시험관 내 식물-미생물 상호 작용을 모방하기 위해 식물 뿌리 삼출물을 사용한 박테리아 처리

식물 성장을 촉진하는 뿌리박테리아인 Bacillus mycoides의 스톡 배양액을 배양 플레이트에 줄무늬로 만듭니다.

박테리아가 콜로니로 증식하도록 플레이트를 배양합니다.

단일 콜로니를 액체 배지에 접종하고 진압하면서 배양하여 박테리아 성장을 촉진합니다.

분석을 위한 최적의 밀도를 달성하기 위해 액체 배지를 사용하여 배양액을 희석합니다.

식물-미생물 상호 작용을 모방하기 위해 감자 뿌리 삼출물을 배양액에 추가합니다.

교반과 함께 배양하여 신호 분자와 박테리아 수용체의 상호 작용을 촉진합니다.

이 상호 작용은 DNA에 결합하고 유전자 발현을 변경하는 조절 단백질을 활성화하는 신호 전달 경로를 유도합니다.

배양액을 튜브로 옮기고 박테리아 세포를 펠릿으로 회전시킵니다.

상청액을 버리고 튜브를 액체 질소에 담가 세포를 급속 동결합니다.

세포를 저장하여 박테리아 유전자 발현의 식물 뿌리 삼출액 유발 변화를 분석합니다.

박테리아를 성장시키려면 섭씨 영하 80도의 글리세롤 스톡에서 B. mycoides 균주를 LB 한천 플레이트에 줄무늬로 만들고 플레이트를 섭씨 30도에서 밤새 배양합니다. 그런 다음 LB 액체 배지에 플레이트의 단일 콜로니를 접종하고 섭씨 30도에서 밤새 200rpm의 흔들기 인큐베이터에서 배양액을 성장시킵니다.

박테리아를 처리하고 샘플링하려면 300밀리리터 플라스크에서 90밀리리터의 예열된 LB 배지로 하룻밤 B . mycoides 배양액을 0점 05의 초기 OD₆₀₀ 으로 희석합니다. 그 후, 10밀리리터의 뿌리 삼출물을 배양액에 첨가하고 10밀리리터의 멸균 탈이온수 처리를 대조군으로 사용합니다. 그런 다음 섭씨 30도에서 1시간 동안 배양합니다.

한 시간 후, 배양물을 50밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 섭씨 4도에서 2분 동안 9,000배 G에서 원심분리하여 배양액에서 세포를 수집합니다. 그런 다음 상층액을 버리고 즉시 펠릿을 액체 질소에 동결시킵니다.

그런 다음 사용할 때까지 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오.