Summary
이 프로토콜 분석 blotting 점이 상대적인 양의 Aβ 올리고 머를 평가 하는 합성 펩 티 드에 생체 외에서 에서 Aβ 올리고 준비 하는 방법을 설명 합니다.
Abstract
Β-아 밀 로이드 (Aβ)은 자체 집계로 조립 하는 본질적인 추세를 가진 소수 성 펩 티 드 이다. 다양 한 집계 중 Aβ 올리고 머 최고의 neurotoxin Alzheimer의 질병 (광고)의 진행으로 널리 인정 하 고 광고의 병 인에 중요 한 이벤트로 간주 됩니다. 따라서, Aβ 올리고 머 저 해제 수 neurodegeneration을 방지 하 고 수정 하는 질병으로 발전 될 가능성이 광고의 치료. 그러나, 다른 대형 프로토콜 Aβ 올리고 머의 다른 특성을 가진 올리고 발생할 수 있습니다. 또한, 효과적으로 화면 Aβ1-42 올리고 머 억제제를 많은 방법이 되지 있다. A11 항 체는 항 병렬 β 장 구조와 독성 Aβ1-42 올리고 머의 하위 집합으로 반응 수 있습니다. 이 프로토콜에는 합성 Aβ1-42 펩 티 드에서 에 체 외에서 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머-풍부한 예제를 준비 하 고 도트 blotting에 의해 상대적 양의 샘플에서 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머를 평가 하는 방법 설명 A11 Aβ1-42를 사용 하 여 분석-특정 6E10 항 체. 이 프로토콜을 사용 하 여, 억제제 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머의 수 또한 상영 반 정량적 실험 결과에서.
Introduction
Alzheimer의 질병 (광고) 노인 전세계1에 영향을 미치는 가장 중요 한 신경 퇴행 성 질환 중 하나입니다. 그것은 널리 β 아 밀 로이드 (Aβ)의 비정상적인 집계 광고의 주요 병 적인 요인이 될 수 있습니다 허용 됩니다. Aβ 집계 광고 환자의 두뇌에서 생물 학적 마커 중 치 패의 주요 구성 요소는. 또한, Aβ 집계, 특히 올리고 포함 하 여 광고 진행으로 신경 죽음의 원인이 될 수 있습니다 강력한 neurotoxicity 생산. 따라서, Aβ 올리고 머 형성의 저해 되지 않도록 neurodegeneration, 그리고 Aβ 올리고 머 저 해제 수정 하는 질병으로 발전 될 수 있는 광고의 치료. 많은 연구 올리고 시험관을 형성, 형태학 및 인공 Aβ 올리고의 구조를 탐구 하 고 생체 외에서 모델2,3 를 사용 하 여 Aβ 올리고 머의 억제제를 조사 하는 합성 Aβ 펩 티 드를 사용 , 그러나 4., Aβ 올리고 머의 형성 프로토콜 다른 시험관에 다른 연구 그룹 사이에서 비교할 수 없는 결과가 발생할 수 있습니다 다른 형태학 상 특성을 가진 올리고 머를 발생할 수 있습니다. 따라서, Aβ 올리고 머에 대 한 표준 형성 프로토콜 절실히 필요 합니다.
