiktheid voor zoetwater mosselen is een belangrijke stap in het behoud van deze bedreigde diersoorten-groep. We beschrijven een protocol voor het verrichten van in situ jeugdige blootstelling proeven binnen oligotrofe rivier stroomgebieden een maand en drie maanden durende periode. (In beide wijzigingen) op twee manieren worden voorgesteld om te evalueren van de jonge groei en overleving tarief. De methoden en wijzigingen verschillen in waarde voor de plaats bioindication en elk heeft zijn voordelen evenals beperkingen. De zanderige kooi methode werkt met een grote verzameling van individuen, maar slechts een deel van de personen worden gemeten en de resultaten worden geëvalueerd in bulk. In de mesh kooi methode, de personen moeten worden bewaard of afzonderlijk gemeten, maar een individueel nummer aan de laag wordt geëvalueerd. De wijziging van de blootstelling open water is relatief eenvoudig toe te passen; het toont de jonge groei potentieel van sites en ook effectief voor het testen van de toxiciteit van de water kan zijn. De binnen-bed blootstelling wijziging moet een hoge werklast, maar dichter bij de voorwaarden van een jonge natuur en het is beter voor het melden van de echte geschiktheid van plaatsen. Aan de andere kant, zijn meer replicaties nodig in deze wijziging te wijten aan de hoge-hyporheic milieu variabiliteit.
Introduction
De blootstelling van experimentele organismen in situ met de latere evaluatie van hun toestand is een mogelijke manier om informatie te krijgen over de kwaliteit van het milieu en (vooral) de geschiktheid van de site voor een soort. Binnen dieren geldt een dergelijke bioindication vooral voor kleine ongewervelden die kunnen leven in een beperkte begrensde ruimte. Jonge stadia van tweekleppigen (Bivalvia) zijn een dergelijke geschikt organisme groep1.
Tweekleppigen van de familie Unionidae zijn een zeer belangrijk onderdeel van aquatische ecosystemen2. Deze soorten zijn echter vaak kritisch bedreigde, vooral in de beken en rivieren. Sommigen van hen worden gekenmerkt als 'paraplu species' waarvan instandhouding is nauw verwant aan het behoud van de hele stream biotoop en waarvoor een alomvattende aanpak3. Deze dieren hebben een levenscyclus die vele onderdelen van de omgeving, van water chemie4,5 tot veranderingen van de populaties van vis die als Mossel larven hosts6 dienengekoppeld. Omdat Mossel jonge exemplaren vaak een kritieke fase van de levenscyclus van de Mossel vertegenwoordigen, is de geschiktheid van de site voor hun ontwikkeling in dit stadium cruciaal voor een succesvolle soorten demografische ontwikkeling in een plaats.
De Beekparelmossel (FWPM, Margaritifera margaritifera; Unionida, Bivalvia) is een bedreigde tweekleppige die zich voordoen in oligotrofe Europese stromen. Hun nummers zijn drastisch gedaald tijdens de 20ste eeuw door het gebied voorkomen. Het lijkt erop dat de huidige daling van de voortplanting van de soorten in de meerderheid van de centrale Europese populaties voornamelijk door zeer laag nul voortbestaan van jonge exemplaren tijdens de eerste jaren van hun leven veroorzaakt wordt. Er wordt verondersteld dat de jonge FWPMs voor vele jaren in de ondiepe hyporheic zone7 leven, waarvan de voorwaarden en hun variabiliteit nog steeds niet goed beschreven zijn. Bovendien tot hun tweede jaar van het leven hebben de jonge exemplaren alleen een afmeting van maximaal ongeveer 1 mm, zodat ze zeer moeilijk te vinden in grote hoeveelheden sediment onder natuurlijke omstandigheden8. Experimenten met gevangen jonge vis zijn dus nodig voor de studie van hun ecologie.
Binnen de Tsjechische Action Plan for Freshwater Pearl Mossel9, er zijn duizenden jonge exemplaren stijgende jaarlijks een semi-natuurlijke kweekprogramma. Er is echter een vraag van die plaatsen en habitats geschikt voor succesvolle bevolking ondersteuning door deze jonge exemplaren of voor eventuele soorten herinvoering zijn. In situ bioindications presenteren een manier om het antwoord te vinden.
Ondanks het feit dat inconsistent overlevingskansen van jonge mosselen in het blootstelling kooien werden waargenomen in sommige eerdere werken die de geschiktheid van jonge mosselen als wijzen10ondervraagd, verschillende recente studies hebben bevestigd dat de toepasbaarheid van jeugdige blootstelling methoden voor waterkwaliteit testen11,12,13. Bovendien is gebleken dat verschillende factoren worden overwogen moeten bij de interpretatie van de resultaten van deze bijzondere studies, zoals de voorraad oorsprong14 en de aanhoudende effecten van larvale voorwaarden15.
De vraag van het installeren van experimentele jonge exemplaren in geteste plaatsen en hoe hun toestand zo effectief mogelijk te evalueren. De eerste strenge toepassing van de in situ blootstelling methoden met jonge FWPMs werd gepubliceerd door Buddensiek16. Jonge FWPM personen werden gehouden in blad kooien, blootgesteld in het vrij stromend water van beken, en hun overleving en groei werden gekwantificeerd na verscheidene weken van blootstelling. De aanpak werd oorspronkelijk ontwikkeld als een semi-kunstmatige kweek methode, maar de auteur benadrukt ook de toepasbaarheid ervan voor de beoordeling van de eisen van de habitat en de waterkwaliteit. Hoewel het FWPM jonge voortbestaan is natuurlijk erg laag op een schaal van maanden/jaren en slechts een zeer klein aantal dieren zullen overleven, de overlevingskans kunnen een goede marker van het milieu-effect op een schaal van verscheidene weken16. Jaren van onderzoek, zijn blootstelling methoden ontwikkeld naar aanleiding van de greep experimentele jonge Mossel in-stream habitats en voor beoordeling van hun groei en overleving tarieven; het gaat hierbij om zanderige vakken17, Mossel silo's op basis van een opwelling beginsel18, en verschillende andere blootstelling kooien (samengevat door het tandvlees is gebroken en collega's)11. Omdat jonge exemplaren, zijn van nature in ondiepe hyporheic zone7, is de toepassing van experimentele apparaten binnen de stroom onder zeer wenselijk.
