숙주 모기 유래 포자동물을 이용한 실험적 뇌성 말라리아의 마우스 모델 생성

말라리아를 유발하는 기생충인 Plasmodium berghei 에 감염된 암컷 모기의 침샘이 들어 있는 튜브로 시작하십시오.

선균을 기계적으로 파괴하여 기생충의 감염성 형태인 포자체를 배지로 방출합니다.

땀샘 분획과 파편을 펠릿으로 만듭니다. 포자소이트 함유 상청액을 수집하여 구속된 마우스의 꼬리 정맥에 주입합니다.

주입된 포자소체는 혈류를 통해 이동하여 간에 도달하여 간세포를 감염시키고 증식하여 기생충의 침습 형태인 메로조이트를 형성합니다.

시간이 지남에 따라 간세포는 메로조이트를 혈류로 방출하여 적혈구(RBC)를 침범합니다.

적혈구 내부에서 메로조이트는 무성복제되어 성숙한 형태로 발달하고 적혈구 표면에 기생충 유래 항원을 발현합니다.

이러한 항원은 뇌 혈관을 포함한 내피 수용체에 결합하여 감염된 적혈구와 감염되지 않은 적혈구를 격리합니다.

이러한 비정상적인 적혈구 축적은 혈액-뇌 장벽을 파괴하여 뇌 실질에 체액 축적을 유발하고 마우스에서 뇌 말라리아를 발병시킵니다.

피를 먹은 후 17일에서 22일 후에 암컷 모기를 우리에서 모아내는 것으로 시작합니다. 집게를 사용하여 차가운 RPMI 배지 한 방울로 덮인 유리 슬라이드에 3-4마리의 모기를 놓습니다. 그런 다음 슬라이드를 현미경 아래에 놓습니다.

집게로 모기의 머리와 몸 사이를 조심스럽게 펴고 주사기와 바늘을 사용하여 침샘을 분리합니다. 다음으로, 유리 피펫으로 침샘을 빨아들여 유리 슬라이드에서 침샘을 수집하고 1.5밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 작은 플라스틱 막대기를 사용하여 원심분리기 튜브 내에서 분리된 침샘을 3분 동안 부수어 침샘 조직에서 포자소체를 분리합니다.

씨 4도에서 1,000배 g에서 3분 동안 원심분리하여 나머지 조직에서 포자소체를 정제합니다. 포자소체가 포함된 상청액을 새 원심분리기 튜브에 피펫팅하고 Neubauer 혈구측정기에서 정제된 포자소체를 계산합니다. 포자소체는 전형적인 시계 반대 방향의 움직임을 보입니다.

다음으로, 인산염 완충 식염수를 첨가하여 정제된 포자체의 농도를 밀리리터당 10,000으로 조정합니다. 마지막으로 C57BL6 마우스를 구속기에 넣고 꼬리를 따뜻한 물에 넣어 꼬리 정맥을 더 잘 시각화합니다. 그런 다음 총 1,000개의 포자체 또는 0.1밀리리터를 꼬리 정맥에 주입하여 감염을 시작합니다.