지금까지 많은 방법은 직접 검색 Aβ 올리고 보고 되었습니다. 전송 전자 현미경 (TEM), 비 변성 시키기 젤 전기 이동 법, 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA), 및 점 분석 blotting 사용할 수 있습니다 금액 또는 Aβ 올리고 머 생체 외에서5, 의 형태를 검사 하 6. 예를 들어 Aβ 올리고 머의 구조와 형태 TEM에서 관찰 될 수 있다. Aβ 집계의 분자 크기 및 상대 금액 비 변성 시키기 젤 전기 이동 법에 의해 측정 될 수 있는. ELISA 혈 청, 플라스마, 및 뇌 조직에서 추출 물에서 Aβ 올리고 머를 결정 하기 위해 사용 될 수 있습니다. 마지막으로, 분석, 검색, 사용 되는 기술 blotting 점 분석 및 단백질, 식별 사용할 수 올리고 머 및 Aβ 관련 항 체의 도움으로 다른 샘플 올리고 머 Aβ의 상대 농도 평가 하. 또한, 분석 결과 더 럽 히는 점이 젤 전기 이동 법 및 젤에 대 한 더 럽 히 절차 필요 하지 않습니다 상당한 시간 절약을 제공 합니다. 따라서,이 분석 결과 화면 잠재적인 Aβ 올리고 머 억제제를 일반적으로 사용 됩니다. 이 프로토콜의 전반적인 목표 분석, blotting 점으로 화면 Aβ 올리고 머를 Aβ1-42 올리고 머의 양을 분석 하는 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플 준비 하 비교적 간단 하 고 신뢰할 수 있는, 재현성 메서드를 설명 하는 억제제 반 정량적 실험 결과 사용 하 여입니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. 솔루션 준비
주: 시 소스에 대 한 재료의 표를 참조 하십시오.
- 이중 증 류 물 100 mL에 BSA의 5 g을 추가 하 여 5% 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 솔루션을 준비 합니다. Vortexing에 의해 그들을 완전히 혼합 그들. 최대 1 개월 4 ° C에서 솔루션을 저장 합니다.
- 5 %BSA 솔루션의 10 mL을 항 체 재고 솔루션의 10 µ L을 추가 하 여 올리고 머 방지 항 체 A11 솔루션 (1:1, 000)를 준비 합니다. Vortexing에 의해 그들을 완전히 혼합 그들. 최대 1 개월 4 ° C에서 솔루션을 저장 합니다.
- 5 %BSA 솔루션의 10 mL을 항 체 재고 솔루션의 10 µ L을 추가 하 여 안티-Aβ 항 체 6E10 솔루션 (1:1, 000)를 준비 합니다. Vortexing에 의해 그들을 완전히 혼합. 최대 1 개월 4 ° C에서 솔루션을 저장 합니다.
- 5 %BSA 솔루션의 10 mL을 항 체 재고 솔루션의 10 µ L을 추가 하 여 안티 원 올리고 머 항 체 OC 솔루션 (1:1, 000)를 준비 합니다. Vortexing에 의해 그들을 완전히 혼합. 최대 1 개월 4 ° C에서 솔루션을 저장 합니다.
- 이중 증 류 물 1000 mL에 트리 스 베이스의와 NaCl의 88 g 24 g을 추가 하 여 Tris 버퍼 염 분 (TBS) 재고 솔루션을 준비 합니다. PH 7.4에 조정 합니다. 최대 3 개월까지 4 ° C에서 솔루션을 저장 합니다.
- 준비는 Tris 버퍼 식 염 수와 트윈-20 (TBST) 솔루션 TBS의 100 mL에 트윈-20의 1 mL을 추가 하 여 재고 솔루션 및 900 mL 이중 증 류 물.
- 과산화 효소 (HRP) 염소-토끼 IgG (H + L) TBST 용액 10 ml와 사비의 추가 10 µ L에 의해 이차 항 체 솔루션을 준비 합니다. Vortexing에 의해 그들을 완전히 혼합 그들. 최대 1 개월 4 ° C에서 솔루션을 저장 합니다.
- 3.68 g 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 10 mM curcumin 재고 솔루션의 1 mL에 curcumin의 분해.
- 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-프로 판 올 (HFIP) 2.5 mg/mL Aβ 모노 머 솔루션의 2 mL에 합성 Aβ1-42 의 5 mg을 디졸브. 그것은 실내 온도 (25 ° C)에서 20 분 하 게 100 µ L aliquots에 대 한 놓고-20 ° C에서 최대 6 개월까지 저장 합니다.
