Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल पूरे माउस थायरॉयड ग्रंथि को देखने और एनाप्लास्टिक थायराइड कार्सिनोमा के विकास की निगरानी के लिए उच्च आवृत्ति अल्ट्रासोनोग्राफी का वर्णन करता है।
Abstract
एनाप्लास्टिक थायराइड कार्सिनोमा (एटीसी) एक खराब रोग का निदान और कम औसत जीवित रहने के समय से जुड़ा हुआ है, लेकिन कोई प्रभावी उपचार परिणामों में काफी सुधार नहीं करता है। आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मुराइन मॉडल जो एटीसी की प्रगति की नकल करते हैं, शोधकर्ताओं को इस बीमारी के उपचार का अध्ययन करने में मदद कर सकते हैं। चूहों के तीन अलग-अलग जीनोटाइप को पार करते हुए, एक टीपीओ-सीआरई / ईआरटी 2; ब्रैफसीए / Trp53 त्रिभुज 2-10/त्रिभुज 2-10 ट्रांसजेनिक ATC मॉडल विकसित किया गया था। एटीसी मुराइन मॉडल को ब्रैफवी 600 ई के ओवरएक्प्रेशन और टीआरपी 53 के विलोपन के साथ टैमोक्सीफेन के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा प्रेरित किया गया था, और ट्यूमर लगभग 1 महीने के भीतर उत्पन्न हुए थे। ट्यूमर दीक्षा और प्रगति की जांच के लिए उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासाउंड लागू किया गया था, और ट्यूमर के आकार को मापकर गतिशील विकास वक्र प्राप्त किया गया था। चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) और कंप्यूटेड टोमोग्राफी स्कैनिंग की तुलना में, अल्ट्रासाउंड में एटीसी मुराइन मॉडल को देखने में फायदे हैं, जैसे कि गैर-आक्रामक, पोर्टेबल, वास्तविक समय में और विकिरण जोखिम के बिना। उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासाउंड गतिशील और कई मापों के लिए उपयुक्त है। हालांकि, चूहों में थायरॉयड की अल्ट्रासोनोग्राफिक परीक्षा के लिए प्रासंगिक शारीरिक ज्ञान और अनुभव की आवश्यकता होती है। यह लेख ट्रांसजेनिक एटीसी मॉडल में ट्यूमर को स्कैन करने के लिए उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासाउंड का उपयोग करने के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया प्रदान करता है। इस बीच, अल्ट्रासोनिक पैरामीटर समायोजन, अल्ट्रासाउंड स्कैनिंग कौशल, संज्ञाहरण और जानवरों की वसूली, और अन्य तत्व जिन्हें प्रक्रिया के दौरान ध्यान देने की आवश्यकता होती है, सूचीबद्ध हैं।
Introduction
हालांकि एनाप्लास्टिक थायराइड कार्सिनोमा (एटीसी) थायराइड कैंसर के 2% से कम के लिए जिम्मेदार है, यह सालाना 50% से अधिक थायराइड कैंसर से संबंधित मौतों का कारण बनता है। एटीसी के साथ निदान के बाद औसत जीवित रहने का समय केवल 6 महीने है, और कोई उपचार उपलब्ध नहीं है जो अस्तित्वमें काफी सुधार करता है 1,2.