In ons artikel, beschrijven we het gebruik van twee blootstelling apparaten voor FWPMs: ik) bewerkt Buddensiek blad kooien ("mesh kooien") ook inschakelen bioindication testen in hyporheal voorwaarden; en ii) Hruška zandstrand vakken ("zanderige kooien"). Het protocol wordt de toepassing van beide methoden in open water en hyporheic voorwaarden beschreven (dat wil zeggen, vier varianten van de blootstelling worden beschreven). De methoden werden geleidelijk gewijzigd en uitgebreid in meer dan 15 jaar van toepassing binnen het actieplan voor de Tsjechische voor zoetwater parel Mossel9 en geverifieerd door een aantal experimenten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. mesh kooi
Opmerking: Zie Figuur 1.
- Voorbereiden van materiaal
- Bereiden van het materiaal voor het deel van de in-laboratorium van het experiment: ~ 1-2 L van rivier water per mesh kooi, mesh kooien (1 belangrijkste kunststof behuizing, 2 plastic hoesjes, 2 vellen met speciale technische zeef met 340 µm poriën, 4 bouten en moeren van de 4 per korf), tangen , roet, Pasteur pipetten, een zeef, een digitale camera, een trinocular ontleden de stereomicroscoop zoom, een kalibratie-raster (Microscoop apparatuur), 5 petrischalen van 50 mm diameter, bekers, 2 plastic gerechten (~ 25 x 15 cm x 3 - 5 cm), en een plastic doos.
- Voor het uitvoeren van de installatie van hyporheal, een rubberen slang en een maaswijdte van 100-µm-porie, en een spuit fles voorbereiden. Voor de bouw van het apparaat, Zie aanvullende bestand 1: S.1. Mesh kooien bouw.
- Het monteren van de onderkant en het centrale deel van de mesh kooien. Het deel van de kooi die in het bezit van de personen te monteren. Plaatst u een plastic dopje eerst, dan één vel van het plastic zeef, en tot slot de belangrijkste body bovenop. Gebruik vier bouten om het te beveiligen.
- Bereiden van biologisch materiaal
- Zet de kooi met gaas in de kunststof schotel met rivierwater. Ervoor zorgen dat de kamers halfvol. Neem de FWPM jonge exemplaren (Zie aanvullende bestand 1: S.6. Biologisch materiaal) uit het vak geïsoleerd en leg ze in de petrischaal.
Opmerking: Zorg ervoor dat plotselinge temperatuurveranderingen ~ 2 ° C. niet overschrijden - Met behulp van een spuit fles en zeef, stofdicht door de jonge exemplaren te wissen van de detritus.
- Zet de kooi met gaas in de kunststof schotel met rivierwater. Ervoor zorgen dat de kamers halfvol. Neem de FWPM jonge exemplaren (Zie aanvullende bestand 1: S.6. Biologisch materiaal) uit het vak geïsoleerd en leg ze in de petrischaal.
- Instellen van de Microscoop en een camera. Uitvoeren van een kalibratie van de instrumenten (Zie aanvullende File1: S. 5. Microscoop en phototechnics). Plaats een petrischaal met een beetje water onder de Microscoop.
- Zet de jonge exemplaren in kooien (experimenteel laboratoriumwerk)
- Gebruik een pipet van Pasteur van te verwijderen een individu een petrischaal en zorgvuldig plaatst u deze in de petrischaal onder de Microscoop.
- De individuele fitness controleren door te kijken naar het oculair (~ 40 X vergroting).
Opmerking: "Goed" fitness betekent dat het individu zich beweegt, draait van links naar rechts, duwt de voet uit de shell, etc. verwijderen dode of lage fitness individuen met een Pasteur Pipetteer en plaats ze in een aparte petrischaal (FWPM exemplaren met een geopende Shell, geen beweging, de voet is niet teruggetrokken, een gefragmenteerde shell, jonge exemplaren die ongecontroleerd in het water zweven, een zichtbare decompositie van de shell, gedeeltelijke botontkalking). - Twee foto's nemen van een FWPM individuele tonen goede fitness met behulp van een constante vergroting van ~ 80 X. Zie aanvullende bestand 1: S.5. Microscoop en phototechnics. De foto's opslaan.
Opmerking: Voor een goede meting van de lengte, de jeugdige moet worden gelegd in de lengte (laterale weergave). Het belangrijkste doel is om een kwalitatief hoogwaardige foto van de maximale shell lengte goed genoeg om een foto-analyse daarna. - Plaats de jeugdige in de juiste kamer in de kooi, zodra de foto's zijn genomen. Noteer de nummers van de foto's en de kamer.
- Herhaal deze stap met elk individu voor alle de gebruikte kamers in de kooi met gaas.
Opmerking: Zie aanvullende bestand 1: S.1. Mesh kooien bouw. - Zodra alle van de gebruikte kamers parel mosselen, zet de plastic zeef op de kooi, dan zachtjes de plastic dekking zetten en beveiligen van alle onderdelen samen met de noten.
- In het geval van een installatie in een hyporheic zone, passeren een van de uiteinden van de slang een van zijn kamers en repareren in deze positie, dan nemen de anti-clogging Maas en binden op de onderkant (Zie aanvullende bestand 1: S.1. Mesh kooien bouw).
- Winkel jonge exemplaren
- Zet de kooi in de plastic doos met het rivierwater, zodat de jonge exemplaren zijn volledig ondergedompeld, en bewaar deze op de thermobox. Vóór de installatie, laat de minderjarigen aan te passen aan de in situ rivier watertemperatuur op de plaats van installatie (geleidelijke koeling, max. 5 ° C in 24 h).
- Installeren van mesh kooien
- Voorbereiden het veld materiaal met inbegrip van de mesh kooien met de jonge exemplaren, staal spikes, bouten en metalen noten, roet, veld Temperatuur dataloggers (Zie Tabel van materialen en aanvullende bestand 1: S.4.2. Water meten), een tekenreeks, een camera, het veld protocol, een hamer, en een spade.
- Vervoer van de exemplaren van de FWPM naar de site in een veld thermobox (geïsoleerde doos), houden van een stabiele watertemperatuur met variaties < ~ 2 ° C. Zet de thermobox met de mesh kooien in de rivier op de site te laten van de minderjarigen aan te passen aan de plaatselijke milieuomstandigheden (pH, geleidbaarheid, enz.).
- Installeer de kooi met gaas.
- Verwijder de mesh kooi uit het veld thermobox. Voorzien van twee staal spikes en vastmaken van het veld datalogger. Het verankeren van de kooi in een habitat met typische voorwaarden voor FWPMs in het studiegebied (b.v., aan de rand van de hoofdstroom stroom, niet in directe waterstroom, niet in stilstaand water, niet in direct zonlicht).