참고:이 절차를 가능한 한 빨리 실행 되어야 합니다. 피 펫 팁 정확한 pipetting 되도록 차단 한다. - 1: 1의 볼륨 비율 ECL 액체 A와 B를 혼합 하 여 electrochemiluminescence (ECL) 액체를 준비 합니다. 이 솔루션은 그냥 사용 하기 전에 준비 되어야 한다.
2. 샘플 준비
참고: 분석 blotting 점 전에 2 일 샘플 준비를 수행 합니다.
- Aβ1-42 단위체 솔루션;의 튜브에 이중 증 류 물 900 µ L를 추가 Aβ1-42 의 농도 0.25 mg/mL를 될 것입니다. 20 분 동안 실내 온도에 있는 혼합물을 놓습니다.
- 볼륨은 약 850 µ L까지 고 순도 질소 가스와 함께 솔루션을 증발. Aβ1-42 솔루션의 농도 0.29 mg/mL에 대 한 것입니다.
참고: 솔루션 HFIP는 완전히 증발 되도록 때때로 동요 되어야 한다. 일반적으로, 증발의 30 분 후 잔여 솔루션의 볼륨은 약 850 µ L. - Curcumin 재고 솔루션 curcumin 작업 솔루션 (0.2와 2 µ M)을 두 번 증 류 물으로 희석. 믹스 Aβ1-42솔루션, curcumin 볼륨 비율 1: 1의 솔루션을 작동. Curcumin의 최종 농도 0.1 1 µ M를 될 것입니다.
참고: 잠재적인 올리고 머 저 해제는 Aβ1-42 솔루션 필요한 경우 어떤 비율에서 섞일 수 있다. - 마그네틱 교 반기에 솔루션을 지속적으로 흔들어 ( 재료의 표참조).
- 자석 교 반기에 플라스틱 분배기 상자를 수정 합니다. 장소 2 자석 막대 상자 2 코너에서 저 어 고 상자 중심에서 샘플 튜브를 배치.
- 48 h에 대 한 실 온 (25 ° C)에서 상자를 흔들어.
참고: 자석 교 반기 속도 약 60 rpm.
- 4 ° C에서 15 분 동안 튜브 원심 및 18000 x g.는 상쾌한을 수집 합니다.
3. 점 Blotting 분석
참고: 모든 외피 수평 통에서 수행 됩니다.
- 니트로 막 1 cm 넓은 스트립으로 잘라.
참고: 니트로 막의 폭 실험 필요에 따라 조정할 수 있습니다. - 2 지구 (지구 1와 2) 0.5 cm에서 각 포인트 간격에 균등 하 게 2 µ L 샘플을 놓습니다.
- 밴드에 물방울이 건조 될 때까지 5 분 동안 실내 온도에 스트립을 놓습니다.
- 실 온에서 30 분 동안 5 %BSA 솔루션 스트립을 품 어.
- 실 온에서 5 분 동안 TBST 솔루션 스트립을 씻어.
- TBST 솔루션 발음 실 온에서 1 h, 스트립 1 올리고 머 방지 항 체 A11 솔루션을 품 어 및 안티-Aβ 항 체 6E10 솔루션 2 스트립.
- 씻어 TBST 솔루션 스트립 3 시간, 실 온에서 5 분 동안 각 시간.
- TBST 솔루션 발음 실 온에서 40 분 이차 항 체 솔루션 스트립을 품 어.
- 씻어 TBST 솔루션 스트립 3 시간, 실 온에서 5 분 동안 각 시간.
- 스트립의 표면에 혼합된 ECL 액체를 균등 하 게 적용 됩니다. 이미징 시스템 자동 화학에 스트립 노출 ( 재료의 표참조).
