수단 IV 염색: 수확된 마우스 대동맥궁에서 지질이 함유된 죽상경화성 플라크를 염색하는 절차

죽상동맥경화증은 동맥 내벽에 지단백질이 축적되어 플라크가 축적되고 동맥이 두꺼워

플라크는 평활근 세포와 세포외 기질이 있는 섬유질 캡으로 구성되며, 염증 세포와 함께 저밀도 지단백질, LDL(콜레스테롤 에스테르와 트리글리세리드의 소수성 코어가 있는 구형 입자)으로 구성된 코어를 둘러싸

지질이 풍부한 죽상동맥경화반을 시각화하려면 갓 수확한 마우스 대동맥궁을 얻습니다. 광역 이미징 중 대비를 개선하기 위해 어두운 배경 맞춤형 플랫폼으로 전송합니다. 조직 탈수를 방지하기 위해 완충액을 첨가하십시오.

잘못된 배경 염색을 방지하기 위해 대동맥궁을 둘러싼 혈관주위 지방 조직을 제거합니다. 대동맥과 그 가지를 내강을 통해 세로로 절개하여 죽상동맥경화반이 축적된 가장 안쪽 표면을 노출시킵니다.

열린 대동맥궁을 플랫폼에 고정하고 에탄올에서 배양합니다. 에탄올은 조직에서 물을 대체하여 단백질을 비활성화하고 조직 구조를 보존합니다.

유기 용매에 용해된 수단 IV 염색제로 치료하십시오. 플라크 내에서 지단백질의 트리글리세리드 및 콜레스테롤 에스테르에 대한 친화력이 높은 지용성 디아조 염료인 수단 IV는 유기 용매 상에서 이동하여 LDL의 소수성 지질 코어에 결합하여 안정적인 복합체를 형성합니다. 에탄올을 사용하여 여분의 얼룩을 씻어냅니다.

실체 현미경으로 염색된 지질이 풍부한 죽상동맥경화반은 주황색-빨간색으로 보이고 플라크가 아닌 부분은 창백하게 보입니다.

en 얼굴 분석을 위한 피닝 베드를 준비하려면 파라핀 왁스 필름 조각을 8번 접어 평평한 25 x 25mm 표면을 만들고 필름 주위에 검은색 전기 절연 테이프를 감아 대동맥의 어두운 배경을 만듭니다.

고정 침대 뒷면에 라벨을 붙이고 연필로 마우스 식별 번호를 적어둡니다. 대동맥궁을 고정 침대로 옮기고 PBS 한 방울을 조직에 추가합니다. 실체현미경을 사용하여 남은 외막주위 지방 조직에서 대동맥을 청소하고 Vannas 가위와 Dumont 집게를 사용하여 대동맥을 조작하거나 손상시키지 않고 주변 지방 조직을 모두 부드럽게 벗겨냅니다.

다음으로, Vannas 가위를 대동맥 내강에 삽입하여 내막 표면을 노출시킵니다. 상강 아치의 외부 곡률을 원위 방향으로 절단하기 시작하고 상완두부 동맥을 포함한 가지를 계속 절단하고 하행 흉부 영역의 등쪽 부분을 아끼십시오.

내막 표면을 표시하려면 작은 곡률을 자르고 대동맥을 접습니다. 마이크로 Castroviejo 바늘 홀더를 사용하여 시편을 늘리지 않고 미세한 곤충 핀의 뭉툭한 끝으로 열린 아치를 고정하고 조직이 제자리에 고정되면 핀을 시편에서 부드럽게 구부립니다. 그런 다음 고정된 아치를 밑면이 아래로 향하도록 PBS 페트리 접시에 섭씨 4도에서 보관합니다.

수단 IV 염색의 경우, 아치가 아래를 향하도록 70% 에탄올이 담긴 페트리 접시에서 검체를 5분 동안 헹구고 검체를 수단 IV 작업 용액 접시에 7분 동안 옮깁니다.

배양이 끝나면 80% 에탄올에서 3분 동안 두 번 세척하여 샘플을 헹구어 정상적인 내막 표면의 얼룩을 제거한 후 PBS로 최종 헹구고 조직을 원래의 페트리 접시로 되돌립니다. 그런 다음 디지털 카메라에 연결된 실체 현미경으로 10X 배율로 현미경 사진을 획득하고 작은 금속 무게를 사용하여 고정 베드를 페트리 접시 바닥에 고정하여 PBS에 잠긴 고정된 아치의 이미지를 얻습니다.