एटीसी की दुर्लभता ने अनुसंधान में बाधा डाली है कि बीमारी कैसे शुरू होती है और आक्रामक रूप से प्रगति करती है। आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल जो बीमारी की नकल करते हैं, हाल ही में उपलब्ध हो गए हैं, जो रोग में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं और संभावित उपचार 3,4,5 के लिए इसकी प्रतिक्रियाएं प्रदान करते हैं। इस तरह के अध्ययनों को माप और निगरानी के लिए सटीक ट्यूमर इमेजिंग की आवश्यकता होती है, जो आमतौर पर चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग, कंप्यूटेड टोमोग्राफी, या उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासोनोग्राफी 6,7 का उपयोग करके किया जाता है। अल्ट्रासोनोग्राफी का व्यापक रूप से माउस अंगों में उपयोग किया गया है। इसमें चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग और कंप्यूटेड टोमोग्राफी पर फायदे हैं क्योंकि यह वास्तविक समय में किया जा सकता है और विषय को विकिरण के संपर्क में नहीं लाता है, और आवश्यक उपकरण पोर्टेबल 8,9 होने के लिए पर्याप्त छोटा है। हालांकि, अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके एटीसी विकास की लगातार निगरानी पर अध्ययन दुर्लभ हैं; इसलिए, यह काम इस संदर्भ में अल्ट्रासाउंड की उपयोगिता की पड़ताल करता है।
यहां, एटीसी के माउस मॉडल में ट्यूमर को सटीक रूप से स्कैन, मॉनिटर और मापने के लिए उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासोनोग्राफी का उपयोग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
वर्तमान अध्ययन सिचुआन विश्वविद्यालय की पशु देखभाल और उपयोग समिति से अनुमोदन के साथ किया गया था। टीपीओ-सीआरई / ईआरटी 2; ब्रैफसीए / इस अध्ययन में Trp53 त्रिभुज 2-10/त्रिभुज 2-10 ट्रांसजेनिक चूहों10 का उपयोग किया गया था ( सामग्री की तालिका देखें)। यदि आवश्यक हो तो प्रोटोकॉल चरणों को विभिन्न पशु प्रजातियों के लिए संशोधित किया जा सकता है। यहां 93 दिनों की औसत आयु के साथ छह महिलाओं और छह पुरुषों सहित बारह चूहों का उपयोग किया गया था।
1. प्रायोगिक तैयारी
- अल्ट्रासोनोग्राफी सिस्टम चालू करें ( सामग्री की तालिका देखें) और छवियों को कैप्चर करने और डेटा एकत्र करने के लिए एक नया फ़ोल्डर बनाएं। 40 मेगाहर्ट्ज लाइन जांच का चयन करें और सतही ऊतक ट्रांसड्यूसर को सक्रिय करने के लिए सतही ऊतक पैटर्न पर क्लिक करें। थायराइड इमेजिंग के लिए "बी-मोड" का उपयोग करें (चित्रा 1 ए)।
नोट: बी-मोड मूल अल्ट्रासाउंड इमेजिंग मोड है। अल्ट्रासाउंड छवियों की उपस्थिति शरीर में ऊतकों के साथ ध्वनि की शारीरिक बातचीत पर निर्भर करती है। बी-मोड छवियों को ग्रे छवियों11,12 के रूप में उत्पादित किया जाता है। - चूहों को भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ विशिष्ट पिंजरों में रखें। थर्मोरेग्यूलेशन सुनिश्चित करने के लिए पिंजरे को पूरक हीटिंग डिवाइस ( सामग्री की तालिका देखें) पर रखें।
- वेपोराइज़र में पर्याप्त आइसोफ्लुरेन और टैंक में ओ2 सुनिश्चित करें। यदि आपूर्ति अपर्याप्त है, तो टैंकों को नए के लिए बदल दें।
- बाँझ खारा के साथ पशु इमेजिंग प्लेटफ़ॉर्म को साफ करें और हीटिंग बटन पर स्विच करें। पशु को मंच पर रखने से पहले सत्यापित करें कि तापमान 38-40 डिग्री सेल्सियस है (चित्रा 1 सी)।
2. इमेजिंग के लिए पशु तैयारी
