여기, 우리는 열 nanoimprinting 통해 그라데이션 nanopattern 판의 제조와는 nanostructures 인간의 내 피 조상 세포의 응답을 검사 하는 방법에 대 한 프로토콜을 제시. 설명 된 기술을 사용 하 여 물리적 자극에 의해 셀 동작을 조작할 수 있는 비 계를 생산 가능 하다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
방법 논문
* These authors contributed equally
여기, 우리는 열 nanoimprinting 통해 그라데이션 nanopattern 판의 제조와는 nanostructures 인간의 내 피 조상 세포의 응답을 검사 하는 방법에 대 한 프로토콜을 제시. 설명 된 기술을 사용 하 여 물리적 자극에 의해 셀 동작을 조작할 수 있는 비 계를 생산 가능 하다.
Nanotopography 다양 한 세포 외 매트릭스 (ECMs) 몸 주위에서 찾을 수 있습니다 그리고 세포 반응에 중요 한 규제 조치를 알려져 있습니다. 그러나,는 nanostructure의 크기와 적절 한 검사 도구의 부족으로 인하여 세포의 응답 사이의 관계를 결정 하기가 어렵습니다. 여기, 우리가 세포 응답의 조작에 대 한 재현 가능 하 고 비용 효율적인 그라데이션 nanopattern 번호판의 개발을 보여줍니다. 마스터 금형, 증가 직경 범위 [120-200 nm (GP 120/200), 200-280 nm (GP 200/280), 280-360 nm (GP 280/360)]의 nanopillars 그라데이션 nanopattern 접시로 양극 알루미늄 산화물 (AAO)을 사용 하 여 열 기술을 각 인에 의해 조작 했다. 이 그라데이션 nanopattern 번호판 nanotopography ECM에서의 다양 한 크기를 모방 하도록 설계 되었습니다 그리고 인간 내 피 식민지 형성 세포 (hECFCs)의 응답에 사용 되었다. 이 프로토콜에서 우리 세포 공학, 인간 주변 혈액에서 hECFCs를 재배 하 고 hECFCs nanopattern 접시에 배양의 기술에 대 한 그라데이션 nanopattern 번호판 조작의 단계별 절차를 설명 합니다.
최근, 표면 지형의 물리적 자극에 의해 세포의 응답 세포 공학1,2,,34의 분야에서 각광 되어 있다. 따라서, 더 많은 관심은 셀 첨부 파일 표면5에서 3 차원 nanostructures에 집중 되었습니다. Integrin은 세포의 표면 인식 장치, 메카노 변환6ECM의 마이크로-나노 구조에 의해 구동 하는 물리적 자극 전송으로 보고 되었습니다. 이 기계적인 자극 연락처 안내7 셀 동작을 조절 하 고 초점 유착 및 강성8셀 모양을 변경 하려면 cytoskeletal 개편을 유도 한다.
본문에서 인간의 내 피 조상 세포 (hEPCs) 주변 ECM9의 microenvironment와 밀접 하 게 상호 작용합니다. 이 혈액 흐름10에서 파생 된 전단 응력으로 ECM의....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
이 연구는 고려 대학교 안 암 병원 (IRB No.에서 기관 검토 위원회에 의해 승인 되었다 ED170495)입니다. 모든 절차는 헬싱키 선언 및 나중의 개정에 따라 실행 되었다.
1. 알루미늄 (Al) 전해 연마에 의해 기판의 준비
주의: 연마 솔루션 부식성 이며 독성이 있습니다. 니트 릴 장갑, 고글 및 실험실 외 투를 포함 한 개인 보호 장비를 착용 하십시오. 증기 두건에서이 단계를 수행 합니다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
그림 1 에서는 그들의 형식 및 위치에 따라 조작된 그라데이션 AAO 금형의 SEM 이미지. 그림 2 는 일반 둥근 nanopillars와 그라데이션 nanopattern 플레이트의 SEM 이미지 이며 그림 3 nanopillar 직경의 정량화 데이터. 표 1 조작된 nanopillars의 특성을 나열합니다.
그림 4A 혈액 파생 된 hECFCs의 재배의 계획을 보여 줍니다. 그림 4B 쇼 thecultivated hECFCs의 위상.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
종종는 AAO의 제조 결함 균열, 모 공, 그리고 굽기의 불규칙 한 형태에서에서 겪고 있다. 이러한 결함에 대 한 주요 이유 알루 되 고 금속 기판의 자연과 전해질21의 저항력에 의해 강하게 영향을 전해 쇠 약을 이라고 합니다. 전해질의 저항력의 온도 따라 다르며, 전극에서 지속적으로 열 제거 이므로 이러한 높은 전압 아노다이징 조건에서 안정적으로 전해질의 locational 온도 유지 하기 위해 중요 한 포인트. 이 프로토콜에서 우리는 마스 다의 2 단계 양극22,23를 수정 하 여 AAO 금형 조작. 메 틸 알코올로 거의 절반 전해질을 대체 뿐만 아니라 전해질 낮은 온도에서 동결 하는 것을 방지 하지만 또한 아래쪽 공24의 증발에 의해 전극의 열을 빼앗아. 자력 교 반기 대신 오버 헤드 교 반기와 임 펠 러를 사용 하는 이유는 온도 제어.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
저자는 공개 없다.