- Voor open water, met behulp van een paar van de stalen spikes, vast de kooi aan de bodem van de rivier; Leg het op zijn kant en het niveau met de bodem van de rivier, stroomafwaarts onder een hoek van 45° met de stroom van de rivier, naar het midden van de rivier. De onderste horizontale rand moet ongeveer 10-15 cm boven de onderkant van de rivier. Handhaven van een minimumafstand van 2 m tussen elke kooi op één plaats (Zie aanvullende bestand 1: S.4. Kooien onderhoud).
- Voor de hyporheic zone, graven de kooien in de bodem van de rivier in loodrecht landschap staat loodrecht op de stroom van water, zodat de bovenste horizontale rand van de kooi parallel aan de onderkant van de rivier is en de kamers zich op de hyporheic bevinden diepte die moet worden getest. Neem het bovenste uiteinde van de rubberen slang boven het oppervlak van de bodem voor de mogelijkheid van Watermonstername tijdens het experiment (Zie aanvullende bestand 1: S.4.2. Water meten).
Opmerking: Het wordt aanbevolen voor het uitvoeren van regelmatige controles en onderhoud op de kooien (Zie aanvullende bestand 1: S. 4. Kooien onderhoud).
- Verwijder de mesh kooi uit het veld thermobox. Voorzien van twee staal spikes en vastmaken van het veld datalogger. Het verankeren van de kooi in een habitat met typische voorwaarden voor FWPMs in het studiegebied (b.v., aan de rand van de hoofdstroom stroom, niet in directe waterstroom, niet in stilstaand water, niet in direct zonlicht).
- Verwijder de kooien en transport van de jonge exemplaren na de blootstelling. Hiervoor trekken de kooien uit het water, duidelijke ze van fijne sediment alsook vanaf dreven materiaal en ze in het veld thermobox gevuld met rivierwater. Vervoer van de kooien onmiddellijk naar het laboratorium en de mortaliteit en groei tarief-evaluatie beginnen.
Opmerking: Zie aanvullende bestand 1: S.3. Blootstellingsduur. In het geval van een temperatuurverschil van meer dan 5 ° C tussen de kooien en de labo-omgeving is het eerst nodig om te laat de temperatuur gelijk te trekken. - Evalueren van het experiment door het controleren van de LifeFitness van elke jeugdige (zie stap 1.5.2 en 1.5.3) en neem 2 beelden van elke levende juveniele in een petrischaal met behulp van een constante vergroting van ~ 80 X. Het opnemen van de geschiktheid en de nummers van de foto's en kamers.
- Voltooien van het experiment (gemeenschappelijk aan alle methoden)
- Het uitvoeren van de metingen in de software van de analyse van de afbeelding. Gebruik de software van de analyse van de afbeelding voor de bepaling van de maat van het lichaam van elke beoordeeld op juveniele op zowel de invoerafbeeldingen (stap 1.5.3) en op de uitvoer afbeeldingen (stap 1.9). Gebruik de maximale totale shell lengte opgenomen in zowel foto's als lichaam grootte waarden in zowel invoer als uitvoer.
- Invoegen van de gemeten waarden in de tabel processor en bereken de groei toename (%) voor elke overleven jonge.
- Schatten de overlevingskans (%) per mesh kooi met behulp van de verhouding van het aantal overlevende individuen aan alle experimentele personen in de kooi met gaas.
Opmerking: Na het experiment, de overlevenden terugkeren naar het fokprogramma
(Zie aanvullende bestand 1: S.6. Biologisch materiaal).
2. de Sandy Cage
Opmerking: Zie Figuur 2.
- Voorbereiden van materiaal
- Bereiden van het materiaal voor het deel van de in-laboratorium van het experiment: 2 petrischalen (diameter ~8.5 cm) met Pasteur pipetten, een zeef, 25 L van rivierwater, een plastic doos, zeef (maaswijdte maat 1 en 2 mm), een grote plastic doos (25 L), een zanderige kooi (Zie aanvullende bestand 1 : S.2. Sandy kooien bouw), een digitale camera, een trinocular ontrafeling van zoom stereo microscoop, een kalibratie-raster (Microscoop apparatuur), gesorteerd op rivier zand uit het studiegebied (zie stap 2.1.3), en het protocol. Zie tabel van materialen en aanvullende bestand 1: S. 2. Sandy kooien bouw.
- Bereiden van het materiaal voor het proces van isolement: ronde van containers (1 voor elke kooi plus 1 extra), 2 petrischalen (diameter ongeveer 14 cm), een pipet van Pasteur, vergrootglazen en 1 L rivierwater.
- De rivier zand stofdicht door een zeef van 2 mm zeef: 1 mm om een korrelgrootte van 1-2 mm. het drogen van het zand en sla het op in een droge vorm totdat vereist.
- Nemen van de minderjarigen (Zie aanvullende bestand 1: S.6. Biologisch materiaal) uit de thermobox en leg ze in de petrischaal. Met behulp van een spuit fles en zeef, stofdicht door de jonge exemplaren te wissen van de detritus.
- Instellen van de Microscoop en een camera (Zie aanvullende bestand 1: S.5. Microscoop en phototechnics).
- Jonge exemplaren gestoken kooien (experimenteel laboratoriumwerk)
- Plaats de zandige kooi in de plastic doos. Strooi het gesorteerde zand (zie stap 2.1.3) omhoog tot eenderde van de hoogte van de zanderige kooi. Giet water in het vak. Zorg ervoor dat het zand oppervlak ongeveer 10 mm onder het waterniveau is. De zanderige kooi invoegen in het vak van de 25 L van rivierwater en worden blootgesteld aan dezelfde temperatuur als de jonge FWPMs (Zie aanvullende bestand 1: S.6.2. Opslag van het biologisch materiaal) voor 12 h. Vermijd eventuele blootstelling van het zand aan zonlicht.
- Neem de petrischaal met de bereid FWPM jonge exemplaren.
- Controleren van de individuen fitness door te kijken naar de ooglens (zie stap 1.5.2).
- De fotografische documentatie als volgt uitvoeren. Neem een foto van alle individuen ontdekt (zie stap 1.5.3) en 10 van de grootste personen kiezen. Als alternatief, neem foto's van alle jonge exemplaren samen met lage vergroting (~ 40 X) voor de evaluatie van een bulk en kies de 10 grootste personen. Alle foto's opslaan en opnemen van hun nummers.
- Met behulp van een spuit fles, verplaats de FWPM jonge exemplaren in de bereid zandstrand kooi.
- Winkel jonge exemplaren
- Zet de kooi in de grote plastic doos met rivierwater, zodat de kooi is volledig ondergedompeld en bewaar deze in de thermobox. Laat de minderjarigen aan te passen aan de in situ rivier watertemperatuur (geleidelijke koeling, max. 5 ° C gedurende 24 uur) vóór de installatie.