- आइसोफ्लुरेन वेपोराइज़र पर स्विच करें। माउस को पिंजरे से एनेस्थेटिक बॉक्स में स्थानांतरित करें।
- वेपोराइज़र से 1% -2% आइसोफ्लुरेन के मिश्रण का उपयोग करके जानवर को एनेस्थेटाइज करें और 0.8 एल / मिनट पर ऑक्सीजन प्रवाहित करें।
- छाती से गर्दन तक डिपिलेटरी क्रीम लागू करें, 30 सेकंड प्रतीक्षा करें, और फिर क्रीम और फर को पूरी तरह से मिटा दें। गर्म बाँझ खारा के साथ क्षेत्र और आसपास के फर को अच्छी तरह से कुल्ला करें।
- एनेस्थेटाइज्ड जानवर को गर्म मंच पर रखें। संज्ञाहरण आउटलेट से जुड़े नाक शंकु के साथ स्नूट को कवर करें (चित्रा 2 ए, बी)।
नोट: माउस को 1-2 मिनट के भीतर पूरी तरह से बेहोश किया जाना चाहिए। यदि जानवर अभी भी सक्रिय है, तो लंबे समय तक आइसोफ्लुरेन प्रेरण करें जब तक कि जानवर अब पेडल वापसी रिफ्लेक्स नहीं दिखाता है। सुनिश्चित करें कि जानवर स्थिर रूप से सांस ले रहा है। - इमेजिंग के दौरान, गर्म मंच के माध्यम से माउस की हृदय गति की निगरानी करें।
नोट: अल्ट्रासोनोग्राफी इमेजिंग सिस्टम हृदय गति मॉनिटर से लैस है। - माउस के अंगों को गर्म मंच पर ठीक करने के लिए चिपकने वाला टेप का उपयोग करें, जिसमें जानवर लापरवाह स्थिति में हो। सुनिश्चित करें कि नाक शंकु एक निरंतर एनेस्थेटिक गैस प्रवाह (1.5 एल / मिनट) के साथ स्थिर रूप से स्थित है।
- नेत्र मरहम लगाकर आंखों की रक्षा करें।
3. ट्यूमर इमेजिंग
- रिज़ॉल्यूशन को अनुकूलित करने के लिए इमेजिंग सिस्टम को समायोजित करें। निम्नलिखित पैरामीटर सेट करें: द्वि-आयामी लाभ, 25-30 डीबी; छवि की गहराई, 10 मिमी; फोकल क्षेत्रों की संख्या, 3; और केंद्र, 3-6 मिमी।
नोट: वर्तमान अध्ययन के लिए, एक 40 मेगाहर्ट्ज जांच का उपयोग किया गया था। डेटा अधिग्रहण के लिए बी-मोड निर्दिष्ट किया गया था। - नंगे त्वचा के क्षेत्र में उदारतापूर्वक अल्ट्रासाउंड जेल ( सामग्री की तालिका देखें) लागू करें।
- जांच को पकड़ें और इसे छाती पर अल्ट्रासाउंड जेल के संपर्क में रखें, और फिर थायराइड का पता लगाने के लिए छाती से गर्दन की ओर स्कैन करें (चित्रा 2 सी)।
नोट: स्कैन करते समय धीरे से दबाव लागू करें; जानवर की गर्दन पर अत्यधिक दबाव से हांफना या एपनिया हो सकता है। यह प्रोटोकॉल हैंडहेल्ड स्कैनिंग के आधार पर विकसित किया गया था, लेकिन मशीनीकृत स्कैनिंग को जांच का मार्गदर्शन करने के लिए एक मशीन का उपयोग करके भी किया जा सकता है, जैसे कि एक पशु इमेजिंग प्लेटफॉर्म जो एक्स- और वाई-अक्षों के साथ चलता है। - ट्यूमर की सीमाओं की पहचान करने और इसके आकार और आकार का आकलन करने के लिए ऊपर और नीचे स्कैन करें।
नोट: एक स्वस्थ थायरॉयड आमतौर पर श्वासनली के सामने एक हाइपोइकोजेनिक, सजातीय संरचना के रूप में दिखाई देता है। एनाप्लास्टिक ट्यूमर थायराइड को बहुत बड़ा दिखाई देता है, जिसे आसानी से गर्दन स्कैनिंग (चित्रा 3) द्वारा पहचाना जा सकता है। - शारीरिक स्थान और अल्ट्रासाउंड प्रतिध्वनि के आधार पर श्वासनली और पट्टा मांसपेशियों से एटीसी ट्यूमर की पहचान करें।
नोट: पट्टा मांसपेशियां थायरॉयड और श्वासनली के सामने, साथ ही थायराइड के पीछे स्थित हैं। स्ट्रैप मांसपेशियों की अल्ट्रासाउंड प्रतिध्वनि एटीसी की तुलना में अधिक दिखाई देती है, जबकि श्वासनली13 के पीछे क्षीणन मौजूद है।- कुल ट्यूमर की छाप के आधार पर, सबसे बड़े बाएं से दाएं ट्यूमर व्यास के साथ छवि अनुभाग की पुष्टि करें। फ्रीज बटन दबाएं, और अल्ट्रासाउंड कैलिपर का उपयोग करके एंटेरोपोस्टीरियर और बाएं-से-दाएं ट्यूमर व्यास को मापें।
