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- 시작하려면 페트리 접시에 슬릿이 있는 젖은 스펀지를 놓습니다. 다음으로, 트리카인 용액으로 성어를 마취하고 복부 쪽이 위를 향하도록 하여 조심스럽게 슬릿으로 옮깁니다. 페트리 접시를 실체 현미경 아래에 놓고 피부 아래에서 박동하는 심장의 움직임을 관찰합니다.
수술실과 가슴 띠 사이에 위치한 박동하는 심장 위의 신체 축에서 45도 각도로 민크로주입 바늘을 배치합니다. 피부를 통해 바늘을 심장을 둘러싸고 있는 얇은 막인 심낭으로 부드럽게 밀어 넣습니다. 주사 혼합물을 심낭에 전달합니다.
샷에는 용액 이동을 추적하기 위해 페놀 레드와 같은 트레이서 염료가 포함되어 있습니다. 흉부에서 바늘을 빼냅니다. 물고기를 시스템 물이 들어 있는 회수 탱크로 즉시 옮기고 마취에서 완전히 회복되는지 모니터링합니다. 다음 프로토콜에서는 흉곽 내 주사를 수행하여 테스트 화합물을 전달하고 심장 재생에 미치는 영향을 조사합니다.
- 그물을 사용하여 성인 물고기를 잡고 마취액에 옮깁니다. 1-2분 후 물고기가 수영을 멈추고 수술의 움직임이 줄어들면 플라스틱 숟가락으로 물고기를 만져 어떤 접촉에도 반응하지 않는지 확인하십시오. 다음으로, 배쪽이 위로 향하게 하여 젖은 스펀지의 홈으로 물고기를 빠르고 조심스럽게 옮깁니다. 물고기의 머리는 작업자의 지배적인 손에서 멀어져야 합니다.
실체 현미경으로 물고기의 피부 아래에서 박동하는 심장의 움직임을 주의 깊게 관찰하십시오. 육안적으로, 박동하는 심장 위와 복부 연골 판(ventral cartilaginous plates)에 의해 정의된 삼각형의 중간에 있는 주입 지점을 결정합니다. 모세관 끝을 몸체 축을 기준으로 30도에서 45도 사이의 각도로 삽입합니다. 미세모세혈관 끝으로 피부를 심낭으로 부드럽게 침투시킵니다.
바늘이 심낭 안에 들어가면 마이크로인젝터 장치의 페달을 눌러 주입을 완료합니다. 주입 후 흉부에서 모세 혈관을 부드럽게 빼내고 즉시 물고기를 시스템 물이 있는 탱크로 옮겨 회수합니다. 마취에서 완전히 회복될 때까지 물고기를 모니터링하십시오. 주사의 효과를 분석하려면 원하는 시점에 심장을 채취하여 추가 분석을 위해 준비합니다.