- Installeren van zandstrand kooien
- Het materiaal voor de veld-installatie voor te bereiden: Zandige kooien, een ~ 25-L veld thermobox, een platte steen (minimale gewicht 1 kg), een net (mesh formaat 10 x 10 mm), een spuit fles, veld Temperatuur dataloggers (Zie Tabel van materialen en aanvullende bestand 1: Meting van de S.4.2. Water), een spade, en het veld protocol.
- Transport kooien met de jonge exemplaren naar de site in het veld thermobox, houden van een stabiele watertemperatuur (~ 2 ° C wijzigen). Zet het veld thermobox met de zanderige kooien in de rivier in het veld site te laten van de exemplaren van de FWPM aan te passen aan de plaatselijke milieuomstandigheden (pH, geleidbaarheid, enz.).
- Installeer de zandige kooien in habitats met typische voorwaarden voor FWPMs (bijvoorbeeld, aan de rand van de hoofdstroom stroom in een meander niet in directe waterstroom, niet in stilstaand water, niet in direct zonlicht).
- Voor open water, de zandige kooien op een platte steen met behulp van een net fasten en plaats deze op de bodem van de rivier. Ervoor zorgen dat de grootste zijde van de kooi een hoek van 45° met de stroom vormt.
- Voor Hyporheal, graven de kooien in de rivier bodem loodrecht op de stroom van water zodat het deksel van de kooi niveau met de onderkant van de rivier is.
Opmerking: Het wordt aanbevolen voor het uitvoeren van regelmatige controles en onderhoud op de kooien (Zie aanvullende bestand 1: S. 4. 1. controles site).
- Kooien en transport juvenielen verwijderen na blootstelling
Opmerking: Zie aanvullende bestand 1: S.3. Blootstellingsduur.- De kooien uit het water trekken, duidelijke ze van dreven materiaal en zet ze in het veld thermobox gevuld met rivierwater.
- Vervoer van de kooien naar het laboratorium en de mortaliteit en groei tarief-evaluatie beginnen.
Nota: In het geval van een temperatuurverschil van meer dan 5 ° C tussen de kooien en de labo-omgeving is het noodzakelijk om te laten de temperaturen egaliseren.
- Aparte FWPM jonge exemplaren uit zand
- Bereiden van een ronde container met een waterdiepte van 50 mm (voor elke kooi afzonderlijk) en een extra ronde container. Breng het zand uit de kooi in de ronde container. Gebruik een wervelende beweging te spoelen uit de lichtere deeltjes in een extra container.
- Proef van de inhoud van deze container geleidelijk en zoekt jonge exemplaren stapsgewijze met behulp van een pipet van Pasteur en een vergrootglas. Zet de jonge exemplaren in de petrischaal met behulp van de Pipet van Pasteur. Herhaal deze stap totdat de laatste juveniele is gevonden en dan nog eens 10 x na de eerste negatieve bevinding. Toevoegen na elke stap wassen schoon rivierwater naar de oorspronkelijke container met zand.
Opmerking: Vooral na de eerste spoelen, goed de inhoud en het ballast zoals fijne sediment en andere alluvia schoon.
- Evalueren van het experiment
- Controleren van de geschiktheid van elke jeugdige (zie stap 2.4.3 en 1.5.2) en Tel het aantal overlevenden.
- Neem een foto (zie stap 2.4.4.) van elk individu apart, hoewel dit betekent dat er is geen duidelijke identiteit van elk individu. Als alternatief, bulk foto's nemen en kies een subset van de 10 Best volwassen individuen van de eindresultaten.
Opmerking: Beide mogelijkheden hebben een gelijksoortige rapportage waarde. Mogelijkheid 1 heeft een beperking van een hogere werklast, maar ook het voordeel van de hoogste vergroting van de foto en dus ook grotere nauwkeurigheid.
- Het experiment voltooien
- Voer metingen in de software van de analyse van de afbeelding. Het experiment voltooien zoals gedaan in de kooien van de Maas (zie stap 1.10) met de volgende uitzondering: niet de groei (%) voor elke jeugdige evalueren maar evalueren van de groep als geheel in de zandige kooi-experiment.
Opmerking: Na het experiment, de overlevenden moeten worden teruggestuurd naar het fokprogramma
(Zie aanvullende bestand S.6.1. Seling van biologisch materiaal).
- Voer metingen in de software van de analyse van de afbeelding. Het experiment voltooien zoals gedaan in de kooien van de Maas (zie stap 1.10) met de volgende uitzondering: niet de groei (%) voor elke jeugdige evalueren maar evalueren van de groep als geheel in de zandige kooi-experiment.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De vier methoden van de bioindication (open water zandstrand kooien, binnen-bed zandstrand kooien, open water mesh kooien en binnen-bed mesh kooien) werden toegepast voor het onderzoek naar de geschiktheid van de voorwaarde milieu voor FWPMs in de bovenste Vltava River Basin (Bohemer Woud, Tsjechië Republiek). Deze rivier vertegenwoordigt één FWPM residuele stadsdeel in Centraal Europa19. Hier presenteren we een speciaal geselecteerde set van resultaten de belangrijkste aspecten van de vier methoden te illustreren. Verdere details zijn beschreven in een uitgebreide studie door Černá et al. 13.
De omgeving van de rivier werd bestudeerd op twee niveaus:
(I) een longitudinale rivier profiel was vertegenwoordigd door de hoofdstroom plaatsen (sites A - E) en zijrivieren van verschillende vervuiling stadia (sites R en V). De plaatsen waren getest zowel door zandstrand kooien mesh kooien geïnstalleerd in vrij stromend water. Daarnaast een grind hyporheic zone werd getest door binnen-bed sandy kooien in plaatsen, B, C en D.
(II) een hyporheic omgeving werd getest in de geselecteerde plaats C. De geschiktheid van verschillende substraten (zand, grind, stenen) werd getest door binnen-bed mesh kooien.
De groeisnelheid en de overlevingskansen van > 1-jarige jonge exemplaren (Zie aanvullende bestand 1: S.6. Biologisch materiaal) werden getest. Het experiment werd uitgevoerd om haar volle omvang in de zomer van 2014 en werd herhaald op een kleinere schaal op sommige plaatsen in de zomer van 2015. Binnen niveau (I), 2-6 sandy kooien met een minimum van 100 jonge exemplaren en 6 (2014) of 4 (2015) mesh kooien met 6 jonge exemplaren waren toegepast op elke plaats getest door de juiste methode. Binnen niveau (II), werden 7 mesh kooien met 6 jonge exemplaren geïnstalleerd in elke geteste omgeving. De belichtingstijd was één maand voor de mesh kooien en drie maanden voor de zandige kooien.