참고: 일반적으로, ECL 액체의 300 µ L 충분 한 막 이다. 막 노출 동안 축축한 유지 되어야 한다. 노출 시간 이미징 시스템에 의해 자동으로 계산 됩니다. - 반 정량적 결과 얻기 위해 ImageJ (국립 보건원) 또는 다른 이미지 처리 소프트웨어를 사용 하 여 회색 음영 분석을 할.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Aβ1-42 단위체 준비 후 Aβ1-42 올리고 머를 형성할 수 있습니다 여부를 조사 하기 가장 분석 사용 되었다. 아니 볼 수 집계는 HFIP 해산 Aβ1-42 단위체 샘플 (그림 1A)에서 관찰 되었다. 또한, 주위의 직경을 가진 주로 구형 집계 10-80 nm에서에서 관찰 되었다 Aβ1-42 샘플 떨고, 48 h 후 Aβ1-42 준비 (그림 1B) 후 올리고 형성 제안.
그림 1 . Aβ1-42 단위체와 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플의 TEM 분석. HFIP 녹 Aβ1-42 단위체 샘플 (10 µ M) 및이 프로토콜에 따라 준비 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플 (10 µ M) 가장에 의해 시험 되었다. 눈금 막대 = 200 nm. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
또한, 점 분석 blotting 상대적 양의 샘플에서 Aβ1-42 올리고 머를 평가 하기 위해 사용 되었다. A11 항 체 반 평행 β 장 구조와 독성 Aβ 올리고 머의 하위 집합으로 반응 수 있습니다. 병렬 레지스터에 β 장 구조와 원 집계 OC 항 체 반응. 이러한 항 체를 사용 하 여 우리는 A11-긍정적인 Aβ1-42 시연 올리고, 하지만 하지 OC-긍정적인 Aβ1-42 원 집계, 주로 프로토콜 (에 따르면 준비 했다 Aβ1-42 올리고 머-풍부한 예제에 등장 그림 2)입니다. 안티-Aβ 항 체 6E10를 사용 하 여 Aβ1-42 펩 티 드의 수 HFIP 해산 Aβ1-42 단위체 샘플 및 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플 (그림 2)에서 유사 했다 관찰 합니다.
그림 2 . 점 더 럽 히 분석 Aβ1-42 단위체와 Aβ1-42 의 올리고 머 풍부한 샘플. (A)는 HFIP 해산 Aβ1-42 단위체 샘플 (10 µ M) 및이 프로토콜에 따라 준비 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플 (10 µ M) 도트 blotting A11, 안티 원 올리고 머 방지 항 체를 사용 하 여 분석에 의해 시험 되었다 올리고 머 항 OC, 및 안티-Aβ 항 체 6E10 (B - D) 회색조의 반 정량적 분석 ImageJ에 의해 수행 되었다. 데이터를 컨트롤에 대 한 비율로 표시 했다 평균 ± SEM의 3 독립적인 실험; *** p < 0.001 대 Aβ1-42 단위체 그룹 (ANOVA 및 t-테스트). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
이 프로토콜의 Aβ1-42 올리고, curcumin, 화면 억제제를 사용할 수 있다면 추가 조사 하기 알려진된 Aβ 올리고 머 억제제 사용 되었다. 우리 curcumin와 공동 화 발견 (0.1-1 µ M) curcumin 공동 incubated Aβ1-42 올리고 머 샘플에서 A11의 감소 얼룩에 의해 입증으로 상대 양의 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머, 현저 하 게 감소는 일반 incubated Aβ1-42 올리고 머-풍부한 예제 (그림 3). 같은 조건, curcumin에 (0.1-1 µ M) 모든 샘플 (그림 3)에 6E10의 얼룩으로 Aβ1-42 펩 티 드의 수를 변경 하지 않았다.