नोट: एंटेरोपोस्टीरियर व्यास को बाएं से दाएं ट्यूमर व्यास (चित्रा 4) के लंबवत मापा जाना चाहिए। एटीसी के ट्यूमर के आकार की गणना बाएं से दाएं ट्यूमर व्यास14 से एंटेरोपोस्टीरियर व्यास को गुणा करके की गई थी। चूंकि बाईं और दाईं ओर ट्यूमर का आकार असंगत था, ट्यूमर के प्रत्येक पक्ष की गणना अलग-अलग की गई थी। ट्यूमर का कुल आकार द्विपक्षीय ट्यूमर को जोड़कर प्राप्त किया गया था। एटीसी के विकास वक्र का निरीक्षण करने के लिए आकार दर्ज किए गए थे।
- कुल ट्यूमर की छाप के आधार पर, सबसे बड़े बाएं से दाएं ट्यूमर व्यास के साथ छवि अनुभाग की पुष्टि करें। फ्रीज बटन दबाएं, और अल्ट्रासाउंड कैलिपर का उपयोग करके एंटेरोपोस्टीरियर और बाएं-से-दाएं ट्यूमर व्यास को मापें।
- रिकॉर्डिंग को सिने लूप के रूप में सहेजें, जो चयनित छवियों की समीक्षा की सुविधा प्रदान करता है।
4. पशु वसूली
- स्कैन करने के बाद, अल्ट्रासाउंड जेल को पोंछ दें और जानवर के अंगों से निरोधक टेप को हटा दें।
- माउस को पूरक हीटिंग डिवाइस पर रखें (चरण 1.2)। जानवर को उसके किनारे पर रखें (चित्र 2 डी)।
- माउस ठीक होने के बाद (~ 5 मिनट), इसे पिंजरे में वापस स्थानांतरित करें।
- एक नरम कपड़े और आइसोप्रोपिल अल्कोहल या ग्लूटार्ल्डिहाइड वाइप्स का उपयोग करके अल्ट्रासोनोग्राफी सिस्टम, जांच और मंच को साफ करें।
- इमेजिंग सिस्टम बंद करें।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
अध्ययन की शुरुआत में औसत दाएं एटीसी आकार 4.867 मिमी 2 था, और औसत बाएं एटीसी आकार 5.189 मिमी2 था। चौथे माप पर, औसत दाएं एटीसी आकार 11.844 मिमी 2 तक बढ़ गया था, जबकि बाएं लोब का ट्यूमर आकार 9.280 मिमी2 तक बढ़ गया था। कुल एटीसी आकार 10.057 मिमी 2 से बढ़कर 15.843 मिमी2 हो गया। अध्ययन के बाद के चरण में, एटीसी तेजी से बढ़ा। "पी 9 2" (तालिका 1) लेबल वाले माउस के संदर्भ में, चौथे माप पर ट्यूमर का आकार प्रारंभिक माप पर आकार से लगभग चार गुना बड़ा हो गया था। चार चूहों के प्रतिनिधि माप और विकास वक्र चित्र 5 में दिखाए गए हैं।
उच्च आवृत्ति अल्ट्रासोनोग्राफी इमेजिंग साधन है जिसका उपयोग अक्सर मनुष्यों में थायरॉयड ग्रंथियों की जांच के लिए किया जाता है, और तकनीक चूहों के लिए भी अच्छी तरह से अनुकूल लगती है। यह पूरे माउस थायरॉयड ग्रंथि और थायरॉयड घाव के विकास के विवरण की कल्पना कर सकता है। उच्च आवृत्ति अल्ट्रासोनोग्राफी की विधि को लागू करने के इस प्रोटोकॉल का उपयोग एटीसी के आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में ट्यूमर को सटीक रूप से स्कैन, निगरानी और मापने के लिए किया जा सकता है।
चित्र 1: वर्तमान अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले उपकरण । (ए) उच्च आवृत्ति अल्ट्रासोनोग्राफी प्रणाली। (बी) प्रयोगशाला आपूर्ति: (1) इलेक्ट्रिक हीटिंग कंबल। (2) पेपर तौलिए। (3) अल्ट्रासाउंड जेल। (4) आइसोफ्लूरेन वेपोराइज़र। (5) डेपिलेटरी क्रीम। (6) कपास के फाहे। (7) कैंची। (8) चिपकने वाला टेप। (9) चिकित्सा दस्ताने। (10) संज्ञाहरण प्रेरण के लिए कक्ष। (11) संज्ञाहरण प्रणाली। (सी) अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के लिए एक यंत्रीकृत स्कैनिंग प्रणाली। पूरी तरह से बेहोश माउस को गर्म मंच (हरे रंग में दिखाया गया) पर रखा गया था, और स्कैनिंग जांच को एक सटीक मूवेबल आर्म से जोड़ा गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 2: माउस की तैयारी और अल्ट्रासाउंड स्कैन। (बी) गर्म मंच पर जानवर को ठीक करना और संज्ञाहरण रखरखाव। (सी) एक फ्रीहैंड विधि के साथ अल्ट्रासाउंड स्कैनिंग। (डी) इलेक्ट्रिक हीटिंग कंबल पर जानवर की वसूली। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: ऑर्थोटोपिक एटीसी ट्यूमर माउस मॉडल की अल्ट्रासाउंड छवियां। हरी रेखा श्वासनली को सीमांकित करती है, लाल रेखा एटीसी ट्यूमर को सीमांकित करती है, और पीली रेखा पट्टा मांसपेशियों को सीमांकित करती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: ट्यूमर के आकार की गणना। ट्यूमर के आकार की गणना बाएं से दाएं ट्यूमर व्यास (सफेद रेखा) से एंटेरोपोस्टीरियर व्यास (नारंगी रेखा) को गुणा करके की गई थी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: माउस मॉडल में ऑर्थोटोपिक एटीसी विकास का अनुदैर्ध्य विश्लेषण । (ए) दाएं थायराइड लोब। (बी) बाएं थायराइड लोब। (सी) संपूर्ण थायराइड। प्रत्येक वक्र चार बार मापा गया एक जानवर से मेल खाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| खजूर | 2021.08.24 | 2021.09.16 | 2021.10.19 | 2021.11.19 | |
| लेबल | स्थान | ट्यूमर का आकार (मिमी2) | |||
| P71 | दाएँ | 6.39 | 6.688 | 6.327 | 8.461 |
| बाएँ | 6.461 | 6.419 | 6.984 | 8.6 | |
| कुल | 12.851 | 13.107 | 13.311 | 17.062 | |
| P85 | दाएँ | 5.962 | 7.318 | 7.057 | 7.352 |
| बाएँ | 6.809 | 7.165 | 8.514 | 30.836 | |
| कुल | 12.711 | 14.483 | 15.571 | 38.188 | |
| P89 | दाएँ | 4.423 | 5.423 | 5.988 | 8.911 |
| बाएँ | 4.872 | 5.949 | 7.183 | 7.016 | |
| कुल | 9.296 | 11.372 | 13.172 | 15.928 | |
| P92 | दाएँ | 3.593 | 3.509 | 3.769 | 6.734 |
| बाएँ | 2.724 | 4.033 | 5.39 | 19.97 | |
| कुल | 6.317 | 7.542 | 9.159 | 26.704 | |
तालिका 1: ट्यूमर आकार माप पर डेटा। "पी 71", "पी 85", "पी 89", और "पी 9 2" चूहों के लेबल का प्रतिनिधित्व करते हैं। दाएं: दाईं ओर के ट्यूमर का आकार। बाएं: बाईं ओर के ट्यूमर का आकार। कुल: द्विपक्षीय ट्यूमर को जोड़कर कुल ट्यूमर का आकार। पहली पंक्ति में ट्यूमर का आकार (मिमी2: वर्ग मिलीमीटर) और माप की तारीख शामिल है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
यह प्रोटोकॉल आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में ऑर्थोटोपिक एटीसी ट्यूमर का विश्लेषण करने के लिए उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासोनोग्राफी का उपयोग करता है। ट्रांसजेनिक मॉडल, टीपीओ-सीआरई / ईआरटी 2 के जीनोटाइप के साथ; ब्रैफसीए / Trp53 त्रिभुज 2-10/त्रिभुज 2-10, हमारी प्रयोगशाला में विकसित किया गया था। जानवर ब्राफवी 600 ई को ओवरएक्सप्रेस करते हैं और टीआरपी 53 की कमी होती है; जानवरों को इंट्रापरिटोनियल रूप से टैमोक्सीफेन के साथ इंजेक्ट करने से लगभग 1 महीने10 के बाद ट्यूमर का विकास होता है। ट्यूमर तेजी से बढ़ते हैं और 50 दिनों के भीतर एक औसत दर्जे के आकार तक पहुंच जाते हैं। इस प्रोटोकॉल का उपयोग 4 महीने के लिए ट्यूमर के विकास की निगरानी के लिए किया गया था।