De statistische analyse werd uitgevoerd in R, versie 3.1.020. Kruskal-Wallis, Kruskal-Nemenyi en Wilcoxon-Mann-Whitney tests werden gebruikt. Voor gegevens met een normale verdeling, werd lineaire en kwadratische regressie uitgevoerd.
De plaatsen kunnen duidelijk worden onderscheiden op basis van de groei in het open water mesh kooien ondanks de hoge binnen-kooi variabiliteit, zelfs in verschillende groei-gunstige perioden (Figuur 3). In de groei-gunstiger blootstelling in 2015 (groei snelheid 19.3-41,8%), was een belangrijke trend ontdekt in de lengteprofiel waar de groei steeg stroomafwaarts (Kruskal-Wallis test, p < 0,001). Nog belangrijker is, was de overlevingskans op equivalente wijze hoog in beide seizoenen (van 83%) (Figuur 4A).
Aan de andere kant, de open water zandstrand kooien toonde een verschillende tendens tussen de hoofdstroom plaatsen in 2014: het groeitempo op jaarbasis steeg stroomafwaarts van de plaats een (52%) via de middelste plaats C (153%), en daarna daalde weer tot plaats E (46%) (een kwadratische regressie van absolute groei waarden: r2adj = 0.77, F2,13 = 25.66, d.f. = 16, p < 0,001). Deze trend werd ook in 2015 wanneer de grootste groei werd opgenomen in de middelste plaats C opnieuw bevestigd. Ook de absolute groei tarief waarden verschilt niet veel tussen 2014 en 2015. Aan de andere kant, verschilden de overlevingskans tussen de jaren, veel hoger wordt in 2015 (van 48% naar 72%) dan in 2014 (ongeveer 25%) (Figuur 4B).
Een effect van twee verschillende blootstelling methoden is ook duidelijk zichtbaar in de vervuilde zijrivier (plaats V). De zanderige kooien blootgesteld hier gedurende de drie maanden toonde 0% overleving, terwijl een 83% overlevingskans met enige groei werd opgenomen door open water mesh kooien blootstelling hier tijdens de 30 dagen.
Resultaten van het binnen-bed zandstrand kooien illustreren verschillende omstandigheden in de omgeving van de hyporheic in vergelijking met open water in de relevante plaatsen. Het groeitempo op jaarbasis in de sites van de hyporheal dan in open water altijd lager was, en de overlevingskansen was veel meer variabele (van bijna 50% tot 0%, figuur 4B).
Een studie van hyporheic microhabitats met behulp van de binnen-bed mesh kooien bleek een significant effect van de samenstelling van het substraat op jonge overleven. De beste voorwaarden waren opgenomen van de zuurstof-verzadigd steenachtige bodem (een overlevingskans bijna 100%) terwijl de ergste (een < 40% overleving tarief) werden aangegeven in slecht zuurstofrijk zand waar een zeer hoge variabiliteit in de overlevende werd ook vastgesteld. Hyporheic water oxygenatie, die herhaaldelijk werd gemeten tijdens het experiment, verklaart deze trend (Figuur 5).
Figuur 1. Bioindication gaas kooi met afzonderlijke ruimten. Zie aanvullende bestand 1 voor meer details. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2. Bioindication zandstrand kooi. Zie aanvullende bestand 1 voor meer informatie. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3. Individuele variabiliteit in jonge groeitempo op jaarbasis gezongen door open water mesh kooien in plaatsen B en E tijdens twee seizoenen. De middelen en de standaardafwijking worden beschreven voor elke mesh-kooi. De waarden zijn gebaseerd op de meting van 6 jonge exemplaren (of 4-5 jonge exemplaren als de sterfte > 0%) in de kooi van elke maaswijdte.
Figuur 4. Voorbeeld van de resultaten van een veld bioindication experimenteren met gaas en sandy kooien. (A) dit paneel toont voorbeeld resultaten van een veld bioindication experiment met mesh kooien. Een totaal van 6 plaatsen (B, C, D, E, R en V) in het stroomgebied van de rivier Vltava werden getest op 2 verschillende gelegenheden (in 2014 en 2015). De belichtingstijd was 30 dagen in het zomerseizoen. De plaatsen B - E vertegenwoordigen (in volgorde) een lengteprofiel van een ongeveer 20-km stretch van de rivier de main stream. Plaatsen R en V vertegenwoordigen profielen van 2 zijrivieren. Hoofdsteden markeren de dezelfde plaats, beide in deelvenster (A) en (B). Alle plaatsen zijn getest met open water mesh kooien. Daarnaast plaats C werd ook getest met behulp van binnen-bed mesh kooien geïnstalleerd in 3 verschillende soorten rivierbedding (Cs = zand, Cg = grind, Cst = stenen) in 2014. De kooien werden geïnstalleerd in 4-7-replicaties op elke site. 6 Beekparelmossel juvenielen van 1 + jaar oud werden gebruikt per mesh kooi. De gemiddelde groeicijfers worden gemarkeerd voor de 3 grootste personen (MAX 3) van elke geteste mesh cage (kolommen, linkeras) en de gemiddelde overlevingskans per mesh kooi (blauw punten, rechteras). (B) in dit deelvenster toont voorbeeld resultaten van een veld bioindication experimenteren met zandstrand kooien. Een totale of7 plaatsen (A, B, C, D, E, R en V) in het stroomgebied van de rivier Vltava werden getest op 2 verschillende gelegenheden (in 2014 en 2015). De belichtingstijd was 3 maanden in het zomerseizoen. Sites A - E vertegenwoordigen (in volgorde) een lengteprofiel van een lange strook van ongeveer 30 km van de rivier de main stream. Sites R en V vertegenwoordigen profielen van 2 zijrivieren. Hoofdsteden markeren de dezelfde plaats zowel in dit als in de vorige paneel. Alle plaatsen zijn getest met open water zandstrand kooien. Daarnaast plaatsen B, C en D werden ook getest met behulp van binnen-bed zandstrand kooien geïnstalleerd in hamer rivier bed substraat (Bg, Cg en Dg) in 2014. De kooien werden geïnstalleerd in 2-4 replicaties op elke site. Ten minste 100 Beekparelmossel jonge exemplaren waren aanwezig in elke zandstrand kooi. Het gemiddelde groeipercentage voor de 10 grootste personen (10 MAX) uit elke geteste zandstrand kooi (kolommen, linkeras) en de gemiddelde overlevingskans per zandstrand kooi (blauw punten, rechteras) zijn gemarkeerd. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 5. Zuurstof saturatie. Dit paneel toont de relatie tussen minimale waarden van zuurstof saturatie meer dan 30 dagen van mesh kooien blootstelling en de overlevende tarief per kooi in binnen-bed mesh kooien blootgesteld in verschillende bed microhabitats in 2014. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