이 작품은 기본적인 과학 연구 프로그램을 통해 국가 연구 재단의 한국 (NRF)는 교육, 과학 및 기술 (MEST) [NRF-2015R1D1A1A01060397] 및 바이오 의료 기술 개발 자금에 의해 지원 되었다 과학기술부, 정보 통신 및 미래 계획 [NRF-2017M3A9C6029563]에 의해 투자 하는 NRF의 프로그램.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 과염소산 60% | 대정화학& 금속 | 6512-4100 | |
| 에틸 알코올, 절대 99.9 % | 대정 화학 & 금속 | 4118-4100 | |
| 인산 85% | 대정화학& 금속 | 6532-4400 | |
| 메틸알코올 99.5% | 대정화학& 금속 | 5558-4400 | |
| Chromium(VI) oxide | Daejung Chemicals & 금속 | 2558-4400 | |
| 황산 95% | 대정화학& 금속 | 7781-4100 | |
| 과산화수소 30% | 대정화학& 금속 | 4104-4400 | |
| n-헥산 95% | 대정화학& 금속 | 4081-4400 | |
| 톨루엔 99.5% | 대정화학& 금속 | : 8541-4400 | |
| (heptadecafluoro-1,1,2,2, -tetrahydrodecyl) dimethylchlorosilane | Gelest | SIH5840.4 | 수분 민감성 |
| 메톡시노나 플루오로 부탄 99 % | Sigma aldrich | 464309 | |
| 콜라겐 용액 | Stemcell | # 4902 | |
| Gelatin | Sigma aldrich | G1890 | 단백질 코팅 용액 |
| Ficoll-Paque | GE Heathcare | 17-1440-03 | 친수성 다당류 용액 |
| EGM-2MV | Lonza | CC-3202 | 내피 세포 확장 매체 |
| 페니실린-스트렙토마이신 | Gibco | 15140-122 | |
| 인산염 완충 식염수 | Gibco | 10010031 | |
| 소 태아 혈청 | Gibco | 12483-020 | |
| 파라포름알데히드 | 시그마 알드리치 | P6148 | |
| 글루타르알데히드 | 시그마 알드리치 | G5882-100ML | |
| 오스뮴 테트록사이드 | 시그마 알드리치 | 201030-1G | |
| 헥사메틸디실라잔 | 시그마 알드리치 | 440191 | |
| 트리톤 X-100 | 시그마 알드리치 | X100-100ML | 옥틸페놀 에톡실레이트 |
| 염소 세럼 | Gibco | 26050-088 | |
| 항인간 빈쿨린 1차 항체 | Sigma aldrich | V9131 | |
| F-actin 프로브 | 분자 프로브 | A12379 | 형광 결합 팔로이딘 |
| Alexa Fluor 488 결합 안티-마우스 IgG 항체 | 분자 프로브 | A11001 | 형광 접합 2차 항체 |
| 4',6-디아미디노-2-페닐린돌 | Sigma aldrich | D9542 | |
| 장착 매체 | DAKO | S3023 | |
| Anti-human vWF primary antibody | DAKO | A0082 | |
| 반인간 CD144 1차 항체 | BD 생명과학 | #555661 | |
| Eponate 12™ 임베딩 키트, BDMA | Ted Pella | 18012 | 에폭시 수지 |
| 우라닐 아세테이트, 25g | Ted Pella | 19481 | |
| 납 구연산염, 삼수화물, 10g | Ted Pella | 19312 | |
| 초순수 알루미늄 플레이트 | Goodfellow | 26050-088 | |
| 폴리스티렌 시트 | Goodfellow | ST313120 | |
| 8.0" 실리콘 웨이퍼 | Siltron 포함 | 29-01024-03 | 단면 광택, 725 &마이크로; m 두께 |
| 의 진공 데시케이터, 4.4 L | Kartell | KA.230 | |
| 진공 펌프 | 진공 청소기 | V3. VOP100 | |
| 전원 공급 장치 | Unicorntech | UDP-3003 | |
| 자기 교반기 | Daihan Scientific | SL 벽지 | |
| 오버 헤드 교반기 | Daihan scientific | HT120DX | |
| Circulator | Daihan scientific | WCR-P12 | |
| 선형 이동 단계 | Zaber | A-LSQ300A-E01-KT07 | |
| 앵글 브래킷, 90도 | Zaber | AB90M | 선형 이동 단계 PMP |
| forcep의 액세서리, 145mm | Vitlab | 67995 | 비금속 핀셋 |
| PTFE 비커, 250mL | Cowie | CW007.25 | |
| 초음파 세척기 | Branson | B2510MTH | |
| PCB 절단기 | Hozan 도구 산업용 | K-110 | |
| 나노 임프린트 장치 | Nanonex | NX-2000 | |
| 산소 플라즈마 발생기 | Femto Science | CUTE | |
| 저온 살균기 | Lowtem | Crystal 50 | |
| CO2 인큐베이터 | Panasonic | MCO-18AC | |
| Confoal 레이저 스캐닝 현미경 | Carl Zeiss | LSM700 | |
| 주사 전자 현미경 | JEOL | JSM6701 | |
| 투과 전자 현미경 | Hitachi | H-7500 |
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.