अल्ट्रासोनोग्राफी इमेजिंग ऊतकों के लिए चूहों में विश्वसनीय साबित हुई है जो यकृत, थायरॉयड और भ्रूण9 सहित मानव ऊतकों के समान शरीर के स्थानों पर कब्जा करते हैं। मनुष्यों की तरह, माउस थायराइड थायरॉयड उपास्थि और श्वासनली13 के प्रत्येक तरफ स्थित है। प्रस्तुत प्रोटोकॉल थायराइड में एटीसी ट्यूमर के विश्लेषण की अनुमति देता है, जिससे ट्यूमर दीक्षा, प्रगति और उपचार की प्रतिक्रिया का अध्ययन संभव हो पाता है। माउस मॉडल में थायराइड ट्यूमर काफी बड़ा हो गया और श्वासनली और पट्टा मांसपेशियों के आसपास की जगह पर कब्जा कर लिया। उन्होंने अल्ट्रासाउंड में ठोस-सिस्टिक विशेषताएं दिखाईं, कूपिक संरचनाओं के समान। अल्ट्रासोनोग्राफी की गैर-इनवेसिवनेस, छोटी अवधि और सुविधा इसे चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग या कंप्यूटेड टोमोग्राफी8 की तुलना में कई शोध समूहों के लिए अधिक आकर्षक बना सकती है। चूंकि लंबी बेहोशी या संज्ञाहरण अवधि अनावश्यक है, अल्ट्रासोनोग्राफी के फायदे अनुदैर्ध्य अध्ययन की सुविधा प्रदान कर सकते हैं।
स्कैनिंग के दौरान पर्याप्त अल्ट्रासाउंड जेल लागू करना एयर पॉकेट को खत्म करने के लिए महत्वपूर्ण है जो इमेजिंग को प्रभावित कर सकता है और अत्यधिक संपीड़न से बचने के लिए जो एपनिया का कारण बन सकता है। यह प्रोटोकॉल नियमित रूप से अनुभवी अल्ट्रासोनोग्राफी विशेषज्ञों द्वारा हमारी प्रयोगशाला में किया जाता है जो फ्रीहैंड स्कैनिंग करते हैं। फ्रीहैंड स्कैनिंग को एक मशीनीकृत मंच के लिए पसंद किया जाता है क्योंकि यह जानवर की स्थिति के अनुसार अल्ट्रासाउंड जांच की स्थिति को समायोजित करने में लचीलेपन की अनुमति देता है। एक यंत्रीकृत मंच का उपयोग करते समय, जानवर पर अत्यधिक संपीड़न को रोकने के लिए एक्स- और वाई-निर्देशांक को समायोजित किया जाना चाहिए। परिणामों से पता चला कि ट्यूमर शुरुआती अवधि में धीरे-धीरे बढ़े, लेकिन 60 वें दिन से, ट्यूमर नाटकीय रूप से तेजी से विकसित हुए, और अधिकतम ट्यूमर का आकार 38.188 मिमी2 था। मौत का प्रमुख कारण अंतिम चरण में दम घुटना था। नैदानिक परीक्षणों में, एटीसी ट्यूमर की दुर्लभता के कारण, विकास की प्रक्रिया और तंत्र का निरीक्षण करने के लिए पर्याप्त नमूने एकत्र करना मुश्किल है। एटीसी घावों की विधि को मुराइन मॉडल में बेहतर देखा जा सकता है। भविष्य में, ये नमूने नैदानिक उपचार के लिए अधिक जानकारी प्रदान कर सकते हैं।
अल्ट्रासाउंड इमेजिंग की एक सीमा यह है कि एटीसी ट्यूमर की इकोजेनेसिटी आसपास के ऊतकों के समान हो सकती है, इस प्रकार ट्यूमर मार्जिन को कम कर सकती है, खासकर एक अभी भी छवि में। हालांकि, इन मार्जिन को गतिशील कंट्रास्ट का उपयोग करके पहचाना जा सकता है, इसलिए बाद के विश्लेषण के लिए इस अध्ययन में गतिशील छवियों को सहेजा गया था। सबसे सटीक और विश्वसनीय परिणाम सुनिश्चित करने के लिए, जांच को विभिन्न कोणों से पूरे थायरॉयड और ट्यूमर की कल्पना करने के लिए विभिन्न तरीकों से तैनात किया जाना चाहिए। इस अध्ययन में, केवल एक अल्ट्रासोनोग्राफर ने सभी माप किए, इसलिए विभिन्न परीक्षकों के बीच विश्वसनीयता माप का मूल्यांकन नहीं किया गया था।
यह प्रोटोकॉल जानवरों में एटीसी ट्यूमर का पता लगाने और मापने के लिए उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासोनोग्राफी के उपयोग की सुविधा प्रदान कर सकता है, इस प्रकार कैंसर की शुरुआत, प्रगति और उपचार के विस्तृत अध्ययन के लिए मार्ग प्रशस्त कर सकता है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों के पास घोषित करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।
Acknowledgments