| 2014 | 2015 | |||
| plaats | 3 maanden durende blootstelling van zandstrand kooien | 1-maand blootstelling van mesh kooien | 3 maanden durende blootstelling van zandstrand kooien | 1-maand blootstelling van mesh kooien |
| A | 13,9 | - | - | - |
| B | 14.4 | 13.4 | 13,9 | 17,5 |
| C | 15 | 13,8 | 14.4 | 18.3 |
| D | 15 | 13,8 | 14.3 | 18.3 |
| E | 15,5 | 14 | - | 18,7 |
| R | 13,5 | 12,8 | - | - |
| V | 14 | 13.2 | - | - |
Tabel 1. Gemiddelde oppervlakte watertemperatuur (° C) op de plaatsen tijdens de blootstelling in 2014 en 2015.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Belichtingstijd:
Zelfs één maand blootgesteld mesh kooien Toon een zichtbare groei als gevolg van verschillen tussen plaatsen (Figuur 3), dus ze zeer bruikbaar voor de snelle en gemakkelijke opsporing van de karakterisering van een plaats zijn. De relevantie van de resultaten is echter afhankelijk van de korte termijn staat van de voorwaarden, die kunnen schommelen. Korte neerslag gebeurtenissen kunnen met name een rol spelen. In tegenstelling, kan onvoorspelbare episodische verontreiniging niet altijd worden geregistreerd. In plaats V (figuur 4A) ontdekt chemie wateranalyse een korte golf van sterke ammonium verhoging13. Dit was waarschijnlijk verantwoordelijk voor de sterfte in de drie maanden durende blootgestelde zandstrand kooien maar deed geen afbreuk aan de 30-daagse blootgestelde mesh kooien.
Temperatuurschommelingen kunnen ook van invloed op de korte-termijn resultaten van de blootstelling. De gemiddelde temperatuur van één maand gedurende mesh kooi blootstelling verschilt tussen de jaren (tabel 1). De groei varieert ook waar hogere temperaturen werden vergezeld door hogere groeicijfers (Kruskal-Wallis test p < 0,001). Aan de andere kant, de gemiddelde watertemperatuur in de zelfde plaatsen tijdens de drie maanden durende zandstrand kooi blootstelling was zeer vergelijkbaar in beide jaren (tabel 1) en het groeitempo op jaarbasis niet aanzienlijk van elkaar verschillen (figuur 4B).
Voordelen en tekortkomingen van de beschreven methoden:
De blootstelling van een open water is relatief gemakkelijk uit te voeren maar van beperkte waarde voor habitat bioindication. De methode van open water mesh kooien is relatief oude16 en herhaaldelijk heeft ingezet met kleine wijzigingen10,11,12,13,21,22 , 23. deze kooien zijn echter niet beperkt door zuurstof, wier tekortkoming waarschijnlijk verantwoordelijk voor vele jonge doden in hyporheic voorwaarden is. Dus, open water mesh kooien prima overweg met goede ontwikkeling zelfs in plaatsen met verhoogde sterfte en een dalende groei in open water zandstrand kooien (plaats E) of een 100%-sterftecijfer in binnen-bed zandstrand kooien, per stadsdeel D in 2014 (figuur 4B). Blijkbaar, de open water mesh kooien Toon plaats groei potentieel, maar dit kan niet realistisch worden zoals het is afhankelijk van de werkelijke beschikbaarheid van hyporheic microhabitats binnen een plaats. Omdat het open water mesh kooien de mogelijkheid hoge overlevingskansen (figuur 4A), zelfs tot een 100% overleving tarief13hebben, kunnen ze dienen goed voor de bioindication van chronische toxiciteit (of acute toxiciteit indien op een gegeven moment verwacht wordt). Ook kunnen zij een nuttig voedsel bron aanwezigheid testen tot op zekere hoogte.
Als een nieuwe en ongewone methode simuleren de open water zandstrand kooien beter hyporheic habitat voorwaarden. Beweging van de jonge exemplaren tussen de zandkorrels is mogelijk in dit apparaat, die helpt bij het verminderen van de groei van de biofilm op de jonge shell. Een zuurstoftekort van de hyporheic kan worden veroorzaakt door de activiteit van microben koloniseren de zandkorrels; Dit effect kan ook gedeeltelijk optreden in kooien geplaatst boven de bodem van een rivier. Niettemin, als gevolg van de nodige periodieke reiniging van verstopping drifting materiaal uit een kooi, fijne sedimenten worden ook verwijderd en aldus de voorwaarden zijn gewijzigd ten opzichte van de habitat van de natuurlijke hyporheic. Dus, het groeitempo op jaarbasis kan ook worden beschouwd als plaats groei potentiële in open water zandstrand kooien. Dit is echter dichter bij de echte plaats geschiktheid dan mesh kooien in open water. Daarom lijken de longitudinale groei tarief verlopen opgenomen door zandstrand kooien (figuur 4B) ook worden meer plausibel en wijst op een meer geschikte stuk van de rivier. Bovendien is de mogelijkheid van jonge exemplaren en subadults fokken tot seksuele volwassenheid in zanderige kooien, geverifieerde9, zodat zandstrand kooien als een veilige methode voor fok- en biomonitoring gelijktijdig dienen kunnen.
Sandy kooien en mesh kooien in de binnen-bed positie geplaatst die het dichtst bij de werkelijke voorwaarden in een ondiepe hyporheal. Doordat van een minderjarige beweging, zandige kooien, in het bijzonder bieden beiden een verticale en horizontale verloop van enkele centimeter in omvang. Dit vermogen om te bewegen zou kunnen zijn zeer belangrijk voor het ontsnappen uit tijdelijke zuurstof-deficiënte micro-zones. Deze mogelijkheid ontbreekt in het binnen-bed mesh kooien. Een relatief hoog aantal bioindication eenheden daarom noodzakelijk, omdat de voorwaarden van de hyporheic zeer variabel13,24 (Figuur 5 zijn) en verliezen als gevolg van een ongeschikte locatie gemeenschappelijk zijn.
