종양 세포 침입 분석: 상피-중간엽 세포 상호 작용을 평가하기 위한 3D 체외 네이티브 매트릭스 기반 방법

- 분석을 시작하기 위해 먼저 아스코르브산이 보충된 섬유아세포 현탁액을 웰 플레이트에 피펫팅하고 배양합니다. 아스코르브산은 섬유아세포 증식을 증가시킵니다. 또한 천연 ECM 성분의 분비를 자극하여 증식하는 세포를 두꺼운 세포외 기질에 내장합니다.

플레이트 표면에서 매트릭스를 부드럽게 분리하고 매체에 떠 있게 합니다. 기질은 더 많은 기질 증착 및 리모델링으로 수축하고 두꺼워져 천연 진피와 유사한 조직을 생성합니다. 다공성 메쉬에 매트릭스를 펼칩니다. 다음으로, 상피암 세포를 기질 위에 파종하고 세포가 정착하여 부착될 수 있도록 배양합니다.

어셈블리를 접시에 미리 조립된 메쉬 플랫폼으로 옮깁니다. 매트릭스의 맨 아래 층을 보완하는 매체를 추가하여 위의 세포에 대한 공기-액체 계면을 생성합니다. 배양 중에 계면은 종양 세포의 증식과 분화를 촉진합니다. 세포는 또한 ECM을 분해하는 프로테아제를 분비하여 기질로의 이동 및 침입을 용이하게 합니다.

다음 프로토콜에서는 원발성 기질 섬유아세포에서 유래한 네이티브 매트릭스에서 피부 편평 세포 암종 세포를 사용하는 침습 분석을 시연합니다.

- 갓 준비된 L-아스코르브산 2-인산염이 보충된 섬유아세포 배지의 6-웰 플레이트에 웰당 200,000개의 섬유아세포를 파종하는 것으로 시작합니다. 2-3일마다 2-5ml의 신선한 배지를 세포에 재공급합니다. 육안으로 볼 수 있는 세포외 기질에 내장된 두꺼운 세포층이 6주가 지나면 형성됩니다. 사용된 세포에 따라 보이는 기질은 조만간 형성될 수 있으며 여기에서 볼 수 있듯이 접시에서 분리되기 시작할 수 있습니다.

조직 배양 플레이트에서 이 층을 분리하려면 1ml 마이크로피펫 팁으로 매트릭스의 둘레를 부드럽게 긁어낸 다음 매트릭스의 가장자리를 웰 중앙으로 밉니다. 세포와 네이티브 매트릭스는 플레이트 표면에서 쉽게 분리되어야 하며 이제 매체에 떠 있어야 합니다.

네이티브 매트릭스를 미디어 내에서 펼쳐서 그 자체로 접히지 않도록 합니다. 기본 매트릭스를 5일 동안 띄우고 리모델링하고 2-3일마다 미디어를 계속 교체합니다. 인장 강도와 고유 리모델링으로 인해 매트릭스는 급격히 수축하고 더 작지만 더 두꺼운 네이티브 매트릭스로 축소되어 침입 분석에 사용할 준비가 됩니다.

침입 분석의 경우, 먼저 뭉툭한 집게를 사용하여 네이티브 매트릭스를 나일론 그물로 부드럽게 옮깁니다. 그물에 닿으면 1ml 마이크로피펫 팁과 뭉툭한 집게를 사용하여 매트릭스를 가