इस शोध को सार्वजनिक, वाणिज्यिक या गैर-लाभकारी वित्त पोषण एजेंसियों से कोई विशिष्ट अनुदान नहीं मिला।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Adhesive tape | Winner | ||
| Anesthesia system | RWDlifescience | ||
| Brafflox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Chamber for anesthesia induction | RWDlifescience | ||
| Cotton swabs | Winner | ||
| Depilatory cream | Veet | ||
| Electric heating blanket | Petbee | ||
| Isoflurane vaporizer | RWDlifescience | ||
| Medical gloves | Winner | ||
| Paper towels | Breeze | B914JY | |
| TPO-cre/ERT2 mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Trp53flox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Ultrasound gel | Keppler | KL-250 | |
| Ultrasound machine | VisualSonics | Vevo 3100 |
References
- Maniakas, A., et al. Evaluation of overall survival in patients with anaplastic thyroid carcinoma, 2000-2019. JAMA Oncology. 6 (9), 1397-1404 (2020).
- Molinaro, E., et al. Anaplastic thyroid carcinoma: From clinicopathology to genetics and advanced therapies. Nature Reviews Endocrinology. 13 (11), 644-660 (2017).
- Champa, D., Di Cristofano, A. Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse. Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).
- Vitiello, M., Kusmic, C., Faita, F., Poliseno, L. Analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the Braf/Pten genetically engineered mouse model of melanoma. Journal of Visualized Experiments. (175), e62527 (2021).
- Wang, Y., et al. Low intensity focused ultrasound (LIFU) triggered drug release from cetuximab-conjugated phase-changeable nanoparticles for precision theranostics against anaplastic thyroid carcinoma. Biomaterials Science. 27 (1), 196-210 (2018).
- Mohammed, A., et al. Early detection and prevention of pancreatic cancer: Use of genetically engineered mouse models and advanced imaging technologies. Current Medicinal Chemistry. 19 (22), 3701-3713 (2012).
- Wege, A. K., et al. High resolution ultrasound including elastography and contrast-enhanced ultrasound (CEUS) for early detection and characterization of liver lesions in the humanized tumor mouse model. Clinical Hemorheology and Microcirculation. 52 (2-4), 93-106 (2012).
- Greco, A., et al. Preclinical imaging for the study of mouse models of thyroid cancer. International Journal of Molecular Sciences. 18 (12), 2731 (2017).
- Renault, G., et al.
- McFadden, D. G., et al. p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (16), 1600-1609 (2014).
- Garassini, M.
- Aldrich, J. E.
- Mancini, M., et al. Morphological ultrasound microimaging of thyroid in living mice. Endocrinology. 150 (10), 4810-4815 (2009).
- Ying, M., Yung, D. M., Ho, K. K. Two-dimensional ultrasound measurement of thyroid gland volume: a new equation with higher correlation with 3-D ultrasound measurement. Ultrasound in Medicine & Biology. 34 (1), 56-63 (2008).