Kortom corresponderen de methoden van de bioindication die worden gebruikt in dit onderzoek met geacht jonge natuurlijke omstandigheden in de volgende volgorde:
1. open water mesh kooien,
2. open water zandstrand kooien,
3. binnen-bed mesh kooien,
4. binnen-bed zandstrand kooien.
De werklast per eenheid verhoogt in dezelfde volgorde. Bovendien, de jonge nummer dat vereist is voor een statistische testen van de resultaten verkregen stijgingen van de binnen-bed blootstelling ook. Het lijkt erop dat de binnen-bed zandstrand kooien vertegenwoordigen een duurder, maar nauwkeurige bioindication methode. Deze nieuwe methode moet meer in de toekomst testen en vergelijking met andere soorten studies van hyporheic gebaseerd op de Piëzometer metingen25,26. In het bijzonder, is er een noodzaak om te bestuderen van de mate van overeenstemming met behulp van een directe sonde voor het meten van fysisch-chemische omstandigheden in de kooien en in de omgeving van hyporheic.
Het aantal personen, gemeten in één kooi:
In vergelijking met mesh kooien, is het niet mogelijk voor het meten van de toename van de groei van specifieke jonge exemplaren in zanderige kooien als er is geen informatie die op de persoon die uit de input set die men in de uitvoer is. Het is nodig om te werken met een gemiddelde waarde. Als geteld voor alle individuen, kunnen deze waarde zeer laag als gevolg van een aantal zeer langzaam groeiende specimens; echter, een paar individuen kan zeer snel groeien (groei jumpers). Dergelijke ongelijke groei is typisch voor mosselen27. De verscheidenheid van de groei van jonge exemplaren stijgt met toenemende blootstellingstijd en grote verschillen kunnen optreden, met name in groei-gunstige seizoenen. Ook een lange blootstelling leidt tot grote sterftecijfers in de mesh kooien (voor een overzicht zie Lavictoire, Moorkens, Ramsey, Sinclair en Sweeting28), zodat we kunnen werken met een aanzienlijk lager aantal personen aan het einde van het experiment in vergelijking met de jonge exemplaren set input. Alleen de verschillende best groeiende jonge exemplaren te meten, is een mogelijke methode.
De ervaring van FWPM fokken in het Tsjechisch-actieplan voor zoetwater parel Mossel9,29, evenals de resultaten van experimenten op zee tweekleppigen30,31, suggereert dat groei-deficiënte juveniele tweekleppigen hebben een hoog sterftecijfer, en er is slechts een verwaarloosbare kans van hun leven naar volwassenheid. In tegenstelling, groei jumpers hebben een hogere overlevingskans en ze zijn van cruciaal belang voor een herstel van de bevolking. De parameter 10 MAX (de 10 meeste-snel groeiende individuen) houdt rekening met de groei-jumpers en kan verhogen de informatieve waarde van het experiment, zelfs indien hoge mortaliteit plaatsvindt (figuur 4B, seizoen 2014). Opgemerkt moet worden dat de schatting van de groei volgens deze methode verkregen mag niet te verkeerd stellig. Het kan alleen worden enigszins onderschat omdat veel van de grootste jonge exemplaren aan het einde van het experiment zou zijn gegroeid een beetje meer in dit geval. Ook is de werklast minder als slechts 10 personen worden geëvalueerd. Ook een meting van drie maximaal groeiende personen (MAX 3) bleek te zijn passende in mesh kooien, waardoor de invloed van langzaam groeiende, niet-perspectief individuen, die kon het echte beeld van de site groeipotentieel bias.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Michal Bílý en Ondřej P. Simon werden ondersteund door subsidies van de Tsjechische Universiteit van Life Science [interne Grant Agentschap van faculteit Ruimtelijke Wetenschappen, CULS Praag (42110 1312 3175 (20164236))]. Ondersteuning voor Karel Douda kwam uit de Tsjechische Science Foundation (13-05872S). Gegevens over de bioindication en het huidige exemplaar van parel mosselen zijn verzameld tijdens de uitvoering van het actieplan voor de Tsjechische voor zoetwater parel mosselen beheerd door het Agentschap instandhouding natuur van Tsjechië, dat wordt gefinancierd door de regering van de Tsjechië en is beschikbaar op
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| biological material maintenance and care | |||
| Freshwater pearl mussel juveniles | any | NA | from a FWPM breeding programme |
| plastic boxes | any | NA | |
| thermobox | MERCI | 212,070,600,030 | There are many possibilities. This is one example only. |
| field thermobox (ca25 l) | any | NA | cold box (insulated box) commonly used for food transport |
| river water | any | NA | |
| Petri dishes | any | NA | |
| plastic Pasteur pipettes with balloon bulb (droppers) | any | NA | hole diameter 1 mm |
| hydrogen peroxide | any | NA | |
| plastic container (ca 50 l) for river water | any | NA | |
| plastic tea strainer | any | NA | commonly used in kitchen |
| mesh cages construction | |||
| main plastic bodies | any | NA | |
| plactic covers | any | NA | |
| special technical sieves 340 µm | Silk &Progress | UHELON 20 T | |
| special technical sieves 100 µm | Silk &Progress | UHELON 67 M | |
| rubber hose (diameter 5.5 mm) | any | NA | |
| steel bolts | any | NA | |
| steel nuts | any | NA | |
| spanner | any | NA | |
| steel spikes | any | NA | |
| pliers | any | NA | |
| beakers | any | NA | |
| plastic dishes (ca. 25x15x3-5cm) | any | NA | |
| squirt bottle | any | NA | |
| field protocols | any | NA | |
| stationery | any | NA | |
| plastic container | any | NA | |
| string | any | NA | |
| hammer | any | NA | |
| sandy cages construction and use | |||
| sieve 1 mm | any | NA | |
| sieve 2 mm | any | NA | |
| special technical sieves 340 µm | Silk &Progress | UHELON 20 T | |
| plastic boxes with tight-fitting lid | any | NA | |
| hot melt adhesive | any | NA | |
| plastic box (ca 250 x 150 x 100 cm) | |||
| big plastic box (ca 25 l) | any | NA | |
| flat stone | any | NA | |
| net | any | NA | |
| river sand | any | NA | |
| round containers | any | NA | |
| magnifying glasses | Carson | Carson CP 60 | There ar many possibilities. This is one example only |
| cages installation and maintenance | |||
| field temperature dataloggers | ONSET | UA-001-64 | http://www.onsetcomp.com/products/data-loggers/ua-001-64 |
| spade | any | NA | |
| toothbrush | any | NA | |
| experiment evaluation | |||
| trinocular dissecting zoom stereo microscope | Bresser optic | ICD 10x-160x | There are many possibilities. This is one example only. |
| digital camera/ electronic eyepiece | Bresser optic | MikroCamLab 5M | There are many possibilities. This is one example only. |
| Calibration gird | Am Scope | SKU: MR100 | There are many possibilities. This is one example only. |
| external power source with two movable light guides | Arsenal | K1309010150021 | There are many possibilities. This is one example only. |
| Image software | ImageJ software | There are many possibilities. This is one example only. | |
| table processor | MS excel | There are many possibilities. This is one example only. |
References
- Goldberg, E. D. The mussel watch-a first step in global marine monitoring. Marine Pollution Bulletin. 6 (7), 111-114 (1975).