그림 3 . 점 더 럽 히 분석 curcumin 공동 incubated Aβ1-42 의 올리고 머 풍부한 샘플. (A) Aβ HFIP 해산1-42 단위체 (10 µ M)이이 프로토콜에 따라 준비 되었고 incubated curcumin의 유무에 관계 없이 (0, 0.1, 1 µ M)에서 48 h 동안 흔들어. 샘플 blotting A11 및 6E10를 사용 하 여 분석 하는 점으로 시험 되었다. (B) 반 양적 회색조 분석 ImageJ에 의해 수행 되었다. 데이터를 컨트롤에 대 한 비율로 표시 했다 평균 ± SEM의 3 독립적인 실험; *** p < 0.001 대 Aβ1-42 혼자 그룹 (ANOVA와 Tukey의 테스트). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
올리고 머 형성 확인, 우리는 또한 비 변성 시키기 젤을 사용 했습니다. 우리는 그 올리고 머를 발견 (> 4 KD) Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플 대부분 모노 머 동안에 존재 했다 (4 KD) Aβ1-42 단위체 샘플 (그림 S1)에서 발견 되었다.
우리 Aβ1-42 샘플의 펠 릿 하 고 상쾌한 Aβ 집계 조사 했습니다. 후 보육의 48 h, Aβ1-42 올리고 머 하지만 없습니다 Aβ1-42 원 집계 A11, OC, 그리고 6E10 항 체 (그림 S2)에 의해 결정 되는 샘플의 상쾌한에서 발견 됐다. 동일한 조건에서 Aβ1-42 원 집계 하지만 하지 Aβ1-42 올리고 샘플 (그림 S2)의 펠 릿에서 발견 됐다.
우리는 또한 가장을 사용 하 여 Aβ1-42 curcumin 처리 샘플의 형태를 조사 했다. Curcumin 처리 샘플 그 curcumin Aβ1-42 올리고 머 (그림 S3)의 양을 줄일 수 있는 제안 몇 구형 관광 명소를 포함 되어 있습니다.
그림 S1 . Aβ1-42 단위체와 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플의 젤 전기 이동 법 분석 비 변성 시키기. Aβ1-42 HFIP 해산 단위체 샘플 (10 µ M)와 Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플 (5 µ M, 낮은, 높은 10 µ M)이이 프로토콜에 따라 준비 비 변성 시키기 젤 전기 이동 법으로 안티 Aβ 항 체 6E10를 사용 하 여 시험 되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 S2 . Aβ1-42 솔루션의 상쾌한 포함 주로 올리고 머, 하지만 하지 원 집계. Aβ1-42 솔루션 (50 µ L), 48 h 동안 흔들어 후 10 분에 대 한 18000 x g에서 centrifuged 했다. 상쾌한 수집 그리고 펠 릿 이중 증 류 물 850 µ L에 다시 녹아. 펠 릿 하 고 상쾌한 더 OC, A11, 그리고 6E10 항 체를 사용 하 여 점 오 점 분석에 의해 시험 되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 S3 . Curcumin의 TEM 분석 공동 incubated Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플. HFIP 녹 Aβ1-42 단위체 (10 µ M)이이 프로토콜에 따라 준비 하 고 48 h 동안 흔들어 아래 1 µ M curcumin와 함께 알을 품을 했다. 샘플은 가장에 의해 시험 되었다. 눈금 막대 = 100 nm. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
이 프로토콜에서 우리 Aβ1-42 올리고 머를 포함 하는 샘플을 준비 하 고 분석 blotting 점이 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머의 양을 분석 하는 방법을 보고 있다. Aβ1-42 올리고 머 풍부한 샘플의 준비에 대 한 우리의 방법을 아주 간단 하 고 신뢰할 수 있는, 재현할 수 있지만, 지금도 발견 될 몇 가지 포인트. 첫째, HFIP는 합성 Aβ1-42 펩 티 드를 분해 하는 데 사용 됩니다. 집계 Aβ1-42 펩 티 드 HFIP 솔루션에 단위체로 분해 수 있습니다. 그러나, HFIP volatilize, 쉽게 이며 HFIP의 점도 매우 낮습니다. 따라서, Aβ1-42 펩 티 드 HFIP으로 해산 한다 고 HFIP 솔루션 aliquoted 작업 중 HFIP의 잠재적인 손실을 줄이기 위해 가능한 한 빨리 해야 합니다. 또한,이 절차에서 정확한 pipetting 되도록 피 펫 팁 잘라 되어야 합니다. 둘째, 고 순도 질소 가스는 HFIP 솔루션에서 증발 하는 데 사용 됩니다. 이 절차 동안, Aβ1-42 솔루션 HFIP는 완전히 증발 될 수 있도록 때때로 동요 되어야 한다. 이 절차의 끝에, HPIF의 냄새는 솔루션에서 감지 되지 않을 한다. 일반적으로, 증발의 30 분 미만 0.1 %HFIP 농도 감소 시킨다. 이 농도에서 HFIP Aβ1-427의 구조 전환 변경 않기로 보고 됩니다. 셋째, Aβ1-42 올리고 머를 포함 하는 샘플을 준비 하는 때 액체의 최소 볼륨 커야 이상 50 µ L. 그렇지 않으면, 샘플 튜브의 벽에 연결 하는 작은 작은 물방울으로 피해 가능성이 있습니다. 또한, Aβ1-42 단위체는 철저 한 혼합 없이 올리고 머를 형성할 수 없습니다.
