마우스에 프로그램된 전기 자극을

마취된 마우스는 누운 자세로 가열 보드에 테이프로 붙입니다. 우측 경정맥을 분리하고 정맥의 근위부 끝을 묶습니다. 1.1 프렌치 OC 무극성 카테터를 정맥에 삽입한 다음 카테터를 우심방과 우심실로 전진시킵니다.

마지막으로, 정맥의 말단부를 묶어 카테터 위치를 고정하고 출혈을 방지합니다. 안녕하세요, 저는 베일러 의과대학 분자생리학 및 생물물리학과 Zver 박사 연구실의 Naali입니다. 오늘은 생쥐의 전기 자극을 프로그래밍하는 절차를 보여 드리겠습니다.

우리는 실험실에서 이 절차를 사용하여 생쥐의 유도성 부정맥을 연구합니다. 시작하겠습니다. 캐뉼레이션 삽입 및 카테터 삽입 수술 전에 이발기를 사용하여 마취된 마우스의 목선에서 가슴 중간 높이까지 털을 면도합니다.

10%포비돈 요오드로 수술 부위를 소독합니다. 마우스를 누운 자세로 놓고 팔다리를 ECG 전극 Incorporated에 테이프로 붙입니다. 가열 보드에서는 열 분석기 시스템으로 제어되는 가열 패드에 연결된 직장 온도 프로브가 포함된 시스템을 사용하여 체온이 섭씨 37도 이상 또는 영하 1도로 유지되는 시스템을 권장합니다.

견인 핀치로 마우스가 완전히 마취되었음을 확인한 후, 쇄골 높이의 코달 말단이 있는 정중선 오른쪽으로 반 인치를 절개합니다. 둔기 박리로 피하 조직, 타액선, 림프 조직을 분리합니다. 오른쪽 경정맥을 시각화하려면 정맥의 근위 끝을 6개의 봉합사로 묶습니다.

시각화된 세그먼트의 원위 끝에 있는 정맥 아래에 다른 봉합사를 놓습니다. 이제 표면 ECG를 기록하기 위해 컴퓨터 기반 데이터 수집을 시작하십시오. 녹음 모드에서 카테터를 외부 자극기에 연결합니다.

그런 다음 마이크로 가위를 사용하여 정맥의 세로 방향으로 작게 절개하면서 근위 봉합사를 부드럽게 당깁니다. 정맥을 곧게 유지하려면 정맥을 통해 1.1 프렌치 옥토 풀러 카테터를 우심방과 심실로 전진시킵니다. 적절한 카테터 위치는 우심실의 정점, 우심실의 기저부, 심방심실 결절 및 우심방의 수준에서 4개의 심장 내 심전도의 파형을 시각화하여 검증되며, 최종적으로 원위 봉합사를 묶어 카테터 위치를 고정하고 심방 페이싱으로 인한 출혈을 방지합니다.

심방 내부에 위치한 전극 쌍은 기록 모드에서 자극 모드로 전환되고 다른 전극 쌍은 기록 모드를 유지합니다. 마우스가 심방 부정맥에 대한 취약성이 증가했는지 여부를 확인하기 위해 우심방에 프로그래밍된 전기 자극이 수행됩니다. 먼저, 자극 캡처의 일관성을 테스트하기 위해 서로 다른 기본 사이클 길이 또는 BCL에서 최소 52밀리초의 전류 펄스를 적용하여 심방 페이싱 임계값을 결정합니다.

초기 펄스 트레인의 BCL은 고유 BCL보다 약간 낮으며 10밀리초 감소합니다. 자극 캡처에 필요한 일반적인 전류 진폭은 100-200마이크로암페어입니다. 100밀리초의 BC에서 15초 심방 페이싱 트레인을 적용한 후, 페이싱 트레인의 마지막 자극과 첫 번째 자발적 부비동 박동의 시작 사이의 간격으로 정의되는 부비동 노드 회복 시간 또는 SNRT를 측정합니다.

심방 유효 불응 기간 또는 ERP를 결정하기 위해 고정 BCLS 1에서 일련의 심방 페이싱 트레인을 적용하고 두 개의 더 짧은 조기 자극 S 2를 적용합니다. S 1에서 S 2 간격은 각 자극 프로토콜 사이에 최소 30초의 회복 주기와 함께 각 페이싱 트레인에서 70밀리초에서 20밀리초로 점진적으로 2밀리초씩 감소합니다. A ERP는 S 2로 전파된 비트를 생성하지 못한 아트리아에 대해 가장 긴 S 1 to S 2 커플링 간격으로 정의됩니다.

심방 페이싱 트레인 및 조기 자극의 유사한 적용은 심방심실 노드 AV NERP의 유효 불응 기간을 결정하는 데 사용됩니다. AV NERP는 심방에 전달되는 조기 자극 후에 히스 전위가 뒤따르는 가장 긴 S 1 to S 2 커플링 간격으로 정의되지만, QRS 복합체는 그렇지 않습니다. 심방세동을 포함한 심방 부정맥의 유도 가능성은 일련의 2초 파열이 적용되는 버스트 페이싱 프로토콜을 사용하여 테스트할 수 있습니다.

처음 2초 버스트는 40밀리초의 사이클 길이 또는 CL을 가지며, 각 연속 2초 버스트는 최종 CL 20밀리초까지 이전 버스트보다 2밀리초 짧은 CL을 갖습니다. 모든 페이싱 프로토콜이 완료되면 데이터 수집이 중지됩니다. 말단 EP 연구의 경우, 매듭을 부드럽게 풀어 카테터를 풀어줍니다.

여기에서는 마우스의 대표적인 표면 ECG 및 심장 내 근전도를 보여줍니다. 이 표면 ECG는 분당 약 540회의 빈도로 규칙적인 부비동 리듬을 보여줍니다. 이 다음 4개의 심전도는 우심방 수준에서 양극성 심장내 심전도 기록을 보여줍니다.

심방심실결절(atrial ventricular node), 우심실(right ventricle)의 기저부, 우심실의 정점(tope. 심장 내(intracardiac)는 우심방 수준에서 기록되는 적전도의 파동이 표면의 P파에 해당합니다. CCG. 심실 유전도의 V파는 표면 CCG의 QRS파에 해당합니다.

다음으로 대표적인 표면 CCG 및 심장내 근전도와 심방 파열 후 심방세동이 발생한 마우스가 표면에서 페이싱을 하는 것을 보여줍니다. CCG, RR 간격이 불규칙하고 명백한 P파가 없습니다. 반면에, 심방 심전도는 심방세동과 일치하는 불규칙한 빠른 심방 신호를 보여줍니다.

심실 유전도는 표면 리드 RR 간격과 유사한 느린 주파수를 가지고 있습니다. 이 절차를 수행 할 때 마우스의 전기 자극을 프로그래밍하는 방법을 보여 주었으므로 광범위한 출혈을 피하고 체온을 36-37도의 정상 범위 내로 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 또한, Asof Florin에 대한 노출을 최소화하는 것이 더 높은 농도로 2시간 이상 노출되면 마우스의 심장 및 호흡 기능을 억제할 수 있으므로

따라서 모든 시작을 2시간 이내에 복잡하게 만드는 것이 좋습니다. 그게 다야. 지켜봐 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.