- Vaughn, C. C. Ecosystem services provided by freshwater mussels. Hydrobiologia. , In Press (2017).
- Lopes-Lima, M., et al. Conservation status of freshwater mussels in Europe: state of the art and future challenges. Biological Reviews. 92 (1), 572-607 (2017).
- Strayer, D. L., Malcom, H. M. Causes of recruitment failure in freshwater mussel populations in southeastern New York. Ecological Applications. 22 (6), 1780-1790 (2012).
- Douda, K. Effects of nitrate nitrogen pollution on Central European unionid bivalves revealed by distributional data and acute toxicity testing. Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 20 (2), 189-197 (2010).
- Modesto, V., et al. Fish and mussels: importance of fish for freshwater mussel conservation. Fish and Fisheries. , In Press (2017).
- Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. Bauer, G., Wächtler, K. 145, Ecological Studies. 1-394 (2001).
- Neves, R. J., Widlak, J. C. Habitat ecology of juvenile fresh-water mussels (Bivalvia, Unionidae) in a headwater stream in Virginia. American Malacological Bulletin. 5, 1-7 (1987).
- Švanyga, J., Simon, O. P., Mináriková, T., Spisar, O., Bílý, M. Záchranný program pro perlorodku říční v ČR (Action plan for the endangered freshwater pearl mussel in the Czech Republic). , NCA CR. Prague, Czech Republic. (2013).
- Schmidt, C., Vandré, R. Ten years of experience in the rearing of young freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera). Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 20 (7), 735-747 (2010).
- Gum, B., Lange, M., Geist, J. A critical reflection on the success of rearing and culturing juvenile freshwater mussels with a focus on the endangered freshwater pearl mussel (Margaritifera margaritifera L.). Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 21 (7), 743-751 (2011).
- Denic, M., Taeubert, J. E., Lange, M., Thielen, F., Scheder, C., Gumpinger, C., Geist, J. Influence of stock origin and environmental conditions on the survival and growth of juvenile freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera) in a cross-exposure experiment. Limnologica. 50, 67-74 (2015).
- Černá, M., Simon, O. P., Bílý, M., Douda, K., Dort, B., Galová, M., Volfová, M. Within-river variation in growth and survival of juvenile freshwater pearl mussels assessed by in situ exposure methods. Hydrobiologia. , In Press (2017).
- Denic, M., Taeubert, J. E. Trophic relationships between the larvae of two freshwater mussels and their fish hosts. Invertebrate Biology. 134 (2), 129-135 (2015).
- Douda, K. Host-dependent vitality of juvenile freshwater mussels: implications for breeding programs and host evaluation. Aquaculture. 445, 5-10 (2015).
- Buddensiek, V. The culture of juvenile freshwater pearl mussels Margaritifera margaritifera L. in cages: a contribution to conservation programmes and the knowledge of habitat requirements. Biological Conservation. 74 (1), 33-40 (1995).
- Hruška, J. Experience of semi-natural breeding program of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmaßnahmen. , Albert-Ludwigs Universität: Freiburg. Kongressband. WWA Hof 69-75 (2001).
- Barnhart, M. C. Buckets of muckets: a compact system for rearing juvenile freshwater mussels. Aquaculture. 254 (1), 227-233 (2006).
- Simon, O. P., Vaníčková, I., Bílý, M., Douda, K., Patzenhauerová, H., Hruška, J., Peltánová, A. The status of freshwater pearl mussel in the Czech Republic: several successfully rejuvenated populations but the absence of natural reproduction. Limnologica. 50, 11-20 (2015).
- R Core Team. A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. Available from: https://www.r-project.org/ (2013).
- Hastie, L. C., Yang, M. R. Conservation of the freshwater pearl mussel I: captive breeding techniques. 2, Natural England. Peterborough, UK. Conserving Natura 2000 Rivers Conservation Techniques Series No. 2 (2003).
- Hruška, J. Nahrungsansprüche der Flußperlmuschel und deren halbnatürliche Aufzucht in der Tschechischen Republik. Heldia. 4 (6), 69-79 (1999).
- Scheder, C., Lerchegger, B., Jung, M., Csar, D., Gumpinger, C. Practical experience in the rearing of freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera): advantages of a work-saving infection approach, survival, and growth of early life stages. Hydrobiologia. 735 (1), 203-212 (2014).
- Braun, A., Auerswald, K., Geist, J. Drivers and spatio-temporal extent of hyporheic patch variation: implications for sampling. PLoS ONE. 7 (7), e42046 (2012).
- Franken, R. J. M., Storey, R. G., Williams, D. D. Biological, chemical and physical characteristics of downwelling and upwelling zones in the hyporheic zone of a north-temperate stream. Hydrobiologia. , 183-195 (2001).
- Roley, S. S., Tank, J. L. Pore water physicochemical constraints on the endangered clubshell mussel (Pleurobema clava). Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 73 (12), 1712-1722 (2016).
- Larson, J. H., Eckert, N. L., Bartsch, M. R. Intrinsic variability in shell and soft tissue growth of the freshwater mussel Lampsilis siliquoidea. PLoS ONE. 9 (11), e112252 (2014).
- Lavictoire, L., Moorkens, E., Ramsey, A. D., Sinclair, W., Sweeting, R. A. Effects of substrate size and cleaning regime on growth and survival of captive-bred juvenile freshwater pearl mussels, Margaritifera (Linnaeus, 1758). Hydrobiologia. 766 (1), 89-102 (2015).
- Hruška, J. Experience of semi-natural breeding programme of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmassnahmen. , 69-75 (2000).
- Bayne, B. L. Physiological components of growth differences between individual oysters (Crassostrea gigas) and a comparison with Saccostrea commercialis. Physiological and Biochemical Zoology. 72 (6), 705-713 (1999).
- Tamayo, D., Azpeitia, K., Markaide, P., Navarro, E., Ibarrola, I. Food regime modulates physiological processes underlying size differentiation in juvenile intertidal mussels Mytilus galloprovincialis. Marine Biology. 163 (6), (2016).