여기에 설명 된 대로 Aβ1-42 올리고 머-풍부한 예제를 준비 하는 프로토콜은 다른 그룹에 사용 되는 몇 가지 프로토콜에서 약간 다릅니다. 예를 들어 일부 연구, HFIP 솔루션8,9이중 증 류 물을 추가 하기 전에 증발 했다. 그러나, 같은 조건에서 Aβ1-42 펩 티 드 솔루션으로 분해 하기 어려운 작은 시트 양식 수 있습니다. 따라서, 우리는 먼저, 이중 증 류 물의 추가 하 고 다음에 HFIP 질소 가스에 의해 증발 하 선택. 가장 중요 한 것은,이 프로토콜에 의해 준비의 oligomeric 모양은 가장에 의해 확인 됩니다. 또한, Aβ1-42 올리고 머가이 프로토콜에 의해 형성 된 수 SH SY5Y 세포와 기본 hippocampal 신경 neurotoxicity를 유발 하 고 제안 하는 마우스의 hippocampal 영역으로 주입 후 인지 성능을 감소 Aβ1-42 준비 하는 올리고 머는 매우 독성5,10. 이러한 결과 이전 연구11와 일치.
A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머 점 더 럽 히 분석 하 여 평가 하이 프로토콜은 여전히 몇 가지 단점이 있다. 첫째, 사용 하 여 수동 샘플링, 그것 쉽지 않다 작은 물방울 크기가 균일 유지 하. 둘째, 분석 blotting 도트 반 양적 이지만 하지 양적 방법 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머, ELISA, 같은 다른 방법을 제안 금액을 측정 하는 경우 필요 양의 Aβ1-42의 정확한 평가 올리고 머 필요 하다. 셋째, 마약 거짓 긍정적인 결과 항 체에 반응 수 있습니다.
일반적으로, 우리 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머를 포함 하는 샘플을 준비 하 고 A11-긍정적인 Aβ1-42 올리고 머의 양을 분석 결과 blotting 도트를 사용 하 여 분석 하는 신뢰할 수 있는 프로토콜을 제공. 이 프로토콜, 잠재적인 Aβ1-42 올리고 머를 사용 하 여 억제제 치료 광고 잠재력을 효과적으로 상영 수도 있습니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (U1503223, 81673407, 21475131), 비영리 기술의 강성 (2016 C 37110), 닝 보 국제 과학 및 기술에 적용 하는 연구 프로젝트에서에서 교부 금에 의해 지원 되었다 협력 프로젝트 (2014 D 10019), 생명 과학 및 의료 (2015 C 110026)의 닝 보 시 혁신 팀, 닝 보 과학 및 일반적인 부 (2017 C 50042)에 대 한 기술 프로젝트, 리 투 합 입 어 턱 케네스 리 해양 의약품 개발 기금, 그리고 닝 보 대학에서 K. C. 웡 마그나 기금.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
